瞿麦黄酮碳苷类化合物及其定向分离制备方法和应用

本发明涉及天然药物化学，涉及瞿麦黄酮碳苷类化合物及其定向分离制备方法和应用，具体涉及一类黄酮碳苷类化合物，包含一个新化合物，并且含有其定向分离制备方法和其在抑制α-葡萄糖苷酶活性中的新应用，作为制备治疗或改善糖尿病药物的应用。

背景技术：

0、技术背景

1、糖尿病是21世纪增长最快的全球卫生紧急事件之一，而在全球几亿糖尿病患者中，85％～90％是ii型糖尿病(type 2diabetes melltus，t2dm)。t2dm的特征是高血糖，人体摄取过多的高碳水食物会引起餐后血糖上升，从而发展成t2dm。然而饭后血糖过高不但会导致糖尿病和其他并发症，而且还会提高死亡率。因此，控制餐后血糖，是改善糖尿病的主要方式，并且可以减少糖尿病患者的死亡率。目前，控制餐后高血糖的方法主要是通过对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的活性进行抑制，从而降低其将糖转化为可吸收的单糖。因此寻找和开发具有低毒性并且能有效抑制α-葡萄糖苷酶活性的天然活性物质，将会对治疗或改善糖尿病起到积极作用。

2、瞿麦(dianthus superbus l.)，石竹科、石竹属的多年生草本植物，记载于2015版的《中国药典》，具有“利尿通淋，活血通经。用于热淋，血淋，石淋，小便不通，淋沥涩痛，经闭瘀阻”等功效。瞿麦含有皂苷类、环肽类、黄酮类、多酚类、生物碱等多种化学成分。现代药理学研究表明其具有抗菌、肾保护、抗早孕、抗肿瘤、免疫抑制、神经保护等多种作用。但目前未见到从瞿麦中分离纯化并鉴定得到黄酮碳苷类化合物，且有抑制α-葡萄糖苷酶活性和血糖的文献报道。因此，亟需建立一种工艺简单、能从瞿麦中规模化制备黄酮碳苷类化合物的方法，并且测定其α-葡萄糖苷酶抑制活性。

技术实现思路

1、基于上述问题，本发明的目的在于提供瞿麦黄酮碳苷类化合物及其定向分离制备方法和应用，具体为一种具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的瞿麦黄酮碳苷类化合物及其定向分离制备的方法和制备血糖抑制剂的应用，并作为制备治疗或改善糖尿病药物的应用。

2、种瞿麦黄酮碳苷类化合物，为首次提取发现，结构式如下所示：

3、

4、瞿麦黄酮碳苷类化合物制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用，结构式如下所示：

5、

6、上述瞿麦黄酮碳苷类化合物作为制备血糖抑制药物的应用，或作为制备治疗或改善糖尿病药物等类似药物的应用。

7、瞿麦黄酮碳苷类化合物定向分离制备的方法，包括如下步骤：

8、步骤1，提取：将瞿麦全草阴干，粗碎后按料液比1g：5～100ml的乙醇提取，在室温下提取2～4次，每次2～4h，过滤、合并滤液，即滤液a，该滤液a按硅胶的量：瞿麦药材的量＝1：5～15拌样并减压干燥，即得瞿麦提取物拌样样品；

9、步骤2，微孔树脂中压色谱粗分：瞿麦提取物拌样样品经装有微孔树脂的中压色谱分离，经检测波长为210nm的紫外检测器检测，收集得到6个色谱峰馏分，经减压干燥后标记为瞿麦组分fr1、fr2、fr3、fr4、fr5和fr6；

10、步骤3，反相中压色谱富集：所述目标组分fr4与硅胶拌样后得样品，该样品经装有硅胶基质材料的反相中压色谱塔分离，经检测波长为210nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中第1个色谱峰馏分，该馏分经减压干燥即得含有目标成分的组分fr41；

11、步骤4，反相制备柱制备：含有目标成分的组分fr41用体积分数为50～100％的甲醇-水溶液溶解，配制样品浓度为20.0～50.0mg/ml，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液，即滤液b，滤液b经反相制备柱制备，经检测波长为210nm的紫外检测器检测，收集滤液b反相制备色谱图中的两个色谱峰馏分，该色谱峰馏分经减压干燥即得含有目标成分的组分fr411和fr412；

