专利名称：：泌尿生殖道支原体培养基及检测方法
技术领域：
：本发明涉及泌尿生殖道微生物培养及检测方法，具体涉及泌尿生殖道解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)的培养基和检测方法。
背景技术：
：支原体是目前所知能独立生长，自行繁殖的最小微生物。它无细胞壁，分布广泛，能在人工培养基上生长，但是营养条件要求高。它们与泌尿生殖道炎症密切相关，还能引起免疫性疾病[支原体学，2008年第2版，41-44]。发病率高和致病性强的是解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)。它们与女性生殖道感染，如宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎以及一些并发症如自然流产、胎膜早破、早产等有关。Uu还可吸付精子上，阻碍其运动，干扰精子与卵子结合，引起不孕；还是引起新生儿呼吸系统和中枢神经系统感染的病原体之一。2000年后，中国在其他传染性疾病报告病例趋于稳定或下降背景下，NGU(非淋菌性尿道炎)报告病例依然呈快速上升趋势，2004年2005年全国由Uu和Mh等微生物感染所引起的NGU占到七种性病之首，构成分别达35.94%和36.78%。2005年上海地区NGU发病率达到56.87/10万[全国性病疫情分析报告，2006.20(2):1-9]。发病形势严峻。检测Uu和Mh的方法有免疫学检测、核酸测定、分离培养等。支原体属内不同种的支原体存在着交叉免疫反应，有些支原体还存在着异质性抗原，因此免疫性检测方法目前应用受到限制[中华检验医学杂志,2005,28(7):677-678]。鉴于PCR检测中存在的严重假阳性问题，中国卫生部颁布了规范性文件[卫医发(2002)10]，对临床应用此项技术开展实验诊断的单位和部门，设定严格的准入条件。况且目前为止国内市场上还没有一个合法的临床诊断试剂盒供应，因此短期内普遍开展还有难度。分离培养一直是微生物检测的"金标准"，也是支原体检测最常用的方法。纵览国内有关泌尿生殖道支原体培养的文献发现，支原体的鉴定主要依据液体培养，它依据Uu利用尿素和Mh以精氨酸为能源，分解产氨和二氧化碳，使pH值升高，含酚红指示剂的培养液由黄色变红色提示支原体生长。虽然液体培养基使用方便、快速、判断容易，事实上泌尿生殖道中某些微生物含有脲酶，能生物利用液体培养基中某些成份，使pH升高而改变颜色，出现严重的的假阳性[临床检验杂志2004，22(5):32卜322]。广谱抗生素的广泛使用，微生物的耐药性出现了很大的变迁，泌尿生殖道寄居的微生物呈现多样化[中国微生态学杂志2003,15(1):43]。杂菌的存在，一定程度上竞争Uu生长所需的营养，呈优势生长而干扰支原体最终的结果判断。另外，产尿素酶杂菌的生长导致酸碱变化，也可造成Uu液体培养结果的错误判断[河北医学2004,10(7):614-616]。固体培养通过显微镜观察有无油煎蛋状菌落生长、形态特征等性状鉴别多种支原体，但是国产固体培养基在质量上与进口的A7固体培养基相比有较大差距。进口固体培养基价格昂贵，定购周期长，培养基交得于薄可能影响检测效耒。另外，直接将样品接种到固体培养基中，其检测阳性率较低。临床实践发现，大量商品化独立使用的支原体液体、或者固体培养基产品，在敏感性和特异性方面存在较大差异，即使同一品牌的液体培养的阳性率显著高于固体培养，目前尚无优质的组合使用的支原体培养基及制备方法。
发明内容本发明是提供检测泌尿生殖道Uu和Mh的培养基及检测方法，根据2种支原体生物学特性，优化了维持支原体生长的营养、抑制杂菌生长抗生素的组合。突出了液体培养基可以提高阳性率、固体培养基避免了其他微生物因为改变颜色造成的假阳性，并且显著提高了固体培养的阳性率。当组合使用，提高了泌尿生殖道Uu和Mh支原体检测的敏感性和特异性。本发明提供的泌尿生殖道支原体培养基和检测方法，其特征是含有胰酶大豆肉汤、酵母浸液、尿素、精氨酸、L-半胱氨酸、酚红、HEPES液、小牛血清、硫酸锰、万古霉素、两性霉素B、甲氧苄氨嘧啶、多粘菌素、青霉素等要素的配方，并且液体培养基和固体培养基在培养、分离、鉴别泌尿道支原体时组合使用。液体培养基用于接种临床样品、抑制杂菌、具有同时促进Uu和Mh支原体生长、指示是否有支原体生长；固体培养基用于观察培养物是否支原体、鉴别解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)。本发明提供的泌尿生殖道支原体培养基和检测方法，具有促进支原体的生长，延长Uu在液体中生长对数期时间，降低因为pH升高导致Uu转种到固体培养基的假阴性率，转种过程不需要微孔过滤装置虑除细菌，固体培养中抑制杂菌的效果显著，支原体生长迅速，Uu和Mh在24小时就可以出现菌落，背景干扰少，Uu和Mh菌落形态典型，容易鉴别，Uu和Mh在固体和液体培养的阳性率比较吻合，临床样品的检测阳性率高。本发明提供的泌尿生殖道支原体培养基和检测方法包括-.、液体培养基每1000ml液体组成:1.