1.一种检测病毒影响猪睾丸支持细胞屏障功能的方法,其特征在于:包括以下材料的准备;
2.根据权利要求1所述的一种检测病毒影响猪睾丸支持细胞屏障功能的方法,其特征在于:所述方法中包括以下三种涉及技术,分别是transwell细胞培养技术、细胞跨膜电阻检测技术和westernblot。
3.根据权利要求1所述的一种检测病毒影响猪睾丸支持细胞屏障功能的方法,其特征在于:所述transwell培养板具有上下室结构,上室为可移动结构,底由不同孔径的滤膜组成,下室与传统培养板无差异;而transwell培养模式下的细胞则主要接种于上室;这种细胞培养模式使测量贴壁细胞的膜电阻变得简便,可以反映出细胞单层膜的生长状态。
4.根据权利要求1所述的一种检测病毒影响猪睾丸支持细胞屏障功能的方法,其特征在于:所述细胞跨膜电阻实验是利用高精度电阻测量仪器对生长中的贴壁细胞进行细胞单层膜电位进行测量从而计算出细胞单层膜电阻的实验。
5.根据权利要求1所述的一种检测病毒影响猪睾丸支持细胞屏障功能的方法,其特征在于:所述westernblot是根据抗原抗体的特异性反应对特定蛋白进行相对定量的一种试验方法;其基本原理是蛋白质通过凝胶电泳后,按分子量大小顺序在分离胶中分离开来,通过转膜,可将胶上蛋白质转移到固相载体表面,然后加入一抗去特异性结合膜上蛋白质,再加入酶或者荧光素标记的二抗,二抗与一抗结合反应后,通过底物显色、化学发光等方法可以检测到目的蛋白;westernblot实验用来判断特定蛋白在样本中是否表达及粗略分析特定蛋白表达量的高低。
6.根据权利要求1所述的一种检测病毒影响猪睾丸支持细胞屏障功能的方法,其特征在于:所述dmem完全培养基中含10%胎牛血清。
7.根据权利要求1所述的一种检测病毒影响猪睾丸支持细胞屏障功能的方法,其特征在于:所述s3中每个12孔transwell板设四个接毒时间处理组,分别为12、24、36、48h无处理、12、24、36、48h接毒、12、24、36、48h灭活病毒。
8.根据权利要求1所述的一种检测病毒影响猪睾丸支持细胞屏障功能的方法,其特征在于:所述s4中荧光酶标仪的参数为:激发波长485nm、发射波长528nm,正常检测速度、1mm检测高度,测量荧光强度并记录。
9.根据权利要求1所述的一种检测病毒影响猪睾丸支持细胞屏障功能的方法,其特征在于:所述s5中提取蛋白的方法具体如下: