猪链球菌保护性抗原ESPss的基因序列、表达方法及其应用

文档序号:34306162发布日期:2023-05-31 18:58阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种猪链球菌保护性抗原espss的基因序列,其编码核苷酸序列如seq.no:1所示。

2.一种猪链球菌保护性抗原espss的制备方法,其包括如下步骤:

3.根据权利要求2所述的猪链球菌保护性抗原espss的制备方法,其特征在于,所述步骤1)中扩增体系的组成如下:lataq酶25μl,正向引物1μl,反向引物1μl;模板2μl,ddh2o 21μl,pcr扩增条件为:95℃预变性2min;95℃30s,55℃30s,72℃1min30s,35个循环,72℃延伸10min。

4.根据权利要求2所述的猪链球菌保护性抗原espss的制备方法,其特征在于,所述步骤2)中目的基因pcr产物的酶切体系的组成为:10×buffer 2μl,espss基因9μl,ecorⅰ酶0.5μl,xhoⅰ酶0.5μl,ddh2o 8μl;pet-28a质粒的酶切体系的组成为10×buffer 2μl,pet-28a质粒9μl,ecorⅰ酶0.5μl,xhoⅰ酶0.5μl,ddh2o 8μl。

5.根据权利要求2所述的猪链球菌保护性抗原espss的制备方法,其特征在于,所述步骤2)中连接反应体系的组成为:10×buffer 1μl,espss基因,7μl,pet-28a质粒1.5μl,t4dna连接酶0.5μl。

6.根据权利要求2所述的猪链球菌保护性抗原espss的制备方法,其特征在于,所述步骤3)中测序鉴定步骤具体包括:连接反应产物转化到感受态细胞dh5α,转化后菌液涂在卡那霉素的lb琼脂平板上培养,挑取单菌落转接到lb液体培养基,收集菌液并提取质粒进行测序,并与目的片段进行比对分析。

7.权利要求1所述的猪链球菌保护性抗原espss基因序列表达的espss蛋白。

8.权利要求7所述的espss蛋白在对2型、7型、9型血清型猪链球菌感染提供免疫保护中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述的espss蛋白能够显著提升宿主动物的抗体ig g的表达水平。

10.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述的espss蛋白能够显著提升宿主动物血清及脏器细胞因子il-4和ifn-γ的表达水平。


技术总结
本发明涉及猪链球菌保护性抗原ESPss的基因序列、表达方法及其应用,属于动物免疫技术领域。本发明通过人工合成的ESPss蛋白的核苷酸序列;使用带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物对对核苷酸序列进行扩增,得到目的基因PCR产物和pET‑28a阳性质粒使用EcoRⅠ和XhoⅠ酶进行双酶切处理后连接后,诱导重组ESPss蛋白的表达,得到保护性抗原ESPss,其可以显著提高小鼠的抗体水平,可以显著提升宿主动物血清及脏器细胞因子IL‑4和IFN‑γ的表达水平,并为2型、7型和9型猪链球菌感染提供较好的免疫保护作用。

技术研发人员:李蓓蓓,马志永,闫祖杰,姚晓慧,聂万森,李宗杰,邱亚峰,魏建超,刘珂,邵东华
受保护的技术使用者:中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
技术研发日:
技术公布日:2024/1/12
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