一种包含肾祖干细胞外泌体的生物制品以及其治疗肾损伤方面的应用的制作方法

本发明属于生物，尤其涉及一种肾脏祖干细胞外泌体在制备治疗肾损伤生物制品或保健品中的应用。

背景技术：

1、急性肾损伤是临床医学中一个潜在的破坏性问题。损伤后，肾脏会经历再生反应，导致肾功能恢复。然而，肾脏再生往往不足，导致显著的并发症发生率和死亡率。因此，约40％的患者肾功能不能完全恢复，并伴有残余肾功能衰竭，其中10％的患者在5年后需要肾脏替代治疗。尽管对急性肾损伤和再生的理解取得了进展，但由于肾脏的复杂性，治疗进展有限。

2、外泌体是一种大小为40-160nm的细胞外囊泡，包含有多种诸如核酸、蛋白质、脂类、氨基酸、小分子代谢物等内容物，这些内容物可以反映其细胞来源。有研究通过分析肾单位不同节段的外泌体成分及其与肾脏生理和病理生理的相关性，验证了与肾脏疾病相关的来自血清、肾小管细胞、肾实质细胞、肾小球内皮细胞、间充质干细胞、泌尿系统干细胞、癌细胞和巨噬细胞的外泌体的来源与作用，说明外泌体广泛参与了多种肾脏疾病的发生与发展；

3、qiwang ma等发现从健康人和慢性肾脏疾病患者的尿液中分离出sox9阳性肾祖细胞，并发现在体外培养中依然保留增殖和再生的能力。进一步研究发现，在急性肾小管损伤后，肾小管中的sox9阳性细胞能够快速增殖并进行肾小管修复(qiwang ma.etc，lifesciences 193(2018)104:109)。

4、盐皮质激素是一类由肾上腺皮质球状带细胞分泌的类固醇激素，其中，醛固酮是最常见的一种。醛固酮的分泌受到多种因素的调控，主要包括肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensinaldosterone system，raas)调节，以及促肾上腺皮质激素、na+、k+水平等多种因素的影响，盐皮质激素是参与肾脏功能调节的重要激素。

5、目前对于干细胞的外泌体的研究主要涉及内皮祖细胞、间充质干细胞、人多能干细胞、人源脂肪干细胞等领域，还有少数研究涉及通过褪黑素刺激的间充质干细胞来源的外泌体在改善糖尿病创面愈合领域(liu et al.stem cell researc h&therapy(2020)11:259)，但迄今还未有关于肾脏祖干细胞外泌体及其外泌体在治疗肾损伤方面的报道，特别是sox9阳性肾祖细胞；而且通过盐皮质激素刺激肾祖干细胞得到外泌体用于治疗肾损伤的功能研究未见报告；因此，本领域急需能够用于肾损伤等疾病治疗的肾脏祖干细胞来源的外泌体。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种肾脏祖干细胞来源的外泌体，所述的外泌体能够用于治疗肾损伤等疾病。

