一种调节免疫性细胞因子的担子菌培养物及其应用的制作方法

本申请涉及生物转化及抗肿瘤药物，尤其涉及一种调节免疫性细胞因子的担子菌培养物及其应用。

背景技术：

1、担子菌(学名：basidiomycota)是一类高等真菌，构成双核亚界，包含2万多种，包括蘑菇、木耳等主要食用菌。许多大型担子菌是营养丰富的食用菌，如香菇、猴头、灵芝、竹荪、平菇等。有的具有滋补和药用价值，许多食用的担子菌含有多糖，能提高人体免疫力。因此，担子菌已成为筛选提高免疫力产品的重要资源。

2、硝唑尼特，中文别称为邻[n-(5-硝基噻唑-2-基)氨基甲酰]苯酚乙酸酯，是一种硝噻柳酸酰胺的衍生物，具有抗原虫、抗肠道寄生虫、抗菌等药效，且抗寄生虫谱及抗菌谱较阿苯达唑、甲苯达唑及甲硝唑广泛。同时，其实际的作用机制虽尚未弄清，但被认为与抑制丙酮酸盐，铁氧化还原蛋白氧化还原酶的酶依赖性电子转移反应有关，后者对厌氧能量代谢至为重要。

3、目前，肿瘤的治疗手段包括手术治疗、化疗、放疗、免疫治疗等治疗手段，但手术、放疗和化疗过程，会造成机体免疫能力下降，更为严重的还会出现机体免疫抑制，使残存肿瘤细胞继续存在和进一步转移，给肿瘤患者造成致命的威胁。不过随着肿瘤学与免疫学发展不断深入，围绕人体免疫系统来治疗肿瘤逐步被科研界与产业界所接受，而成为新药研发的热门领域。肿瘤免疫治疗可通过干扰细胞过度生长、转化和转移的直接抗肿瘤作用或激活免疫系统的效应细胞及其所分泌的因子来达到对肿瘤进行杀伤或抑制的目的。

4、但现有技术中未见将担子菌培养物联合硝唑尼特在制备抗肿瘤药物应用中的报道。

技术实现思路

1、本申请提供了一种调节免疫性细胞因子的担子菌培养物及其应用，通过从液体培养担子菌菌丝体和发酵液的培养物提取分离，得到含有具有更强力的免疫增强活性物质的担子菌培养物，进一步研究发现将其和硝唑尼特联合使用，可显著增强其抗肿瘤效果，拓宽了担子菌和硝唑尼特的应用范围。

2、第一方面，本申请提供了一种调节免疫性细胞因子的担子菌培养物，所述调节免疫性细胞因子的担子菌培养物的制备方法包括以下步骤：

3、得到担子菌菌种；

4、将所述担子菌菌种接种于含有植物纤维液体培养液的液体培养基进行第一培养，当培养液中的葡萄糖苷分解酶活性达到≥1200u/g时，得到含有担子菌的液体培养基原料；

5、将含有担子菌的所述液体培养基原料加入植物纤维液体培养液进行第二培养，得到含液体培养基和担子菌培养物的混合液；

6、将含液体培养基和担子菌培养物的所述混合液进行离心分离，得到上清液；

7、将所述上清液去除脂质后进行浓缩和干燥，得到调节免疫性细胞因子的担子菌培养物；

8、其中，以重量份数计，所述植物纤维液体培养液包括以下组分：植物纤维液900～1000份、碳源8～12份、氮源3～5份和4800～5400份；

9、进行第二培养时，含有担子菌的所述液体培养基原料和所述植物纤维液体培养液的体积比为(290～310):(6～10)。

10、进一步地，所述培养液的ph为3.9～4.1。

11、进一步地，所述植物纤维液的制备方法包括以下步骤：将含植物纤维原料加入水中进行加热，后冷却至室温，得到所述植物纤维液；其中，所述含植物纤维原料和所述水的重量比为(140～160):(750～850)；所述加热的工作参数包括：温度为110℃～130℃，时间为10～30分钟。

12、进一步地，所述含植物纤维原料包括米糠、小麦麸皮、稻草、粗糠、酒渣、踞木屑和大豆渣中的至少一种；所述碳源包括葡萄糖、蔗糖、篓芽糖、甘蒸糖、白糖、黑糖、玉米杆浸出液和麦芽萃取液中的至少一种；所述氮源包括肉萃取液、蛋白胨、麸蛋白、大豆粉、干燥酵母、酵母萃取液、硫酸铵、酒石酸铵和尿素中的至少一种。

