一种有效提取过量尿液样本中ctDNA的方法与流程

文档序号:37334761发布日期:2024-03-18 17:58阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种有效提取过量尿液样本中ctdna的方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的有效提取过量尿液样本中ctdna的方法,其特征在于,所述步骤1)中的低盐-缓冲液一中所述低盐为硫酸钾、硫酸钠、氯化镁、氯化钙、氯化钾中的一种且其工作浓度为50mm-5m,所述乙酸钠的工作浓度为2-50mm,ph值为4.0-7.0。

3.根据权利要求1所述的有效提取过量尿液样本中ctdna的方法,其特征在于,所述步骤2)中的高盐-缓冲液二中所述高盐为硫酸钾、硫酸钠、氯化镁、氯化钙、氯化钾中的一种且其工作浓度为50mm-5m,所述乙酸钠的工作浓度为2-50mm,ph值为4.0-7.0。

4.根据权利要求1所述的有效提取过量尿液样本中ctdna的方法,其特征在于,所述步骤2)中的高盐-乙醇缓冲液三中所述高盐为硫酸钾、硫酸钠、氯化镁、氯化钙、氯化钾中的一种且其工作浓度为50mm-5m,所述乙醇的工作浓度为60%-95%。

5.根据权利要求1所述的有效提取过量尿液样本中ctdna的方法,其特征在于,所述步骤2)中的乙酸钠-乙醇缓冲液四中所述乙酸钠的工作浓度为0.1-5m,ph值为4.0-7.0,所述乙醇的工作浓度为60%-95%。

6.根据权利要求1所述的有效提取过量尿液样本中ctdna的方法,其特征在于,所述步骤2)中的所述洗脱液为depc处理水、te缓冲液、10-100ng/μl的carrier rna溶液中的一种或多种。

7.根据权利要求1所述的有效提取过量尿液样本中ctdna的方法,其特征在于,所述ctdna为30bp-150bp的ctdna片段。

8.根据权利要求1所述的有效提取过量尿液样本中ctdna的方法,其特征在于,所述步骤1)中尿液样本初始上样量为50-200ml;或

9.一种用于长久保存权利要求1-8任一项所述的方法得到的提纯的尿液ctdna的保存液,其特征在于,所述保存液为depc处理水、te缓冲液、10-100ng/μl的carrier rna溶液中的一种或多种。

10.根据权利要求9所述的保存液,其特征在于,所述保存液用于权利要求1所述的方法中的洗脱液。


技术总结
本发明公开一种有效提取过量尿液样本中ctDNA的方法,包括提取、纯化和ctDNA保存。1)离子交换色谱富集尿液样本ctDNA。利用净表面电荷和pH间的差异对核酸分子进行分离,可将尿液上样量提高至百毫升级别,从而提高样本ctDNA的量;2)二氧化硅吸附柱纯化ctDNA。利用二氧化硅膜在特定盐离子浓度缓冲液中结合DNA的能力,对少量ctDNA进行纯化;3)优化的尿液ctDNA保存液,用于长期保存小片段核酸分子。本发明提取的尿液ctDNA完整性高,包括约80bp的小片段ctDNA,且尿液ctDNA中基因突变信息与肿瘤组织检测结果高度一致,为实现液体无创活检提供提供有效的、高质量的ctDNA来源。

技术研发人员:陈谦,曹又元,刘泓,刘弘扬
受保护的技术使用者:苏州索真生物技术有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/3/17
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