一种花生茎叶中黄酮类成分高效制备方法及应用

本发明涉及活性成分分离提取技术，具体涉及一种花生茎叶中黄酮类成分高效制备方法及应用。

背景技术：

1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、花生茎叶是花生生产中的农业副产物。目前除少部分入药或作为动物饲料、燃料等，大多被丢弃，资源浪费严重。据发明人研究了解，花生茎叶中含有黄酮类、酚酸类、萜类等多种功能活性成分，其活性成分的分离纯化主要采用大孔树脂、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等传统分离技术，存在成本高、耗时长、效率低等问题。

技术实现思路

1、为了解决现有技术的不足，本发明的目的是提供一种花生茎叶中黄酮类成分高效制备方法及应用，能够高速、高效提取大豆苷元、芒柄花黄素。

2、为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

3、一方面，一种花生茎叶中黄酮类成分高效制备方法，包括以下步骤：

4、采用体积分数为94～96％的乙醇对花生茎叶进行加热回流提取，获得花生茎叶粗提物；

5、将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按照体积比为5:4.8～5.2:1.9～2.1:7.6～8.4混合，静置至完全平衡，取上相为固定相，取下相为第一流动相；

6、将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按照体积比为5:4.8～5.2:2.9～3.1:6.6～7.4混合，静置至完全平衡，取下相为第二流动相；

7、将正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按照体积比为5:4.8～5.2:4.8～5.2:4.8～5.2混合，静置至完全平衡，取下相为第三流动相；

8、采用所述固定相通过高速逆流色谱对花生茎叶粗提物进行梯度洗脱分离获得大豆苷元、芒柄花黄素；其中，梯度洗脱分离过程中，依次第一流动相、第二流动相、第三流动相进行。

9、本发明采用高速逆流色谱(high-speed countercurrent chromatography，hsccc)具有节约溶剂、分离时间短、高效等特点，有效解决了传统柱色谱的样品不可逆吸附及变性等问题。然而，研究表明，在从花生茎叶粗提物分离大豆苷元和芒柄花黄素时，采用单个固定相、流动相提取的峰分辨率较差，难以实现大豆苷元和芒柄花黄素的有效分离提取，因而本发明采用上述固定相以及第一流动相、第二流动相、第三流动相进行梯度洗脱分离，能够有效分离出大豆苷元和芒柄花黄素。

10、另外，本发明经过分子对接技术发现大豆苷元、芒柄花黄素均具有促进睡眠的活性。因此，本发明的另一方面，提供了一种花生茎叶中黄酮类成分在制备助睡眠药物中的应用，所述花生茎叶中黄酮类成分为大豆苷元和/或芒柄花黄素。

11、本发明的有益效果为：

12、本发明采用高速逆流色谱技术分离花生茎叶中的黄酮类成分，采用溶剂体系为正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(5:4.8～5.2:1.9～2.1:7.6～8.4，5:4.8～5.2:2.9～3.1:6.6～7.4，5:4.8～5.2:4.8～5.2:4.8～5.2，v/v)进行梯度洗脱，通过多次进样富集和纯化得到两种化合物，经质谱和核磁结构鉴定为大豆苷元和芒柄花黄素。通过分子对接分析大豆苷元和芒柄花黄素对失眠相关的两种蛋白受体均有较好的亲和力，主要存在氢键相互作用力，具有助睡眠的潜在活性。

技术特征：

1.一种花生茎叶中黄酮类成分高效制备方法，其特征是，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的花生茎叶中黄酮类成分高效制备方法，其特征是，第一流动相的洗脱时间为55～65h，第二流动相的洗脱时间为55～65h，第三流动相的洗脱时间为55～65h。

3.如权利要求2所述的花生茎叶中黄酮类成分高效制备方法，其特征是，收集115～130min的组分和190～205min的组分。

4.如权利要求1所述的花生茎叶中黄酮类成分高效制备方法，其特征是，固定相、第一流动相、第二流动相、第三流动相在使用前进行超声脱气。

5.如权利要求1所述的花生茎叶中黄酮类成分的提取方法，其特征是，将花生茎叶粗提物等量加入至固定相和第一流动相内，超声溶解。

6.如权利要求1所述的花生茎叶中黄酮类成分高效制备方法，其特征是，花生茎叶晾晒粉碎后加入至体积分数为94～96％的乙醇。

7.如权利要求6所述的花生茎叶中黄酮类成分高效制备方法，其特征是，晾晒粉碎后花生茎叶与体积分数为94～96％的乙醇的料液比为1:18～22，g/ml。

8.如权利要求1所述的花生茎叶中黄酮类成分高效制备方法，其特征是，检测吸光度为250nm。

9.一种花生茎叶中黄酮类成分在制备助睡眠药物中的应用，其特征是，所述花生茎叶中黄酮类成分为大豆苷元和/或芒柄花黄素。

10.如权利要求9所述的花生茎叶中黄酮类成分在制备助睡眠药物中的应用，其特征是，所述助睡眠药物包括活性成分和药用辅料，所述活性成分为上述花生茎叶中黄酮类成分。

技术总结
本发明涉及活性成分分离提取技术，具体涉及一种花生茎叶中黄酮类成分高效制备方法及应用。利用固定相依次采用第一流动相、第二流动相、第三流动相进行通过高速逆流色谱对花生茎叶粗提物进行梯度洗脱分离获得大豆苷元、芒柄花黄素；固定相为正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水(5:4.8～5.2:1.9～2.1:7.6～8.4)的上相，第一流动相为正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水的下相，第二流动相为正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水(5:4.8～5.2:2.9～3.1:6.6～7.4)的下相，第三流动相为正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水(5:4.8～5.2:4.8～5.2:4.8～5.2)的下相。本发明能够高速、高效提取大豆苷元、芒柄花黄素。

技术研发人员：姜晨旭,王岱杰,刘雨芊,李孟璇,崔莉,邹业飞,魏代磊,李鹏,程伟
受保护的技术使用者：齐鲁工业大学（山东省科学院）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13