13、进一步地，所述免疫性细胞因子包括il-1β、il-2、tnf-α、il-12、il-1β和tgf-β中的至少一种；所述第一培养的工作参数包括：温度为19～21℃，时间为4～8天；所述第二培养的工作参数包括：温度为22～24℃，时间为6～8天。

14、第二方面，本申请提供了第一方面任一项所述的调节免疫性细胞因子的担子菌培养物在制备抗肿瘤药物中的应用。

15、第三方面，本申请提供了一种抗肿瘤药物组合物，所述抗肿瘤药物组合物包括：

16、(i)第一方面任一项所述的调节免疫性细胞因子的担子菌培养物；和，

17、(ii)硝唑尼特或其互变异构体、立体异构体、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。

18、进一步地，以每10g的所述调节免疫性细胞因子的担子菌培养物计，所述硝唑尼特的用量为50～400mg。

19、第四方面，本申请提供了一种抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物包括：

20、(a)有效量的第三方面任一项所述的抗肿瘤药物组合物；和，

21、(b)药物辅料。

22、进一步地，所述抗肿瘤药物的制型包括胶囊剂，所述药物辅料包括硬脂酸镁。

23、本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比至少具有如下优点：

24、本申请实施例提供了一种调节免疫性细胞因子的担子菌培养物及其应用，本发明通过从液体培养担子菌菌丝体和发酵液的培养物提取分离，得到含有具有更强力的免疫增强活性物质的担子菌培养物，进一步研究发现将其和硝唑尼特联合使用，可显著增强其抗肿瘤效果，首次公开了担子菌培养物联合硝唑尼特在制备抗肿瘤药物中的应用，拓宽了担子菌和硝唑尼特的应用范围。

技术特征：

1.一种调节免疫性细胞因子的担子菌培养物，其特征在于，所述调节免疫性细胞因子的担子菌培养物的制备方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的调节免疫性细胞因子的担子菌培养物，其特征在于，所述培养液的ph为3.9～4.1。

3.根据权利要求1所述的调节免疫性细胞因子的担子菌培养物，其特征在于，所述植物纤维液的制备方法包括以下步骤：将含植物纤维原料加入水中进行加热，后冷却至室温，得到所述植物纤维液；其中，所述含植物纤维原料和所述水的重量比为(140～160):(750～850)；所述加热的工作参数包括：温度为110℃～130℃，时间为10～30分钟。

4.根据权利要求1或3所述的调节免疫性细胞因子的担子菌培养物，其特征在于，所述含植物纤维原料包括米糠、小麦麸皮、稻草、粗糠、酒渣、踞木屑和大豆渣中的至少一种；所述碳源包括葡萄糖、蔗糖、篓芽糖、甘蒸糖、白糖、黑糖、玉米杆浸出液和麦芽萃取液中的至少一种；所述氮源包括肉萃取液、蛋白胨、麸蛋白、大豆粉、干燥酵母、酵母萃取液、硫酸铵、酒石酸铵和尿素中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的调节免疫性细胞因子的担子菌培养物，其特征在于，所述免疫性细胞因子包括il-1β、il-2、tnf-α、il-12、il-1β和tgf-β中的至少一种；所述第一培养的工作参数包括：温度为19～21℃，时间为4～8天；所述第二培养的工作参数包括：温度为22～24℃，时间为6～8天。

6.权利要求1～5任一项所述的调节免疫性细胞因子的担子菌培养物在制备抗肿瘤药物中的应用。

7.一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，所述抗肿瘤药物组合物包括：

8.根据权利要求7所述的抗肿瘤药物组合物，其特征在于，以每10g的所述调节免疫性细胞因子的担子菌培养物计，所述硝唑尼特的用量为50～400mg。

9.一种抗肿瘤药物，其特征在于，所述抗肿瘤药物包括：

10.根据权利要求9所述的抗肿瘤药物，其特征在于，所述抗肿瘤药物的制型包括胶囊剂，所述药物辅料包括硬脂酸镁。

技术总结
本发明涉及一种调节免疫性细胞因子的担子菌培养物及其应用，涉及生物转化及抗肿瘤药物技术领域，本发明通过从液体培养担子菌菌丝体和发酵液的培养物提取分离，得到含有具有更强力的免疫增强活性物质的担子菌培养物，进一步研究发现将其和硝唑尼特联合使用，可显著增强其抗肿瘤效果，首次公开了担子菌培养物联合硝唑尼特在制备抗肿瘤药物中的应用，拓宽了担子菌和硝唑尼特的应用范围。

技术研发人员：马志民,袁岚,陈碧影
受保护的技术使用者：上海拾点壹健康科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/5