专利名称：一种用于粪便标本的念珠菌选择培养基及其制备方法
技术领域：
本发明涉及检验微生物培养领域，具体涉及一种用于粪便标本的念珠菌选择培养基。
背景技术：
微生物培养是一种用人工方法使微生物生长繁殖的技术，而选择培养基是用来促进或抑制一定类型的生物体(如细胞或细菌等)而设计的培养基，利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。念珠菌是真菌中最常见的条件致病菌，又称假丝酵母，它常寄生于人的皮肤、口腔、阴道和肠粘膜等处，当机体免疫机能低下或正常寄居部位的微生态环境失调，容易引起念珠菌病。目前念珠菌的临床检验手段主要是革兰染色法，但有20%的念珠菌革兰染色法无法阳性检出。而且如需确定分辨念珠菌的种类，就需要培养，并就其菌落形态特征进行鉴别。但是目前临床所用的真菌类选择培养基主要用于尿、 痰、血液、胆汁、腹水等临床标本的念珠菌分离，如马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基，对于粪便标本中的念珠菌分离率低，其原因多在于粪便中的大肠杆菌等在目前的真菌培养基上比念珠菌生长更快，很快覆盖了培养基，念珠菌无法生长。
发明内容
本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种能够用于粪便标本的， 对念珠菌分离率高的选择培养基。本发明解决其技术问题的技术方案是一种用于粪便标本的念珠菌选择培养基， 其特征在，配制IOOOml培养基的配方中含有
麦芽浸粉3 10g ；
牛心粉10 20g ；
硫酸镁I. 2^2g ；
琼脂15 20g ；
硫酸庆大霉素O. 005^0. 02g ；
苯胺兰O. I O. 4g ；
四水柠檬酸钙O. OfO. 2g ；
蒸馏水加至1000ml。优化方案中，每IOOOml培养基还含有蒜硫胺素O. 05、. 5g。优化方案中，每1000ml培养基还含有甘氨胆酸O. θΓθ. lg。优化方案中，每IOOOml培养基还含有浓度200g/L的红门兰水提液20(T300ml。一种用于粪便标本的念珠菌选择培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤
(1)取红门兰加水煮沸O.5^1小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得红门兰水提液；
(2)取麦芽浸粉、牛心粉、硫酸镁、琼脂、苯胺兰、四水柠檬酸钙、硫酸庆大霉素、蒜硫胺素、甘氨胆酸溶于步骤I所得红门兰水提液中，混匀，蒸馏水定容，121°C，15min灭菌后分装。其中所述的麦芽浸粉、牛心粉提供碳氮源和能量；硫酸镁为缓冲剂，且可以破坏标本中残留的抗真菌菌素；琼脂是培养基的凝固剂；硫酸庆大霉素抑制杂菌生长，提高了念珠菌的分离率；苯胺兰为指示剂；四水柠檬酸钙为缓冲剂和激活剂；蒜硫胺素为营养强化剂，可以促进葡萄糖摄取；甘氨胆酸抑制革兰氏阳性菌生长；红门兰为兰科植物蒙古红门兰的全草，全草含糖类90%，蛋白质2. 5%，脂肪O. 4%，糖类中的80%为粘液质及淀粉，20%的游离糖和粗纤维；在粘液质中分得半乳糖，果糖，甘露糖，木糖及半乳糖醛酸；游离糖中有棉子糖，麦芽糖，蔗糖，葡萄糖及木糖；蛋白质中富含赖氨酸、缬氨酸及棕榈酸在内的15种脂肪酸，其水提液是良好的营养强化剂，并且有抑制肠道杆菌生长的作用。本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、念珠菌分离率高的特点。
具体实施例方式以下结合实际情况，对本发明的具体实施方式
