一株促进蓝莓生长的深色有隔DSE真菌及其应用

本发明属于农业微生物，涉及一株促进蓝莓生长的深色有隔dse真菌及其应用。

背景技术：

1、蓝莓(vaccinium uliginosum)为杜鹃花科(ericaceae)越橘属(vaccinium)蓝果类型植物的俗称。野生蓝莓在世界各地广泛分布。主产于美国，在中国主要分布于大兴安岭和小兴安岭林区。蓝莓作为一种具有较高经济价值和保健功能的新兴水果，栽培面积得到了较大的发展。但是当前大多数种植者普遍缺乏设施栽培蓝莓种植经验，当蓝莓出现生长不良或异常时，往往是因其缺少充足的氮磷钾等大量元素，但大量化肥的施用会导致土壤、水源污染及生态环境恶化。

2、蓝莓属于浅根系、无根毛植物，自然条件下常与共生真菌形成互惠共生关系，共生真菌具有增强植物生长势，改良根系环境以及增强植物对病虫害的抵抗能力等作用。利用蓝莓根部共生真菌进行蓝莓根腐病的防治研究是蓝莓根腐病绿色防控的重要内容。深色有隔dse真菌(dark septate endophytes,dse)，是植物内生菌的主要类群，其特征是与植物根系共生后可形成颜色深且具有明显横隔的菌丝结构，在植物细胞内及细胞间隙形成“微菌核(microsclerotia)结构。dse定殖于健康植物根系的表皮、皮层甚至维管组织的细胞间空间，形成共生体，但不会在健康根组织内形成病原菌所引起的病理学特征。dse具有广泛的宿主范围和生态分布特性，主要分布在干旱、寒冷和重金属污染地区，以及特殊生境和特色植物中，没有宿主特异性，适应性强。dse可能具有类似菌根真菌的功能，能与宿主建立互惠共生关系，在促进植物生长、改善矿物质吸收和生物病害控制以及增强植物抗逆性方面发挥着重要作用。

3、土壤中存在许多具有解磷特性的微生物，它们可以将植物难以吸收利用的磷转化为可吸收利用的形式，改善植物磷素营养，还能促进土壤中有益微生物的代谢活动。目前对蓝莓真菌菌株的报道有很多，其中现有专利有(cn107083335a)和(cn107129935a)报道过蓝莓dse菌株,其中(cn107083335a)的dse菌株是针对组培苗的快速生根，而(cn107129935a)的dse菌株是针对提高蓝莓的抗旱作用，促进生长。但是，这两篇专利分离得到的菌株均无解磷效果。而本技术分离得到的菌株具有溶解磷的功能，能促进提高蓝莓实生根的生长。

技术实现思路

1、本发明的目的在于，提供一株dse真菌fl1及其在促进蓝莓生长中的应用。本发明的dse真菌fl1具有溶解磷的功能，以达到促进蓝莓对磷的吸收，促进蓝莓根际生长的作用。

2、本发明的技术方案：

3、一株促进蓝莓生长的深色有隔dse真菌fl1，所述的dse真菌fl1分类学名为thozetella neonivea，于2022年11月08日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为cgmcc no.40412。

4、前述的dse真菌fl1的组织分离方法，所述dse真菌fl1的组织分离方法按照如下步骤进行：

5、(1)清洗消毒：选取表面健康无病斑的蓝莓的根部，用清水洗净后滤纸控干，移至超净工作台里，置于在75％乙醇溶液中浸泡，用无菌水冲洗，转入5％naclo溶液中消毒，再用无菌水润洗，使用已灭菌的滤纸控干根段的水分，用已灭菌的剪刀与镊子将处理好的根段剪成0.4-0.6cm长度，得到a品；

6、(2)培养分离纯化：将a品夹入已灭菌且已加入适量氯霉素的pda培养基中，置于恒温培养箱培养，待培养皿内有深色菌丝长出后，将边缘菌丝挑到新的pda培养皿中继续培养，重复3-6次后即可得到纯培养菌株，得到dse真菌fl1。

