增强的抗HVEM抗体及其应用的制作方法

本发明属于免疫疗法领域。

背景技术：

1、旨在增强免疫反应的免疫疗法被认为是激活免疫疗法并且处于癌症治疗的前沿。目前，免疫检查点封闭疗法成功地被用于晚期非小细胞肺癌(nsclc)、转移性黑素瘤、晚期肾细胞癌(rcc)转移性尿路上皮癌、头颈鳞状细胞癌(hnscc)、高度msi肿瘤(msi-hightumors)、美克耳细胞癌等多种其它癌症的治疗。由不同公司开发和生产的一些此类药物——包括针对免疫检查点程序性细胞死亡蛋白1受体(pd1)、程序性细胞死亡蛋白1配体(pdl1)和细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4(ctla-4)的抗体——已在不同癌症类型中显示出巨大前景并已获得fda批准。然而，患者的反应率仍然不是最佳的，因为通常只有10％至40％的被治疗的患者受益，且同时患者可能会遭受免疫疗法治疗后的副作用。此外，用这些抗体或其抗原结合片段治疗可能会通过另外的免疫检查点的上调诱导耐药性。与单一抗体或其抗原结合片段相比，黑素瘤患者中抗pd1和抗ctla-4疗法的组合显示出更高的反应率(60％)，然而这种组合疗法还涉及严重的治疗相关不良反应。因此，对新的抗肿瘤免疫激活抗体或其抗原结合片段的需求是明确的。

2、疱疹病毒入侵介质(herpesvirus entry mediator)(hvem)是在各种细胞类型(包括造血细胞和非造血细胞)表面上发现的蛋白质。hvem充当经典tnf相关配体(如light和ltα)的受体，因此充当信号传导受体。然而，它也充当免疫球蛋白(ig)超家族分子(如抑制性受体btla和cd160)的配体。因此，双向信号传导对于hvem介导的信号传导网络是可能的，hvem介导的信号传导网络可在不同环境下参与阳性或阴性免疫反应。此网络的调控异常涉及自身免疫性疾病、炎性疾病以及癌症的发病机理，从而使hvem成为免疫疗法的靶标。亟需能够封闭特别是通过btla相互作用的hvem抑制性信号传导，同时保留激活信号传导的抗体或其抗原结合片段。

技术实现思路

0、发明概述

1、本发明提供结合hvem、抑制hvem-btla相互作用和抑制下游btla信号传导的抗体或其抗原结合片段。还提供用这些抗体或其抗原结合片段、编码这些抗体或其抗原结合片段的核酸分子以及包含这些抗体或其抗原结合片段的药盒(kit)治疗疾病的方法。

2、根据第一方面，提供抗体或其抗原结合片段，其包含三个重链cdr(cdr-h)和三个轻链cdr(cdr-l)，其中：cdr-h1包含seq id no:1(syams)中列出的氨基酸序列，cdr-h2包含seq id no:49(x1ix2x3x4x5x18x7x19yyadsvx20g)中列出的氨基酸序列，其中x1是a、g或n，x2是s、n、g或y，x3是g或s，x4是s、n或p，x5是g或p，x18是除c以外的任意氨基酸，x7是s、y、g或r，x19是除s或c以外的任意氨基酸，并且x20是任意氨基酸，并且cdr-h3包含seq id no:18(ax9x10x11x12x13x14yx15dy)中列出的氨基酸序列，其中x9是p或s，x10是g或y，x11是d或r，x12是y、n、p或s，x13是t或y，x14是a或n，并且x15是f、g或y，cdr-l1包含seq id no:4(rasqsvssyla)中列出的氨基酸序列，cdr-l2包含seq id no:5(gassrat)中列出的氨基酸序列，并且cdr-l3包含seq id no:19(qqygsx16ppx17t)中列出的氨基酸序列，其中x16是s或y，并且x17是y或l；并且其中所述抗体或其抗原结合片段不包含下列全部：包含seq id no:2(aisgsggstyyadsvkg)中列出的氨基酸序列的cdr-h2、包含seq id no:3(apgdytayfdy)中列出的氨基酸序列的cdr-h3和包含seq id no:6(qqygssppyt)中列出的氨基酸序列的cdr-l3。

