一种山羊支原体山羊肺炎亚种体外培养基及制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种细菌培养基及其制备方法，确切讲本发明涉及一种山羊支原体山羊肺炎亚种体外培养基，以及这种培养基的制备方法。
【背景技术】
[0002]山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniaeMccp),是引起山羊传染性胸膜肺炎(Contag1us capripleuropneumonia, CCPP)的病原体，原称生物型F38,最早是由Macowan于1976年在肯尼亚分离得到。随后又在苏丹、突尼斯、阿曼、土耳其、乍得、乌干达、埃塞俄比亚、尼日尔、坦桑尼亚和阿联酋分离到。我国于2007年从山东分离出一株Mccp，并证实为山羊传染性胸膜肺炎的病原(辛九庆，中国预防兽医学报，2007)。山羊传染性胸膜肺炎是山羊特有的急性或慢性高度接触性传染病，以呈现纤维素性肺炎和胸外膜炎为特征。
[0003]支原体是一类特殊的微生物，无细胞壁，生长条件严格，生长缓慢，由于其基因组较小，生物合成及代谢能力有限，病原细胞需要的多种营养物质需要从外界摄取，因此对培养基的要求较高(参考:支原体学第2版吴移谋，叶元康著)。
[0004]目前预防山羊传染性胸膜肺炎的疫苗主要是灭活疫苗，制备疫苗时需要大量浓缩后才能达到所需的抗原浓度，因此培养基的成本不可忽视。高珊等(动物医学进展，2013)对山羊支原体山羊肺炎亚种培养基进行了筛选研宄，结果表明添加2g/L的丙酮酸钠、200mL/L马血清的Thiaucourt肉汤培养基生长速度更快、生长滴度更高。该培养基是由:PPL0肉汤21 g/L，葡萄糖lg/L，丙酮酸钠2g/L，质量体积比25%的酵母浸液100 ml/L，0.4%的酚红0.18 ml/L，灭活马血清200 mL/L,及水溶解的青霉素200 IU/ml构成，其pH值为7.4~7.6。用此培养基培养的山羊支原体山羊肺炎亚种，66小时生长滴度达到4X109ccu。
【发明内容】
[0005]本发明提供一种较现有技术的培养成本更低、生长时间更短的山羊支原体山羊肺炎亚种体外培养基，同时提供这种培养基的制备方法。
[0006]本发明的一种山羊支原体山羊肺炎亚种体外培养是由:PPLO肉汤21 g/L，葡萄糖2g/L，丙酮酸钠2g/L，质量体积比25%的酵母浸液100 ml/L, 0.4%的酚红0.18 ml/L,灭活马血清100 mL/L,及水溶解的青霉素200 IU/ml构成，其pH值为7.4-7.6。
[0007]本发明的山羊支原体山羊肺炎亚种体外培养基制备方法是JfPPLO肉汤、葡萄糖、丙酮酸钠、酵母浸液和酚红混合后，121°C高压灭菌20分钟，冷却至常温，再加入无菌灭活马血清，再在其中加经灭菌水溶解的青霉素，用氢氧化钠溶液调整PH值至7.4-7.6。
[0008]本发明在高珊等研宄基础上将Thiaucourt肉汤培养基中的葡萄糖由原来的Ig/L增加到2g/L，马血清由原来的20%降低到10%，这样所得到的培养基可使生长速度有所提高，同时能使培养成本有所降低。采用本发明的培养基培养山羊支原体山羊肺炎亚种，56小时生长滴度可达到4X 109ccu，在达到原有培养基生长滴度的同时，培养时间缩短10小时，更重要的是，相对于廉价葡萄糖的相对增加及昂贵马血清的大幅度减少，培养基的成本降低很多。
[0009]根据前述方法可制备出山羊支原体山羊肺炎亚种体外培养基。经过反复试验表明，采用本发明的培养基培养山羊支原体山羊肺炎亚种，56小时生长滴度可达到4 X 19CCU,在达到原有培养基生长滴度的同时，培养时间缩短10小时，更重要的是，相对于廉价葡萄糖的相对增加及昂贵马血清的大幅度减少，培养基的成本降低很多一配制100mL本发明的培养基与高珊等改进的培养基相比成本可减少约150元。
【具体实施方式】
[0010]以下是本发明的一个实施例。
[0011]配置100mL本发明的培养基:首先量取500mL的双蒸水，然后秤取PPLO肉汤21g,葡萄糖2g，丙酮酸钠2g，加入25% (m/v)酵母浸液100 ml, 0.4%酸红0.18 ml,用双蒸水定容到900 mL，121°C高压灭菌20分钟，冷却至常温，加无菌灭活马血清100 mL,加经灭菌水溶解的青霉素200 IU/ml，用氢氧化钠溶液调整pH值至7.4-7.6。
[0012]配置100mL高珊等改进的培养基:首先量取500mL的双蒸水，然后秤取PPLO肉汤21 g,葡萄糖lg，丙酮酸钠2g，加入25% (m/v)酵母浸液100 ml, 0.4%酸红0.18 ml,用双蒸水定容到800 mL, 121°C高压灭菌20分钟，冷却至常温，加无菌灭活马血清200 mL,加经灭菌水溶解的青霉素200 IU/ml，用氢氧化钠溶液调整pH值至7.4-7.6。
[0013]取相同体积的本培养基及高珊等改进的培养基进行滴度培养，结果显示，采用本发明的培养基培养山羊支原体山羊肺炎亚种，56小时生长滴度可达到4X 109ccu，高珊等改进的培养基66小时生长滴度达到4X 109ccu。在达到原有培养基生长滴度的同时，使用本发明的培养基培养时间缩短了 10小时，更重要的是，相对于廉价葡萄糖的相对增加及昂贵马血清的大幅度减少，培养基的成本降低很多。以配制100mL培养基为例，增加Ig葡萄糖成本增加0.16元(葡萄糖80元/500g，美国Amersco公司)，减少100 mL马血清成本降低150元(马血清750元/500 mL，美国Gibco公司)，即配制100mL本发明的培养基与高珊等改进的培养基相比成本减少约150元。
【主权项】
1.一种山羊支原体山羊肺炎亚种体外培养基，其特征是培养基由:PPLO肉汤21 g/L，葡萄糖2g/L，丙酮酸钠2g/L，质量体积比25%的酵母浸液100 ml/L，0.4%的酚红0.18 ml/L，灭活马血清100 mL/L,及水溶解的青霉素200 IU/ml构成，其pH值为7.4-7.6。
2.权利要求1所述的山羊支原体山羊肺炎亚种体外培养基制备方法，其特征是将PPLO肉汤、葡萄糖、丙酮酸钠、酵母浸液和酚红混合后，121°C高压灭菌20分钟，冷却至常温，再加入无菌灭活马血清，再在其中加经灭菌水溶解的青霉素，用氢氧化钠溶液调整PH值至.7.4-7.6o
【专利摘要】本发明公开一种山羊支原体山羊肺炎亚种体外培养基以及这种培养基的制备方法。本发明的山羊支原体山羊肺炎亚种体外培养基由：PPLO肉汤21g/L，葡萄糖2g/L，丙酮酸钠2g/L，质量体积比25%的酵母浸液100ml/L，0.4%的酚红0.18ml/L，灭活马血清100mL/L，及水溶解的青霉素200IU/ml构成，其pH值为7.4~7.6。采用本发明的培养基培养山羊支原体山羊肺炎亚种，56小时生长滴度可达到4×109ccu，在达到原有培养基生长滴度的同时，培养时间缩短10小时，同时培养基的成本大大降低。
【IPC分类】C12R1-35, C12N1-20
【公开号】CN104531594
【申请号】CN201510024477
【发明人】赵萍, 储岳峰, 贺英, 陈胜利, 刘永生, 逯忠新
【申请人】中国农业科学院兰州兽医研究所
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2015年1月19日