1.利用cut&tag技术进行海洋无脊椎动物蛋白质与基因组dna互作研究的实验方法,以侏儒蛤和凡纳滨对虾胚胎为例,其特征在于,包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的利用cut&tag技术进行海洋无脊椎动物蛋白质与基因组dna互作研究的实验方法,其特征在于,所述s3中,若后续解离单细胞进行试验,需配制试剂:0.25%胰蛋白酶溶液、binding buffer、wash buffer、dig-wash buffer、antibodybuffer、dig-300 buffer、tagmentation buffer、te buffer;若后续提取细胞核进行试验,需配制试剂:ne1 buffer、binding buffer、wash buffer、dig-wash buffer、antibodybuffer、dig-300 buffer、tagmentation buffer、te buffer。
3.根据权利要求1所述的利用cut&tag技术进行海洋无脊椎动物蛋白质与基因组dna互作研究的实验方法,其特征在于,所述s9中,片段化处理时,加入tagmentation buffer重悬细胞或细胞核,37℃孵育1h。在室温条件下,加入10μl 0.5m edta,3μl 10%sds和2.5μl20mg/ml proteinase k,终止片段化反应。
4.根据权利要求1所述的利用cut&tag技术进行海洋无脊椎动物蛋白质与基因组dna互作研究的实验方法,其特征在于,所述s10中的dna提取,50℃孵育1h,tris饱和酚和氯仿提取dna,100%乙醇沉淀dna,te buffer溶解dna沉淀。
5.根据权利要求1所述的利用cut&tag技术进行海洋无脊椎动物蛋白质与基因组dna互作研究的实验方法,其特征在于,所述s11中,测序文库的扩增包括pcr的反应体系;pcr的反应体系包括:dna模板,ddh2o、tab buffer、预装接头p5及p7端引物、tae buffer,反应程序根据细胞或细胞核数量而定,pcr产物用琼脂糖凝胶电泳进行质量检测。
6.根据权利要求5所述的利用cut&tag技术进行海洋无脊椎动物蛋白质与基因组dna互作研究的实验方法,其特征在于,所述s11中,扩增产物纯化,使用dna clean beads及乙醇纯化pcr产物,ddh2o洗脱,pcr纯化后产物用琼脂糖凝胶电泳及qubit进行质量检测,确认无误后产物保存于-20℃。
7.根据权利要求6所述的利用cut&tag技术进行海洋无脊椎动物蛋白质与基因组dna互作研究的实验方法,其特征在于,所述s11中,测序使用nova-pe150测1g raw data/文库数据量。