解淀粉类芽孢杆菌的用途的制作方法

本发明属于微生物，具体涉及解淀粉类芽孢杆菌，特别是解淀粉类芽孢杆菌(paenibacillus amylolyticus)fs-2的用途。

背景技术：

1、已知β-1,4-木聚糖酶能降解半纤维素，α-淀粉酶能降解淀粉，锰过氧化氢酶能降解木质素，鼠李糖醛酸裂解酶能降解果胶，内切葡聚糖酶能降解纤维素，以及中性金属蛋白酶能降解蛋白质。

2、解淀粉类芽孢杆菌(paenibacillus amylolyticus)又称解淀粉拟杆菌，能高产淀粉酶，但文献中少有报道解淀粉类芽孢杆菌能够产生除了α-淀粉酶以外的其他大分子物质降解酶，对其联产特性尚无报道。

技术实现思路

1、本发明的第一方面提供了一种酶制剂，其中含有β-1,4-木聚糖酶、α-淀粉酶、锰过氧化氢酶、鼠李糖醛酸裂解酶、内切葡聚糖酶和中性金属蛋白酶。

2、在某些实施方案中，所述酶制剂，其由保藏号为cgmcc no.24247的解淀粉类芽孢杆菌(paenibacillus amylolyticus)fs-2在培养基中发酵获得，其中，所述培养基包括可溶性淀粉、植物蛋白胨和二价锰离子盐。

3、在某些实施方案中，所述植物蛋白胨为大豆蛋白胨。

4、在某些实施方案中，所述二价锰离子盐为硫酸锰。

5、在某些实施方案中，所述可溶性淀粉、植物蛋白胨、二价锰离子盐的重量比为0.5-5：5-50：0.1-0.5。

6、在某些实施方案中，所述可溶性淀粉、植物蛋白胨、二价锰离子盐的重量比为0.8-3.5：8-30：0.15-0.35。

7、在某些实施方案中，所述可溶性淀粉、植物蛋白胨、二价锰离子盐的重量比为2：10：0.2。

8、在某些实施方案中，所述培养基中还包括牛肉浸膏和磷酸盐。

9、在某些实施方案中，所述磷酸盐为磷酸二氢钾。

10、在某些实施方案中，所述牛肉浸膏与可溶性淀粉的重量比为1-8：0.5-5。

11、在某些实施方案中，所述牛肉浸膏与可溶性淀粉的重量比为2-5：0.8-3.5。

12、在某些实施方案中，所述牛肉浸膏与可溶性淀粉的重量比为3：2。

13、在某些实施方案中，所述磷酸盐与可溶性淀粉的重量比为3-10：0.5-5。

14、在某些实施方案中，所述磷酸盐与可溶性淀粉的重量比为4-8：0.8-3.5。

15、在某些实施方案中，所述磷酸盐与可溶性淀粉的重量比为5：2。

16、在某些实施方案中，所述培养基为液体培养基、固体培养基或半固体培养基。

17、在某些实施方案中，所述酶制剂由包括以下操作的方法制备而成，

18、1)将保藏号为cgmcc no.24247的解淀粉类芽孢杆菌fs-2接种至所述培养基中；

19、2)发酵。

20、在某些实施方案中，步骤2)中所述发酵为在36-38℃、150-250r/min下发酵12-24小时。

21、在某些实施方案中，步骤2)后还包括以下操作中的至少一项：

22、去除菌体；

23、去除分子量大于150kda的物质；

24、去除分子量小于10kda的物质；

25、冷冻干燥发酵液。

26、在某些实施方案中，应用150kda超滤膜去除分子量大于150kda的物质。

27、在某些实施方案中，应用10kda超滤膜去除分子量小于10kda的物质。

28、本发明的第二方面提供了一种制备酶制剂的方法，其包括以下步骤：

29、1)将保藏号为cgmcc no.24247的解淀粉类芽孢杆菌fs-2接种至所述培养基中；

30、2)发酵；

31、在某些实施方案中，步骤2)中所述发酵为在36-38℃、150-250r/min转速下发酵12-24小时。

32、在某些实施方案中，步骤2)后还包括以下操作中的至少一项：

33、去除菌体；

34、去除分子量大于150kda的物质；

35、去除分子量小于10kda的物质；

36、冷冻干燥发酵液。

37、在某些实施方案中，应用150kda超滤膜去除分子量大于150kda的物质。

38、在某些实施方案中，应用10kda超滤膜去除分子量小于10kda的物质。

39、本发明的第三方面提供了一种培养物，其包括保藏号为cgmcc no.24247的解淀粉类芽孢杆菌(paenibacillus amylolyticus)fs-2和培养基，其中所述培养基包括可溶性淀粉、植物蛋白胨和二价锰离子盐。

