一种基于CRISPR-Cas12a的BVDV特异crRNA及其相关试剂盒与检测方法

文档序号:37436692发布日期:2024-03-25 19:35阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于crispr-cas12a的bvdv特异crrna,其特征在于,所述bvdv特异crrna为seqid no.1~seq id no.6任一所示crrna或seq id no.1~seq id no.6所示任意两种以上crrna混合。

2.根据权利要求1所述的bvdv特异crrna,其特征在于,所述bvdv特异crrna为seq idno.1、seq id no.3、seq id no.4和seq id no.5所示的crrna等比例混合。

3.一种基于crispr-cas12a的检测不同亚型bvdv的试剂,其特征在于,所述基于crispr-cas12a的检测不同亚型bvdv的试剂包括权利要求1或2任一所述bvdv特异crrna。

4.权利要求1或2所述bvdv特异crrna在制备检测bvdv的试剂盒中的应用。

5.权利要求3所述试剂在制备检测bvdv的试剂盒中的应用。

6.一种基于crispr-cas12a的检测不同亚型bvdv的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1或2任一所述bvdv特异crrna,bvdv 5'utr基因等温扩增试剂、crispr-cas12a蛋白酶,ssdna报告系统,核酸酶抑制剂和nebuffer 3.1。

7.根据权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述bvdv 5'utr基因等温扩增试剂包括等温扩增引物对,所述等温扩增引物对的上游引物为如seq id no.13所示的核苷酸序列,下游引物为如seq id no.17所示的核苷酸序列。

8.根据权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述ssdna报告系统为5'端fam标记、3'端bhq1标记的单链核苷酸序列。

9.权利要求6-8任一所述试剂盒在非疾病诊断目的的bvdv可视化检测中的应用。

10.一种可视化检测bvdv的方法,其特征在于,采用权利要求6-8任一所述试剂盒进行检测,包括如下步骤:


技术总结
本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a的BVDV特异crRNA及其相关试剂盒与检测方法,属于病毒检测技术领域。为解决现有的BVDV检测方法耗时长、假阳性率高、需要昂贵仪器或专业技术人员、无法实现现场实时检测的技术问题。本发明通过序列比对和筛选,获得了6种BVDV特异crRNA,并且通过进一步筛选发现crRNA混合物1在CRISPR反应中可检测目前流行BVDV亚型的所有毒株;设计了RT‑ERA引物可特异性扩增靶标序列,产物可用于下游CRISPR反应;本发明将RT‑ERA技术与CRISPR‑Cas12a系统相结合,建立了一种快速、灵敏高、特异性强的BVDV结果可视的检测方法,所述检测方法可用于BVDV的快速现场检测。本发明所述的基于CRISPR‑Cas12a的BVDV特异crRNA及其相关试剂盒与检测方法可应用于BVDV检测领域。

技术研发人员:尹鑫,王鑫杰,常继涛,王芳,姜志刚
受保护的技术使用者:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
技术研发日:
技术公布日:2024/3/24
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