作详细说明。实施例1，配制IOOOml培养基的配方中含有麦芽浸粉3g ;牛心粉20g ;硫酸镁I. 2g ;琼脂15g ;硫酸庆大霉素O. 02g ;苯胺兰O. Ig ;四水柠檬酸钙O. 2g ;蒸馏水加至 1000ml。制备方法取麦芽浸粉、牛心粉、硫酸镁、琼脂、苯胺兰、四水柠檬酸钙、硫酸庆大霉素溶于蒸懼水中，混勻，蒸懼水定容至1000ml, 121 °C, 15min灭菌后分装。实施例2，配制IOOOml培养基的配方中含有麦芽浸粉IOg ;牛心粉IOg ;硫酸镁2g ;琼脂20g ;硫酸庆大霉素O. 005g ;苯胺兰O. 4g ;四水柠檬酸钙O. Olg ;蒸馏水加至 1000ml。制备方法取麦芽浸粉、牛心粉、硫酸镁、琼脂、苯胺兰、四水柠檬酸钙、硫酸庆大霉素溶于蒸懼水中，混勻，蒸懼水定容至1000ml, 121 °C, 15min灭菌后分装。实施例3，配制IOOOml培养基的配方中含有麦芽浸粉3g ;牛心粉20g ;硫酸镁 I. 2g ;琼脂15g ;硫酸庆大霉素O. 02g ;苯胺兰O. Ig ;四水柠檬酸钙O. 2g，蒜硫胺素O. 05g, 甘氨胆酸O. Ig ;蒸馏水加至1000ml。制备方法取麦芽浸粉、牛心粉、硫酸镁、琼脂、苯胺兰、四水柠檬酸钙、硫酸庆大霉素、蒜硫胺素、甘氨胆酸溶于蒸馏水中，混匀，蒸馏水定容至 1000ml, 121 °C，15min 灭菌后分装。实施例4，配制IOOOml培养基的配方中含有麦芽浸粉IOg ;牛心粉IOg ;硫酸镁 2g ;琼脂20g ;硫酸庆大霉素O. 005g ;苯胺兰O. 4g ;四水柠檬酸钙O. Olg，蒜硫胺素O. 5g， 甘氨胆酸O. Olg ;蒸馏水加至1000ml。制备方法取麦芽浸粉、牛心粉、硫酸镁、琼脂、苯胺兰、四水柠檬酸钙、硫酸庆大霉素、蒜硫胺素、甘氨胆酸溶于蒸馏水中，混匀，蒸馏水定容至 1000ml, 121 °C，15min 灭菌后分装。实施例5，配制IOOOml培养基的配方中含有麦芽浸粉6g ;牛心粉15g ;硫酸镁 I. 5g ;琼脂18g ;硫酸庆大霉素O. Olg ;苯胺兰O. 3g ;四水柠檬酸钙O. lg，蒜硫胺素O. 3g， 甘氨胆酸O. 05g ;蒸馏水加至1000ml。制备方法取麦芽浸粉、牛心粉、硫酸镁、琼脂、苯胺兰、四水柠檬酸钙、硫酸庆大霉素、蒜硫胺素、甘氨胆酸溶于蒸馏水中，混匀，蒸馏水定容至 1000ml, 121 °C，15min 灭菌后分装。实施例6，配制IOOOml培养基的配方中含有麦芽浸粉3g ;牛心粉20g ;硫酸镁 I. 2g ;琼脂15g ;硫酸庆大霉素O. 02g ;苯胺兰O. Ig ;四水柠檬酸钙O. 2g，蒜硫胺素O. 05g，甘氨胆酸O. lg，浓度200g/L的红门兰水提液200ml ;蒸馏水加至1000ml。制备方法(I)取 40g红门兰加水煮沸O. 5小时，过滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/L，得红门兰水提液200ml ；(2)取麦芽浸粉、牛心粉、硫酸镁、琼脂、苯胺兰、四水柠檬酸钙、硫酸庆大霉素、蒜硫胺素、甘氨胆酸溶于步骤I所得红门兰水提液中，混匀，蒸馏水定容至1000ml，121 °C，15min灭菌后分装。实施例7，配制IOOOml培养基的配方中含有麦芽浸粉IOg ;牛心粉IOg ;硫酸镁 2g ;琼脂20g ;硫酸庆大霉素O. 005g ;苯胺兰O. 4g ;四水柠檬酸钙O. Olg，蒜硫胺素O. 5g， 甘氨胆酸O. Olg，浓度200g/L的红门兰水提液300ml ;蒸馏水加至1000ml。制备方法(1) 取60g红门兰加水煮沸I小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得红门兰水提液 300ml ; (2)取麦芽浸粉、牛心粉、硫酸镁、琼脂、苯胺兰、四水柠檬酸钙、硫酸庆大霉素、蒜硫胺素、甘氨胆酸溶于步骤I所得红门兰水提液中，混匀，蒸馏水定容至1000ml，12rC,15min 灭菌后分装。实施例8，配制IOOOml培养基的配方中含有麦芽浸粉6g ;牛心粉15g ;硫酸镁 I. 5g ;琼脂18g ;硫酸庆大霉素O. Olg ;苯胺兰O. 3g ;四水柠檬酸钙O. lg，蒜硫胺素O. 3g，甘氨胆酸O. 05g，浓度200g/L的红门兰水提液250ml ;蒸馏水加至1000ml。制备方法(I)取 50g红门兰加水煮沸O. 8小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得红门兰水提液 300ml ; (2)取麦芽浸粉、牛心粉、硫酸镁、琼脂、苯胺兰、四水柠檬酸钙、硫酸庆大霉素、蒜硫胺素、甘氨胆酸溶于步骤I所得红门兰水提液中，混匀，蒸馏水定容至1000ml，12rC,15min 灭菌后分装。本发明所得念珠菌选择培养基用于粪便标本具有检出可靠、念珠菌分离率高的特点，为临床资料充分证明，有关资料如下。I对象与方法。I. I培养基制备共设4组，分别为实施例8方案组、实施例5方案组、实施例2方案组和对照组，对照组为马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基。1.2培养方法采集门诊或住院腹泻患者新鲜粪便，悬浮于5ml O. 9%生理盐水， 用接种环分区划线于分离平板，37°C培养24h，挑取细小菌落进行菌属鉴定。I. 3统计学分析用SPSS 13. O进行统计分析，P〈 O. 05表示有显著性意义。2结果在969份粪便标本，分离并鉴定为念珠菌的，实施例8方案组为167株， 实施例5方案组为158株，实施例2方案组为155株，对照组PDA培养基为124株，经统计学处理，本发明各实施例组与对照组比较具有明显差异(实施例8方案组P=O. 006 ;实施例 5方案组P=O. 029 ;实施例2方案组P=O. 045)。结果表明，本发明实施例念珠菌分离率明显高现有的常用于真菌培养的PDA培养基。
权利要求
1.一种用于粪便标本的念珠菌选择培养基，其特征在，配制IOOOml培养基的配方中含有麦芽浸粉3 10g ；牛心粉10 20g ；硫酸镁I. 2^2g ；琼脂15 20g ；硫酸庆大霉素O. 005^0. 02g ；苯胺兰O. I O. 4g ；四水柠檬酸钙O. 0Γ0. 2g ；蒸馏水加至1000ml。
2.根据权利要求I所述的一种用于粪便标本的念珠菌选择培养基，其特征在于每 IOOOml培养基还含有蒜硫胺素O. 05、. 5g。
3.根据权利要求I所述的一种用于粪便标本的念珠菌选择培养基，其特征在于每 IOOOml培养基还含有甘氨胆酸O. 0Γ0. lg。
4.根据权利要求I所述的一种用于粪便标本的念珠菌选择培养基，其特征在于每 IOOOml培养基还含有浓度200g/L的红门兰水提液20(T300ml。
5.一种制备权利要求4中所述用于粪便标本的念珠菌选择培养基的制备方法,其特征在于包括以下步骤(1)取红门兰加水煮沸O.5^1小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得红门兰水提液；(2)取麦芽浸粉、牛心粉、硫酸镁、琼脂、苯胺兰、四水柠檬酸钙、硫酸庆大霉素、蒜硫胺素、甘氨胆酸溶于步骤I所得红门兰水提液中，混匀，蒸馏水定容，121°C，15min灭菌后分装。
全文摘要
本发明公开了一种用于粪便标本的念珠菌选择培养基及其制备方法。其特征在于，配制1000ml培养基的配方中含有麦芽浸粉3~10g；牛心粉10~20g；硫酸镁1.2~2g；琼脂15~20g；硫酸庆大霉素0.005~0.02g；苯胺兰0.1~0.4g；四水柠檬酸钙0.01~0.2g；蒸馏水加至1000ml。上述药物制备方法为取麦芽浸粉、牛心粉、硫酸镁、琼脂、苯胺兰、四水柠檬酸钙、硫酸庆大霉素、蒜硫胺素、甘氨胆酸溶于红门兰水煮液中，混匀，定容，灭菌后分装。本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、念珠菌分离率高的特点。
文档编号C12Q1/04GK102605037SQ20121005648
公开日2012年7月25日 申请日期2012年3月6日 优先权日2012年3月6日
发明者刘艳, 张伟, 许青 申请人:刘艳