2、本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

3、本发明第一方面：

4、提供一种干细胞外泌体或其衍生品，

5、在本发明的一个实施方式中，所述干细胞是人肾脏祖干细胞；

6、在本发明的一个实施方式中，所述干细胞是sox9+肾脏祖干细胞；

7、在本发明的另一个实施方式中，人肾脏祖干细胞是经过盐皮质激素刺激so x9+肾脏祖干细胞；

8、在本发明的另一个实施方式中，所述sox9+肾脏祖干细胞高表达six2、ci ted1蛋白；

9、在本发明的一个实施方式中，收集外泌体后，通过粒径分析、免疫印迹等方法对外泌体的特性进行鉴定，

10、在本发明的一个实施方式中，结果符合外泌体特征：直径范围50-150nm，其膜结构表面含有alix、cd9等标志物；

11、本发明第二方面：

12、提供基于所述人肾脏祖干细胞外泌体或其衍生物的产品，所述产品是选自包含权利要求1所述的外泌体或其衍生品作为有效成分的药学制剂或保健品或生物制品。

13、在本发明的一个实施方式中，所述制剂选择以下形式中的任一种：注射剂型、输液剂型、喷雾剂型；

14、在本发明的一个实施方式中，含有外泌体的添加剂，可以制备多种制剂，如滴剂、软膏剂、乳剂、膜剂、涂抹剂、凝胶剂、糊剂、喷雾剂、气雾剂及贴剂等等；

15、在本发明的一个实施方式中，提供基于所述人肾脏祖干细胞外泌体的保健品组合物，所述保健品以人肾脏祖干细胞外泌体为有效成分；

16、在本发明的一个实施方式中，提供基于所述人肾脏祖干细胞外泌体的生物制品，所述生物制品是以人肾脏祖干细胞外泌体为有效成分；

17、本发明第三方面：

18、提供所述人肾脏祖干细胞外泌体或其衍生物的应用，包括以下用途中的一种或几种：

19、1)制备促进肾小管细胞增殖和抗氧化的产品中的应用

20、2)制备用于治疗和/或预防肾损伤的产品的应用；

21、在本发明的一个实施方式中，所述促进肾小管细胞增殖和抗氧化的产品具有下述至少任一种功能：

22、a1使肾小管细胞的总超氧化物歧化酶sod增加；

23、a2使肾小管细胞的脂质过氧化mda降低；

24、a3提高肾小管细胞的存活率。

25、在本发明的一个实施方式中，所述促进治疗和/或预防肾损伤的产品具有下述至少任一种功能：

26、b1提高因肾损伤导致的肌酐(creatinine)水平降低的数值；

27、b2提高因肾损伤导致的尿素氮(bun)水平降低的数值。

28、在本发明的一个实施方式中，所述肾损伤为急性肾损伤或因顺铂导致的急性肾损伤。

29、本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果

30、(1)本发明首次从尿液中分离提取得到sox9+人肾脏祖干细胞，并且从上述肾脏祖干细胞来源得到的外泌体具有明显促进肾小管细胞增殖和氧化以及促进肾脏功能恢复的有益效果，因此将外泌体以及其衍生物用于治疗肾损伤具有广阔的应用前景；

31、(2)本发明还进一步发现经盐皮质激素处理sox9+人肾脏祖干细胞来源的外泌体相比较未经盐皮质激素处理sox9+人肾脏祖干细胞来源的外泌体具有显著促进肾小管细胞增殖和氧化以及促进肾脏功能恢复的效果，其未来有希望成为第二代辅助肾脏功能恢复的健康产品。

技术特征：

1.一种干细胞来源的外泌体或其衍生品，其特征在于，所述干细胞选自肾脏祖干细胞、sox9+肾脏祖干细胞或经过盐皮质激素刺激sox9+肾脏祖干细胞的一种或多种组合。

2.根据权利要求1所述的外泌体或其衍生品，其特征在于，所述外泌体高表达alix、cd9蛋白。

3.根据权利要求1-2所述的外泌体或其衍生品，其特征在于，所述sox9+肾脏祖干细胞高表达six2、cited1蛋白。

4.一种用于肾损伤的预防或治疗的产品，其特征在于，所述产品是选自包含权利要求1所述的外泌体或其衍生品作为有效成分的药学制剂或健康产品或生物制品。

5.权利要求1-3所述的外泌体或其衍生品或者权利要求4所述产品在制备具有促进肾小管细胞增殖和抗氧化的产品中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述促进肾小管细胞增殖和抗氧化的产品具有下述至少任一种功能：

7.根据权利要求5-6所述的应用，其特征在于，所述肾小管细胞为肾小管细胞系hk-2或经顺铂处理后的肾小管细胞系hk-2。

8.权利要求1-3所述的外泌体或其衍生品或者权利要求4所述产品在制备治疗和/或预防肾损伤产品中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述治疗和/或预防肾损伤产品的具有下述至少任一种功能：

10.根据权利要求8-9所述应用，其特征在于，所述肾损伤为急性肾损伤或因顺铂导致的急性肾损伤。

技术总结
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种肾脏祖干细胞外泌体在制备治疗肾损伤生物制品或保健品中的应用；为了能够得到用于肾损伤等疾病治疗的肾脏祖干细胞来源的外泌体，本发明首次从尿液中分离提取SOX9<supgt;+</supgt;人肾脏祖干细胞来源的外泌体具有明显促进肾小管细胞增殖和氧化以及促进肾脏功能恢复的有益效果；同时经盐皮质激素处理SOX9<supgt;+</supgt;人肾脏祖干细胞后来源的外泌体相比较未经盐皮质激素处理SOX9<supgt;+</supgt;人肾脏祖干细胞来源的外泌体具有显著促进肾小管细胞增殖和氧化以及促进肾脏功能恢复的效果；采用该方法制备得到的外泌体以及其衍生物在用于治疗肾损伤方面具有广阔的应用前景。

技术研发人员：刘思维,马奕阳
受保护的技术使用者：北中创科生物科技（北京）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/17