1.一种人adam10 pro-domain大肠杆菌表达的优化方法,其特征在于,所述优化方法是通过同义突变替换掉adam10 pro-domain天然序列中的稀有密码子,且通过同义突变平衡编码序列的gc含量;
2.根据权利要求1所述的一种人adam10 pro-domain大肠杆菌表达的优化方法,其特征在于,所述优化是根据密码子的简并性,将adam10pro-domain序列进行密码子优化,包括以下几个步骤:
3.根据权利要求2所述的一种人adam10 pro-domain大肠杆菌表达的优化方法,其特征在于,所述第一步中酶切的温度为37℃,且酶切完整之后静置过夜。
4.根据权利要求2所述的一种人adam10 pro-domain大肠杆菌表达的优化方法,其特征在于,所述第二步中t4连接酶连接完成之后,将得到的产物在室温下放置30—60min。
5.根据权利要求2所述的一种人adam10 pro-domain大肠杆菌表达的优化方法,其特征在于,所述第三步中转入jm109感受态细胞的含量为100ul。
6.根据权利要求2所述的一种人adam10 pro-domain大肠杆菌表达的优化方法,其特征在于,所述第三步中第一次冰上放置的时间为30—60min,所述热激的温度为42℃,且热激90s,之后再次在冰上冷却的时间为2—3min。
7.根据权利要求2所述的一种人adam10 pro-domain大肠杆菌表达的优化方法,其特征在于,所述第六步中染色观察结束之后,再使用不同浓度过饱和硫酸铵进行盐沉,在选取a10 prod oprimized-1扩大培养后,先进行iptg诱导表达,然后在超声裂解菌液后,选择不同浓度的过饱和硫酸铵盐沉提取蛋白,且分别留取iptg诱导前后,超声裂解后上清及包涵体,并对20%、25%、33%、50%和67%浓度的过饱和硫酸铵盐沉后沉淀及上清样品,进行考马斯亮蓝染色。
8.根据权利要求7所述的一种人adam10 pro-domain大肠杆菌表达的优化方法,其特征在于,所述过饱和硫酸铵盐沉结束之后,进行染色观察,然后选取过饱和硫酸铵浓度在33%—50%之间的沉淀进行进一步的优化处理,先使用25%过饱和硫酸铵沉淀杂质,再使用33%-50%过饱和硫酸铵沉淀目的蛋白。
9.根据权利要求8所述的一种人adam10 pro-domain大肠杆菌表达的优化方法,其特征在于,所述进一步优化处理包括以下几个步骤:
10.根据权利要求9所述的一种人adam10 pro-domain大肠杆菌表达的优化方法,其特征在于,所述s3中混合的时间为30—60min,且混合的温度为室温,所述s5中浓缩的转速为30-45r/min。