一种ELISA抗体检测试剂盒及其应用的制作方法

文档序号:36260659发布日期:2023-12-05 18:17阅读:来源:国知局

技术特征:

1.小反刍兽疫病毒抗原表位多肽,为序列表中序列1所示多肽、序列表中序列2所示多肽或序列表中序列3所示多肽。

2.小反刍兽疫病毒抗原表位多肽组合物,为序列表中序列1所示多肽、序列表中序列2所示多肽和序列表中序列3所示多肽中的两种或者两种以上任意组合。

3.根据权利要求2所述小反刍兽疫病毒抗原表位多肽组合物,其特征在于:当所述多肽组合为序列1所示多肽、序列2所示多肽、序列3所示多肽的其中两种组合时,两种多肽的质量比为(0.5~1.5)∶(0.5~1.5),优选的,其质量比为1∶1;当所述多肽组合为序列1所示多肽、序列2所示多肽、序列3所示多肽的其中三种时,三种多肽的质量比为(0.5~1.5)∶(0.5~1.5)∶(0.5~1.5),优选的,其质量比为1∶1∶1。

4.一种小反刍兽疫病毒elisa抗体检测试剂盒,包括酶联反应板和酶标二抗;其中所述酶联反应板包被有权利要求1所述的小反刍兽疫病毒抗原表位多肽或者权利要求2或3所述的小反刍兽疫病毒抗原表位多肽组合物。

5.根据权利要求4所述的小反刍兽疫病毒elisa抗体检测试剂盒,其特征在于:酶联反应板为可拆卸96孔酶标板;所述小反刍兽疫病毒抗原表位多肽为化学人工合成肽。

6.根据权利要求4所述的小反刍兽疫病毒elisa抗体检测试剂盒,其特征在于:所述酶联反应板的制备方法是将小反刍兽疫抗原表位多肽组合物溶于ph 9.6的碳酸盐缓冲液中,混合均匀后加入96孔聚苯乙烯酶联反应板,每孔加入浓度为2μg/ml的多肽或多肽组合物100μl,置于2~8℃环境中8~12h,使包被物充分吸附于酶联反应板。包被完成后,每孔加入浓度为5mg/ml的牛血清白蛋白(bsa)pbs缓冲液(ph7.4)300μl,37℃封闭处理2h,取出甩干,充分干燥后于2~8℃密封保存。

7.根据权利要求4所述的小反刍兽疫病毒elisa抗体检测试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括20×浓缩洗涤液、样品稀释液、阳性对照血清、阴性对照血清。所述20×浓缩洗涤液为含有1%tween20的0.01mol/l磷酸盐缓冲液(ph7.4);所述样品稀释液为含有5g/l酪蛋白的0.01mol/l的磷酸盐缓冲液(ph7.4);所述阳性对照血清是以小反刍兽疫商品化活疫苗为免疫原,注射山羊三次提取制备的高免血清,经样品稀释液一定程度稀释后制成的阳性对照血清;所述阴性对照血清为无小反刍兽疫感染或免疫的健康山羊血清;所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记兔抗羊igg抗体。

8.根据权利要求4所述的小反刍兽疫病毒elisa抗体检测试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括底物液a、底物液b和终止液;所述底物液a为含有0.6mg/ml过氧化氢尿素的柠檬酸磷酸盐缓冲液,所述底物液b为0.2mg/ml的四甲基联苯胺溶液,使用前需将两者1∶1混匀;所述终止液为2mol/l的h2so4。

9.权利要求1所述的小反刍兽疫病毒抗原表位多肽或权利要求2或3所述的小反刍兽疫病毒抗原表位多肽组合物在制备检测小反刍兽疫病毒感染的试剂盒中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述检测小反刍兽疫病毒感染为检测小反刍动物的生物样本中是否存在小反刍兽疫病毒抗体(igg),若存在该抗体提示被检动物受小反刍兽疫病毒感染或接种小反刍兽疫疫苗后产生免疫应答;


技术总结
本发明公开了一种ELISA抗体检测试剂盒及其应用。该试剂盒包括酶联反应板和酶标二抗。所述酶联反应板包被有小反刍兽疫病毒抗原表位多肽组合物。该抗原表位多肽组合物为序列表中序列1所示多肽、序列2所示多肽、序列3所示多肽中的任意一条或其中两条或两条以上的多肽组合物。本发明的试剂盒使用化学合成肽作为包被抗原,有效减少了杂蛋白对检测结果的干扰。筛选出的多肽组合物性能优异,敏感性高且特异性强,能准确检测山羊、绵羊等小反刍动物生物样本中的小反刍兽疫病毒抗体。本发明有助于小反刍兽疫全球控制根除计划的推行,且具备广阔的市场前景。

技术研发人员:张蕾,吕云杨,李静,董春娜,李鹏宇,肖进
受保护的技术使用者:中牧实业股份有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/15
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