12、步骤5，fr411的反相制备液相色谱纯化：含有目标成分的组分fr411用体积分数为100％的甲醇溶液溶解，配制样品浓度为25.0mg/ml，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液，即滤液c，滤液c经反相高压液相色谱纯化，经检测波长为210nm的紫外检测器检测，收集滤液c反相高压制备色谱图中色谱峰馏分fr4111，该色谱峰馏分经减压干燥得到纯度大于95％的2”-o-rhamnosyllutonarin；

13、步骤6，fr412的亲水制备液相色谱纯化：含有目标成分的组分fr412用体积分数为100％的甲醇溶液溶解，配制样品浓度为25.0mg/ml，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液，即滤液d，滤液d经亲水高压液相色谱纯化，经检测波长为210nm的紫外检测器检测，收集滤液d亲水高压制备色谱图中对应色谱峰馏分fr4121、fr4122和fr4123，色谱峰馏分fr4121、fr4122和fr4123经减压干燥分别得到纯度大于95％的luteolin 6-c-glucoside-7-o-glucoside、luteolin6-c-(6”-o-β-d-glucoside)-glucoside和6”'-o-rhamnosyllutonarin；

14、进一步的，所述步骤1、步骤2、步骤3、步骤4、步骤5和步骤6中，减压干燥的条件均为：真空度50～250mbar，温度40～60℃；

15、进一步的，所述步骤2中，微孔树脂中压色谱粗分的分离工作参数为：色谱柱柱长460mm、直径49mm，微孔树脂柱固定相为hp20ss，流动相a为水，b为甲醇，c为二氯甲烷，色谱条件为0～20min，0％b，20～240min，0％～100％b，240～300min，100％b，300～420min，0～100％c，进样量为10～80g，流速为40～60ml/min；

16、进一步的，所述步骤3中，反相中压色谱富集的工作参数为：色谱柱柱长500mm、直径50mm，反相制备柱固定相为50μm的spherical c18，流动相a为水，b为甲醇，色谱条件为0～120min，20％～65％b，进样量为10～30g，流速为40～60ml/min；

17、进一步的，所述步骤4中，反相制备柱制备的工作参数为：色谱柱尺寸为250×20mm，反相制备柱固定相为7μm反相柱7-x10，流动相为6％甲醇-水溶液；

18、进一步的，所述步骤5中，反相制备液相色谱纯化的工作参数是指色谱柱柱长250mm、直径20mm，反相制备柱固定相为5μm反相柱sunfire c18，流动相为20％甲醇-水溶液；

19、进一步的，所述步骤6中，亲水制备液相色谱纯化的工作参数为：色谱柱尺寸为250×20mm，亲水制备柱固定相为5μm两性离子柱clickxion，流动相为90％乙腈-5％三氟乙酸水溶液。

20、本发明与现有技术相比具有以下优点：

21、(1)本发明成本低廉、产品纯度高。使用的提取溶剂，微孔树脂中压色谱粗分、反相中压色谱富集、反相、亲水色谱纯化使用的溶剂均可以回收利用；使用的色谱分离材料(微孔树脂、反相制备液相色谱和亲水制备液相色谱分离材料)均可以重复利用；回收利用的溶剂和重复利用的分离材料保证了分离过程中平均成本比较低廉，两步中压分离(微孔树脂中压色谱粗分和反相中压色谱富集)及高压液相色谱纯化可以保证产品的纯度大于95％。

22、(2)本发明的制备方法可实现规模化生产需要。原料要求不高、成本低廉、极易获得，一般种植的或市场上销售的瞿麦中药材即可，易于批量备料；乙醇室温提取，易于操作；分离采用微孔树脂柱粗分，该微孔树脂分离材料可以装于中压柱层析系统中，易于实现规模化；分离纯化中使用的反相制备液相色谱或亲水制备液相色谱，为快速的等度方法，非常适宜大规模生产。

23、(3)本发明所述的瞿麦中的黄酮碳苷类化合物是一种纯天然的、植物源的、无毒无刺激的物质，可显著抑制α-葡萄糖苷酶活性。本发明提供瞿麦黄酮碳苷类化合物作为制备治疗或改善糖尿病药物的应用，并提供制备抑制α-葡萄糖苷酶药物的应用。