一种新型透明质酸酶的酶法制备特定分子量透明质酸的方法、透明质酸酶和应用

文档序号:37352025发布日期:2024-03-18 18:33阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种新型透明质酸酶编码基因rs20745,其特征在于:所述基因rs20745来源于委内瑞拉链霉菌streptomyces venezuelaeatcc 10712sequence id:cp029197.1,其基因序列为seq id no.1,其氨基酸序列为seq id no.2。

2.如权利要求1所述的基因rs20745编码的透明质酸酶。

3.根据权利要求2所述的透明质酸酶,其特征在于:所述透明质酸酶具有32.4kda的分子量,属于透明质酸裂解酶类。

4.一株高产透明质酸酶的链霉菌工程菌株,其特征在于:所述工程菌株应用链霉菌高拷贝载体pkc1139载体,应用了gapdh启动子驱动透明质酸酶编码基因rs20745的表达,用xlnc信号肽控制成熟透明质酸酶的分泌,以变铅青链霉菌(streptomyces lividans tk24)作为底盘细胞;

5.如权利要求4所述的高产透明质酸酶的工程菌株生产制备得到的透明质酸酶。

6.利用如权利要求4所述的链霉菌工程菌株制备透明质酸酶的方法,其特征在于:包括如下步骤:

7.如权利要求5所述的透明质酸酶在酶切制备特定分子量透明质酸方面中的应用。

8.利用如权利要求5所述的透明质酸酶酶切制备特定分子量透明质酸的方法:其特征在于:包括如下步骤:

9.根据权利要求8所述的方法:其特征在于:在反应1h后200u/ml酶活的反应体系得到了4.5kda分子量的透明质酸,100u/ml酶活的反应体系得到了40kda分子量的透明质酸,50u/ml酶活的反应体系得到了90kda分子量的透明质酸,40u/ml酶活的反应体系得到了160kda分子量的透明质酸,20u/ml酶活的反应体系得到了337kda分子量的透明质酸;而在反应3h后,200u/ml酶活的反应体系得到了1.5kda分子量的透明质酸,100u/ml酶活的反应体系得到了5.5kda分子量的透明质酸,50u/ml酶活的反应体系得到了59kda分子量的透明质酸,40u/ml酶活的反应体系得到了84kda分子量的透明质酸,20u/ml酶活的反应体系得到了169kda分子量的透明质酸。

10.根据权利要求8或9所述的方法:其特征在于:所述1.5kda-2500kda分子量的透明质酸还经过提取操作,具体的操作步骤如下:


技术总结
本发明属于生物化工技术领域,公开了一株高产透明质酸酶的链霉菌工程菌株,应用链霉菌高拷贝载体pKC1139载体,应用了gapdh启动子驱动透明质酸酶编码基因RS20745的表达,用xlnc信号肽控制成熟透明质酸酶的分泌,以变铅青链霉菌作为底盘细胞。本发明相较于其他得到特定分子量透明质酸的方法具有操作简便,常温常压下即可发生反应的优势,其次只需要将高分子量透明质酸加入水中进行溶解,不需要任何其他缓冲液,在酶解反应过程中不需要加入任何盐离子及有机试剂,不会对环境造成污染。而且在反应后的产物易于纯化。基于以上分析,该发明在制备特定分子量透明质酸时具有非常广泛的应用价值。

技术研发人员:刘浩,谢周杰,段亚丹
受保护的技术使用者:天津科技大学
技术研发日:
技术公布日:2024/3/17
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