3、根据另一方面，提供药物组合物，其包含本发明的抗体或抗原结合片段以及药学上可接受的载剂、赋形剂或佐剂。

4、根据另一方面，提供治疗有需要的对象中以hvem阳性细胞为特征的疾病或状况的方法，所述方法包括向所述对象施用本发明的药物组合物或本发明的抗体或抗原结合片段，从而治疗所述疾病或状况。

5、根据另一方面，提供确定待通过本发明的方法治疗的对象的适合性的方法，包括从所述对象获得疾病样品和测定所述样品中的hvem水平，其中hvem的阳性表达表明所述对象适合本发明的治疗方法。

6、根据另一方面，提供检测样品中的hvem的方法，所述方法包括将所述样品与本发明的抗体或抗原结合片段接触，从而检测hvem。

7、根据另一方面，提供核酸分子，其编码本发明的抗体或抗原结合片段。

8、根据另一方面，提供药盒，其包含本发明的药物组合物以及下列中的至少一项：

9、a.基于抗pd-1/pd-ll的免疫疗法：

10、b.说明本发明的药物组合物是与基于抗pd-1/pd-ll的免疫疗法一起使用的标签；和

11、c.用于检测至少一种本发明的抗体或其抗原结合片段的第二检测分子(secondary

12、detection molecule)。

13、根据一些实施方式，cdr-h2包含seq id no:17(x1ix2x3x4x5x6x7x21yyadsvx8g)中列出的氨基酸序列，其中x1是a、g或n，x2是s、n、g或y，x3是g或s，x4是s、n或p，x5是g或p，x6是g、d、s、e、q或n，x7是s、y、g或r，x21是t、a、e、g或n，并且x8是e或k。

14、根据一些实施方式，x20是除c或s以外的任意氨基酸。

15、根据一些实施方式，x20是任意非带正电荷的氨基酸。

16、根据一些实施方式，x20是k或e。

17、根据一些实施方式，cdr-h2包含选自下列的氨基酸序列：seq id no:2、seq idno:20(gingngdytyyadsvkg)、seq id no:21(aiggsgsgtyyadsvkg)、seq id no:22(niysnpnrtyyadsveg)、seq id no:23(ningpgngtyyadsveg)、seq id no:47(niysnpnrtyyadsvkg)、seq id no:48(aisgsggstyyadsveg)、seq id no:57(niysnpdrtyyadsveg)、seq id no:58(niysnpertyyadsveg)、seq id no:59(niysnpgrtyyadsveg)、seq id no:60(niysnpqrtyyadsveg)、seq id no:61(niysnpsrtyyadsveg)、seq id no:62(niysnpnrayyadsveg)、seq id no:63(niysnpnreyyadsveg)、seq id no:64(niysnpnrgyyadsveg)和seq id no:65(niysnpnrnyyadsveg)。

18、根据一些实施方式，cdr-h3包含选自下列的氨基酸序列：seq id no:3、seq idno:24(asyrnynygdy)、seq id no:25(asydptnyydy)和seq id no:26(asyrstnyfdy)。

19、根据一些实施方式，cdr-l3包含选自下列的氨基酸序列：seq id no:6和seq idno:27(qqygsypplt)。

20、根据一些实施方式，cdr-h1包含seq id no:1中列出的氨基酸序列，cdr-h2包含选自seq id no:20、seq id no:21、seq id no:22、seq id no:23、seq id no:47、seq id no:48、seq id no:57、seq id no:58、seq id no:59、seq id no:60、seq id no:61、seq idno:62、seq id no:63，seq id no:64和seq id no:65的氨基酸序列，cdr-h3包含seq idno:3中列出的氨基酸序列，cdr-l1包含seq id no:4中列出的氨基酸序列，cdr-l2包含seqid no:5中列出的氨基酸序列，并且cdr-l3包含seq id no:6中列出的氨基酸序列。

21、根据一些实施方式，cdr-h1包含seq id no:1中列出的氨基酸序列，cdr-h2包含seq id no:2中列出的氨基酸序列，cdr-h3包含选自seq id no:24、seq id no:25和seq idno:26的氨基酸序列，cdr-l1包含seq id no:4中列出的氨基酸序列，cdr-l2包含seq idno:5中列出的氨基酸序列，并且cdr-l3包含seq id no:6中列出的氨基酸序列。

