耐高温的BstDNA聚合酶突变体及其应用的制作方法

文档序号:37835450发布日期:2024-05-07 19:10阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种耐高温的bst dna聚合酶突变体,其特征在于为如下a1-a4中任一所述的蛋白质:

2.根据权利要求1所述的bst dna聚合酶突变体,其特征在于所述突变为f67s、f81l、a114l、d119n、q128g、r133y、i194v、v281i或l、n283l、l320p、t321a、q334c或h、r339c或h、l340r、i359l、s365d或i、y429w、g430e、r439c、f445l或i、e461k、t487n、t500a、m502v、n503s、r553h、a565v中任意一种或至少两种的组合。

3.根据权利要求1所述的bst dna聚合酶突变体,其特征在于为如下b1-b3中任一所述的蛋白质:

4.根据权利要求1所述的bst dna聚合酶突变体,其特征在于为如下c1-c3中任一所述的蛋白质:

5.根据权利要求1-4中任一项所述的bst dna聚合酶突变体,其特征在于所述标签为his标签,所述酶切位点为凝血酶切割位点。

6.权利要求1-5中任一项所述的bst dna聚合酶突变体的编码基因。

7.权利要求1-5中任一项所述的bst dna聚合酶突变体的表达载体。

8.权利要求1-5中任一项所述的bst dna聚合酶突变体的表达宿主菌。

9.权利要求1-5中任一项所述的bst dna聚合酶突变体在mda、rca、lamp或者rt-lamp中的应用。

10.一种试剂盒,其特征在于含有权利要求1-5中任一项所述的bst dna聚合酶突变体。


技术总结
本发明提供了一种耐高温的Bst DNA聚合酶突变体,系在截短的野生型Bst DNA聚合酶基础上通过一个或多个不同位点的氨基酸突变而成,具有更高的热稳定性,Tm值明显高于野生型Bst DNA聚合酶。相较于野生型Bst DNA聚合酶,本发明的Bst DNA聚合酶突变体在65℃孵育30min后残余活性明显提高,最高可进行70℃的RT‑LAMP反应。本发明的热稳定性提高的Bst DNA聚合酶突变体具有更广泛的应用温度,能适应更加复杂的应用场景。

技术研发人员:刘想,商曰朋,刘峰,朱思思,阳瑜红
受保护的技术使用者:镁孚泰生物科技(上海)有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/5/6
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