7、前述步骤(1)中，清洗消毒：选取表面健康无病斑的5-8年生蓝莓的根部，用清水洗净后滤纸控干，移至超净工作台里，置于在75％乙醇溶液中浸泡30s，用无菌水冲洗2-3次，转入5％naclo溶液中消毒3min，再用无菌水润洗5次，使用已灭菌的滤纸控干根段的水分，用已灭菌的剪刀与镊子将处理好的根段剪成0.45-0.55cm长度，得到a品；

8、前述步骤(2)中，培养分离纯化：将a品夹入已灭菌且已加入0.1g氯霉素的pda培养基中，置于恒温培养箱培养，28℃条件下避光培养，待培养皿内有深色菌丝长出后，将边缘菌丝挑到新的pda培养基中继续培养，重复3-5次后即可得到纯培养菌株，得到dse真菌fl1。

9、前述步骤(2)中，pda培养基由200g马铃薯、20g葡萄糖和20g琼脂溶于1000ml水中制成，ph自然。

10、一种包含权利要求1所述的dse真菌fl1的促蓝莓生长剂。

11、前述的dse真菌fl1的应用，所述dse真菌fl1在制备促进蓝莓根际生长的制剂方面的应用。

12、一种蓝莓生长促生菌制品，所述制品的活性成分包括前述的dse真菌fl1。

13、一种蓝莓生长促生菌制品，所述制品的活性成分是前述的dse真菌fl1。

14、一种蓝莓生长促生菌制品的制备方法，采用前述的dse真菌fl1作为制备所述制品的活性成分或活性成分之一。

15、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

16、1、本发明公开了一株dse真菌fl1及其在促进蓝莓生长中的应用，利用组织分离法对的蓝莓根部的dse真菌fl1行分离培养，dse真菌fl1回接至蓝莓盆栽苗的定殖，可使得蓝莓苗的总定殖率达到86.67％，定殖强度达到29％。

17、2、dse真菌fl1通过溶磷效果测定结果表明，该菌株为dse真菌fl1具有较高的溶解磷的能力，以pko液体培养基作为基础培养基，第5d达到最大值391.62μg/ml,第七天降到48.17μg/ml。不仅能提高蓝莓苗磷含量，还能提高蓝莓苗的氮和钾含量，使得蓝莓苗的磷含量由8.21g/kg提高到10.6g/kg，氮含量由5.6g/kg提高到9.43g/kg，钾含量由8.08g/kg提高到9.08g/kg。

18、3、蓝莓dse真菌fl1可提高蓝莓苗的可溶性糖和可溶性蛋白，使蓝莓苗地上部分可溶性糖达到19.49mg/g，地下部分达到6.88mg/g；使蓝莓苗地上部分可溶性蛋白达到21.65mg/g，地下部分达到3.59mg/g。

19、4、蓝莓dse真菌fl1还能提高蓝莓苗的酶活性，酶包括sod、pod和cat，其中使蓝莓苗地上部分sod达到236.14u/g，地下部分达到319.59u/g；使蓝莓苗地上部分cat达到189.48mg/(g·min)，地下部分达到120.99mg/(g·min)；使蓝莓苗地上部分sod达到104.37u/(g·min)，地下部分达到92.59u/(g·min)。

20、5、同时，蓝莓dse真菌fl1能提高蓝莓苗根围土壤养分及酶活性。

21、综上所述，本发明的蓝莓dse真菌fl1具有高效溶解磷的功能，提高蓝莓根围土壤有机质、全氮、全磷、速效磷和土壤酶活性(sod酶、pod酶和cat酶)，在蓝莓生长促生，开发成微生物菌剂的潜力大，且该菌为溶磷dse真菌fl1，可以直接使用蓝莓根部组织培养分离而得，无需另外引入菌种。