22、根据一些实施方式，cdr-h1包含seq id no:1中列出的氨基酸序列，cdr-h2包含seq id no:2中列出的氨基酸序列，cdr-h3包含seq id no:3中列出的氨基酸序列，cdr-l1包含seq id no:4中列出的氨基酸序列，cdr-l2包含seq id no:5中列出的氨基酸序列，并且cdr-l3包含seq id no:27中列出的氨基酸序列。

23、根据一些实施方式，本发明的抗体或抗原结合片段包含重链，所述重链包含选自下列的序列：qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsaisgsggst yyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seq id no:7)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsgingngdy tyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgt lvtvss(seq id no:28)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsaiggsgsgt yyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seq id no:29)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsniysnpnrt yyadsvegrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seq id no:30)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsningpgngt yyadsvegrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seqid no:31)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsniysnpnrt yyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seq id no:50)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsaisgsggst yyadsvegrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seq id no:51)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsniysnpdrt yyadsvegrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seq id no:66)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsniysnpert yyadsvegrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seq id no:67)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsniysnpgrt yyadsvegrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seqid no:68)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsniysnpqrt yyadsvegrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seq id no:69)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsniysnpsrt yyadsvegrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seq id no:70)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsniysnpnra yyadsvegrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seq id no:71)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsniysnpnre yyadsvegrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seq id no:72)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsniysnpnrg yyadsvegrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seqid no:73)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsniysnpnrn yyadsvegrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakapgdytayfdywgqgtl vtvss(seq id no:74)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsaisgsggst yyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakasyrnynygdywgqgtl vtvss(seq id no:32)、qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsaisgsggst yyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakasydptnyydywgqgtl vtvss(seq id no:33)和qvqlvqsggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsaisgsggst yyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakasyrstnyfdywgqgtl vtvss(seq id no:34)。

24、根据一些实施方式，本发明的抗体或抗原结合片段包含轻链，所述轻链包含选自下列的序列：elvltqspatlslspgeratlscrasqsvssylawyqqkpgqaprlliygassratgipd rfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqygssppytfgqgtkveik(seq id no:8)和elvltqspatlslspgeratlscrasqsvssylawyqqkpgqaprlliygassratgipd rfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqygsyppltfgqgtkveik(seq id no:35)。

25、根据一些实施方式，本发明的抗体或抗原结合片段包含重链，所述重链包含选自seq id no:85-103的氨基酸序列。

26、根据一些实施方式，本发明的抗体或抗原结合片段包含轻链，所述轻链包含选自seq id no:104和seq id no:105的氨基酸序列。

27、根据一些实施方式，本发明的抗体或其抗原结合片段包含重链，所述重链包含seqid no:97；和轻链，所述轻链包含seq id no:104。

28、根据一些实施方式，本发明的方法还包括抑制或封闭非hvem免疫检查点蛋白。

29、根据一些实施方式，本发明的方法还包括施用基于抗pd-1/pd-l1的免疫疗法。

30、根据一些实施方式，本发明的方法还包括施用过继性细胞疗法。

31、根据一些实施方式，所述过继性细胞疗法包括过继性til疗法。

32、根据一些实施方式，所述过继性细胞疗法包括施用表达嵌合抗原受体(car)的免疫细胞，其中所述car靶向表达hvem的细胞的表面上的非hvem蛋白。

33、根据一些实施方式，所述疾病或状况是hvem阳性癌症或癌前病变。

34、根据一些实施方式，所述疾病或状况是感染性疾病，并且其中感染的细胞包含hvem表达。

35、根据一些实施方式，hvem的阳性表达包括与健康样品或预定阈值相比升高的hvem水平。

36、通过下文给出的详细描述，本发明进一步的实施方式和全部适用范围将变得明显。然而，应当理解，详细描述和具体实例虽然表明了本发明的优选实施方式，但仅作为示例给出，因为通过此详细描述，在本发明的精神和范围内的各种变化和修改对于本领域技术人员来说将变得明显。