40、在某些实施方案中，所述植物蛋白胨为大豆蛋白胨。

41、在某些实施方案中，所述二价锰离子盐为硫酸锰。

42、在某些实施方案中，所述可溶性淀粉、植物蛋白胨、二价锰离子盐的重量比为0.5-5：5-50：0.1-0.5。

43、在某些实施方案中，所述可溶性淀粉、植物蛋白胨、二价锰离子盐的重量比为0.8-3.5：8-30：0.15-0.35。

44、在某些实施方案中，所述可溶性淀粉、植物蛋白胨、二价锰离子盐的重量比为2：10：0.2。

45、在某些实施方案中，所述培养基还包括牛肉浸膏和磷酸盐。

46、在某些实施方案中，所述磷酸盐为磷酸二氢钾。

47、在某些实施方案中，所述牛肉浸膏与可溶性淀粉的重量比为1-8：0.5-5。

48、在某些实施方案中，所述牛肉浸膏与可溶性淀粉的重量比为2-5：0.8-3.5。

49、在某些实施方案中，所述牛肉浸膏与可溶性淀粉的重量比为3：2。

50、在某些实施方案中，所述磷酸盐与可溶性淀粉的重量比为3-10：0.5-5。

51、在某些实施方案中，所述磷酸盐与可溶性淀粉的重量比为4-8：0.8-3.5。

52、在某些实施方案中，所述磷酸盐与可溶性淀粉的重量比为5：2。

53、在某些实施方案中，所述培养基为液体培养基、固体培养基或半固体培养基。

54、本发明的第四方面提供了一种培养物上清，其为本发明所述的培养物的上清。

55、在某些实施方案中，所述培养物上清中含有β-1,4-木聚糖酶、α-淀粉酶、锰过氧化氢酶、鼠李糖醛酸裂解酶、内切葡聚糖酶和中性金属蛋白酶。

56、本发明的第五方面提供了一种组合物，其包括本发明所述的培养物，或本发明所述的培养物上清。

57、本发明的第六方面提供了一种组合物，其由本发明所述的培养物上清制备而成。

58、在某些实施方案中，所述组合物由包括以下操作的方法制备而成，

59、1)提供所述的培养物上清；

60、2)使1)中所述的培养物上清干燥。

61、在某些实施方案中，步骤1)包括：

62、将所述解淀粉类芽孢杆菌fs-2接种至所述培养基中，发酵；

63、去除发酵产物中的菌体，得到培养物上清。

64、在某些实施方案中，所述发酵为在36-38℃、150-250r/min下发酵12-24小时。

65、在某些实施方案中，通过陶瓷膜过滤去除发酵产物中的菌体。

66、在某些实施方案中，步骤1)还包括：

67、去除分子量大于150kda的物质；

68、去除分子量小于10kda的物质。

69、在某些实施方案中，应用150kda超滤膜去除分子量大于150kda的物质。

70、在某些实施方案中，应用10kda超滤膜去除分子量小于10kda的物质。

71、在某些实施方案中，步骤2)通过冷冻干燥进行。

72、本发明的第七方面提供了本发明所述的酶制剂、本发明所述的培养物、本发明所述的培养物上清或本发明所述的组合物在食品加工、烟叶加工、果蔬加工、制糖或制浆领域中的用途，或在加工烟草原料或制备烟草制品中的用途，或者在提升烟草制品抽吸感官质量中的用途。

73、本发明的第八方面提供了一种处理烟叶的方法，其包括将本发明所述的酶制剂或本发明所述的组合物与烟叶接触。

74、本发明的第九方面提供了一种烟叶，其由本发明所述的处理烟叶的方法处理获得。

75、本发明的第十方面提供了一种培养基，其包括可溶性淀粉、植物蛋白胨和二价锰离子盐。

76、在某些实施方案中，所述植物蛋白胨为大豆蛋白胨。

77、在某些实施方案中，所述二价锰离子盐为硫酸锰。

78、在某些实施方案中，所述可溶性淀粉、植物蛋白胨、二价锰离子盐的重量比为0.5-5：5-50：0.1-0.5。

79、在某些实施方案中，所述可溶性淀粉、植物蛋白胨、二价锰离子盐的重量比为0.8-3.5：8-30：0.15-0.35。

80、在某些实施方案中，所述可溶性淀粉、植物蛋白胨、二价锰离子盐的重量比为2：10：0.2。

81、在某些实施方案中，所述培养基还包括牛肉浸膏和磷酸盐。

82、在某些实施方案中，所述磷酸盐为磷酸二氢钾。

83、在某些实施方案中，所述牛肉浸膏与可溶性淀粉的重量比为1-8：0.5-5。

84、在某些实施方案中，所述牛肉浸膏与可溶性淀粉的重量比为2-5：0.8-3.5。

85、在某些实施方案中，所述牛肉浸膏与可溶性淀粉的重量比为3：2。

86、在某些实施方案中，所述磷酸盐与可溶性淀粉的重量比为3-10：0.5-5。

87、在某些实施方案中，所述磷酸盐与可溶性淀粉的重量比为4-8：0.8-3.5。

88、在某些实施方案中，所述磷酸盐与可溶性淀粉的重量比为5：2。

89、在某些实施方案中，所述培养基为液体培养基、固体培养基或半固体培养基。

90、在某些实施方案中，本发明所述的培养基可用于维持和/或促进解淀粉类芽孢杆菌(paenibacillus amylolyticus)fs-2生长、繁殖和/或代谢。

91、术语说明

92、如本文所用，“多酚氧化酶抑制物”是指能抑制多酚氧化酶活性的物质。

93、本发明取得的有益效果：

94、本发明提供的培养基可用于维持和/或促进解淀粉类芽孢杆菌fs-2(cgmccno.24247)生长、繁殖和/或代谢。将本发明的解淀粉类芽孢杆菌fs-2(cgmcc no.24247)接种至所述培养基发酵，能够联β-1,4-木聚糖酶、α-淀粉酶、锰过氧化氢酶、鼠李糖醛酸裂解酶、内切葡聚糖酶和中性金属蛋白酶。

95、本发明提供的酶制剂能够部分降解初烤烟叶中的大分子物质，释放烟香，增加甜感和余味，使香气质、香气量明显增加，刺激性明显减少。

96、本发明提供的培养物、培养物上清、组合物、酶制剂可应用于食品加工、烟叶加工、果蔬加工、制糖、制浆等领域。

97、本发明的发酵工艺简单，基于发酵罐生产，能够直接工业化应用。

98、关于生物材料保藏的说明

99、解淀粉类芽孢杆菌(paenibacillus amylolyticus)fs-2已在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(china generalmicrobiological culture collection center,cgmcc)进行保藏，其保藏号为cgmccno.24247，保藏时间为2022年01月05日。