专利名称：胸水a-L-岩藻糖苷酶的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种胸水a-L-岩藻糖苷酶的检测方法。
背景技术：
胸水的形成机制较为复杂。胸水的脱落细胞学检查是金标准，特异性高，但阳性率低。胸水a-L-岩藻糖苷酶(AFU)是一种溶酶体酸性水解酶，广泛存在于哺乳动物的细胞和体液中，其主要生理功能是参与含岩藻糖基的糖蛋白、糖脂等生物活性大分子物质的分解代谢。寻求一种简便实用的胸水a-L-岩藻糖苷酶检测方法是人们长期以来追求的目标。
发明内容
本发明的目的在于提供一种试剂来源方便，方法简便快速，成本低廉的胸水 a-L-岩藻糖苷酶的检测方法。本发明的技术解决方案是一种胸水a-L-岩藻糖苷酶的检测方法，其特征是包括下列步骤(I)将人胸水50 μ I与基质液200 μ I混合放入测定管中，混匀后置于37°C水浴反应60分钟，再与1250 μ I显色液混匀后，在生化分析仪中检测405nm处的吸光度值，为A 测；(2)将人胸水50 μ I与缓冲液200 μ I混合放入对照管中，混匀后置于37°C水浴反应60分钟，再与1250 μ I显色液混匀后，在生化分析仪中检测405nm处的吸光度值，在生化分析仪中检测405nm处的吸光度值，为A# ;(3)将50 μ I标准品与200 μ I基质液混匀后，置于37°C水浴反应60分钟，再与 1250 μ I显色液混匀后，在生化分析仪中检测405nm处的吸光度值，为Aig ；(4)按下列公式得到人胸水a-L-岩藻糖苷酶的活性胸水AFU活性(μ mol/L -h) =(A 测-A 对)/A 标 X 400 ；所述基质液是浓度为400 μ mol/L的对硝基酚_a_L_岩藻糖苷；所述缓冲液是 PH5. 2的醋酸缓冲液；所述显色液是pH 10. 7的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液；所述标准品是浓度为400 μ mol/L的对硝基酚。本发明具有试剂来源方便，方法简便快速，成本低廉的优点，是一个比较理想的检测方法，适合于基层单位的应用。下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施例方式一种胸水a-L-岩藻糖苷酶的检测方法，包括下列步骤(I)将人胸水50 μ I与基质液200 μ I混合放入测定管中，混匀后置于37°C水浴反应60分钟，再与1250 μ I显色液混匀后，在生化分析仪中检测405nm处的吸光度值，为A 测；
(2)将人胸水50 μ I与缓冲液200 μ I混合放入对照管中，混匀后置于37°C水浴反应60分钟，再与1250 μ I显色液混匀后，在生化分析仪中检测405nm处的吸光度值，在生化分析仪中检测405nm处的吸光度值，为A# ;(3)将50 μ I标准品与200 μ I基质液混匀后，置于37°C水浴反应60分钟，再与 1250 μ I显色液混匀后，在生化分析仪中检测405nm处的吸光度值，为Aig ；(4)按下列公式得到人胸水a-L-岩藻糖苷酶的活性胸水AFU活性(μ mol/L -h) =(A 测-A 对)/A 标 X 400 ；所述基质液是浓度为400 μ mol/L的对硝基酚_a_L_岩藻糖苷；所述缓冲液是 PH5. 2的醋酸缓冲液；所述显色液是pH 10. 7的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液；所述标准品是浓度为400 μ mol/L的对硝基酚。其他实施例情况见表I ;其中管号1、2分别是实施例I的测定管和对照管；管号3、 4为一组分别对应测定管和对照管，为对另一标本的检测；管号5、6为一组分别对应测定管和对照管，是对又一标本的检测；空白管为蒸馏水与缓冲液的混合管。表I.胸水AFU测定操作方法表实验过程中每份标本均做自身对照(单位μ 1，
双数管为对照管)
权利要求
1.一种胸水a-L-岩藻糖苷酶的检测方法，其特征是包括下列步骤(1)将人胸水50μ I与基质液200 μ Γ混合放入测定管中，混匀后置于37°C水浴反应60 分钟，再与1250 μ I显色液混匀后，在生化分析仪中检测405nm处的吸光度值，为A测；(2)将人胸水50μ I与缓冲液200 μ I混合放入对照管中，混匀后置于37°C水浴反应60 分钟，再与1250 μ I显色液混匀后，在生化分析仪中检测405nm处的吸光度值，在生化分析仪中检测405nm处的吸光度值，为A# ;(3)将50μ I标准品与200 μ I基质液混匀后，置于37°C水浴反应60分钟，再与1250 μ I 显色液混匀后，在生化分析仪中检测405nm处的吸光度值,为Aig ；(4)按下列公式得到人胸水a-L-岩藻糖苷酶的活性胸水AFU活性(μmol/L · h)= (A 测-A 对)/A 标 X 400 ；所述基质液是浓度为400 μ mol/L的对硝基酚-a-L-岩藻糖苷；所述缓冲液是pH5. 2 的醋酸缓冲液；所述显色液是PH 10. 7的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液；所述标准品是浓度为 400 μ mol/L的对硝基酚。
全文摘要
本发明公开了一种胸水a-L-岩藻糖苷酶的检测方法，分别测定人胸水与基质液混合液的吸光度值、人胸水与缓冲液混合液的吸光度值及标准品与基质液混合液的吸光度值，并按胸水AFU活性(μmol/L·h)＝(A测-A对)/A标×400得到胸水活性指标。本发明具有试剂来源方便，方法简便快速，成本低廉的优点，是一个比较理想的检测方法，适合于基层单位的应用。
文档编号C12Q1/34GK102586398SQ20121005626
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月6日 优先权日2012年3月6日
发明者张弘, 张莉娜, 朱郁飞, 李峰, 许可银, 陈恳, 魏群 申请人:南通大学附属医院