胰酶大豆肉汤5~10g2.NaCl3~7g3.磷酸二氢钾0.02~0.5g4.酵母浸液5~20g5.尿素15g6.精氨酸0.1~1g7.L-半胱氨酸20~50mg8.服PESO.O卜lg9.酚红530mg10.万古霉素0.1~5mg11.两性霉素B1050nl12.甲氧苄氨嘧啶0.1~5mg13.多粘菌素0.3~6mg14.小牛血清兩ml15.蒸馏水至1000ml-2-二、固体培养基每lOOOml体积组成:1.胰酶大豆肉汤2.硫酸锰0.01~0.033.琼脂4.蒸馏水5.小牛血清6.酵母浸液7.尿素8.精氨酸9.L-半胱氨酸10.青霉素(钾盐)G10万U/ml11.两性霉素B12.蒸馏水1~3g0.1~0.5g0.1~0.5g20-30mg0.01~0.02g10~20|il至1000ml三、其检测方法是液体培养基和固体培养基在培养、分离、鉴别泌尿生殖道支原体时组合使用。将样品拭子直接置液体培养基中搅拌十次、或者液状样品取10(HU注入液体培养基中，培养4至24小时，无论液体培养基是否改变颜色，不需要微孔过滤器，直接取出10nl50pl滴种或者划线转种到固体培养基上，培养24小时后，在10倍物镜下观察是否有支原体生长。固体培养基上的支原体具有金属光泽，Uu呈现棕黑色海胆状菌落，Mh呈现比Uu明显大的"煎蛋"形态典型菌落，与背景反差大容易鉴别。泌尿生殖道支原体培养基的配置包括以下程序一、液体培养基的配置1.称取胰酶大豆肉汤干粉5~10g,在600ml纯化水中溶解；2.加入NaCl3~7g和磷酸二氢钾0.02~0.5g;3.用1N的HCL调正pH至6.2土0.1，置121。C高压灭菌15分钟，冷却到56'C备用；4.分别称取酵母浸液、尿素、精氨酸、L-半胱氨酸、酚红，加入适量灭菌纯化水溶解；5.经过0.22pm过滤器后加人到冷却的培养基中；6.按照配方分别称取万古霉素、两性霉素B、甲氧苄氨嘧啶和多粘菌素，在适量灭菌纯化水溶解，加入到上述培养基中；7.加入小牛血清100ml;8.补足]OOOml体积培养基；9.用1N的HCL调正pH至6,2土0.2后，分装至经过高压灭菌的螺口瓶中，置28。C保存备用。二、固体培养基的配置l.分别称取胰酶大豆肉汤干粉、琼脂粉、硫酸锰，加入500ml纯化水溶解；2.用IN的HCL调正pH至6.2±0.1溶解后；3.置12rC高压灭菌15分钟，冷却到56'C备用；4.称取酵母浸液、尿素、精氨酸、L-半胱氨酸、酚红，加入适量灭菌纯化水溶解；5.经过0.22um过滤器后，加入到保温的培养基中；6.分别称取两性霉素B和青霉素，在适量灭菌纯化水溶解，加入到上述培养基中；7.加入小牛血清200ml;8.用预温灭菌纯化水补足1000ml体积培养基；9.用1NHCL调正pH至6.2±0.1后;10.倾注在50mnTl00咖直径的无菌平皿，室温自然冷却后置28'C保存备用。图1是固体培养基显微镜下观察支原体菌落图(400倍)固体培养在显微镜下看到低倍下Uu菌落具有金属光泽，呈现棕黑色海胆状菌落；大小直径约50nm30(^m圆形多见，菌落边缘较中央透明，"油煎蛋"状菌落的外边比较窄，如果Uu和Mh混合感染，Uii菌落数量明显比Mh多。Mh菌落比Uu明显大，大小直径约300,800nm圆形多见，菌落边缘较中央透明，"油煎蛋"状菌落的外边比较宽。固体培养基中杂质少，没有污染菌生长。支原体菌落生长良好，并且可见分裂相菌落，支原体菌落与背景反差大容易鉴别。图2是固体培养基显微镜下观察支原体Dienes染色菌落图(400倍)固体培养的Dienes染色在显微镜下看到菌落不出现褪色，Mh菌落比Uu明显大，"油煎蛋"状菌落边缘较Uu宽。固体培养基中杂质少，没有污染菌生长。支原体菌落生长良好，兰色的支原体菌落与背景反差大，肉眼即可容易鉴别。具体实施例方式实施例l培养基的配置取1只2000ml的洁净小口径、耐高压的带盖(可塞)玻璃容器，称取胰酶大豆肉汤干粉5g10g溶解到600ml纯化水中，一并加入NaCl和磷酸二氢钾，用1N的HCL调正至pH6.1~6.3，贴上消毒灭菌指示纸条，置高压容器内，排除冷空气后121。C灭菌15分钟，待压力归零后排除余汽开盖自然冷却备用。取1个洁净容器加入适量灭菌纯化水，按照配方分别称取酵母浸液、尿素、精氨酸、L-半胱氨酸、酚红逐一溶解到容器中，加压经过0.22^111过滤器后，将溶液加人到冷却的上述培养基中，取无菌容器注入适量灭菌水，按照配方分别称取万古霉素、两性霉素B、甲氧苄氨嘧啶和多粘菌素逐一溶解，并且加入到上述培养基中，再加入小牛血清100ml，并且用灭菌纯化水补足1000ml总体积，用1N的HCL调正pH6.1~6.3后，分装至经过高压灭菌的螺口瓶中，旋紧盖，贴上标签置28'C保存备用。取分装后的液体培养基，无菌条件下划种营养和血琼脂，连同支原体液体培养基置37'C培养24小时，进行培养基的无菌实验。实施例2固体培养基的配置取i只2000ml的洁净小口径、耐高压的带盖(可塞)厚壁玻璃容器，加入约500ml纯化水，按照配方分别称取胰酶大豆肉汤干粉、琼脂粉、硫酸锰，逐一溶解到容器内，用1N的HCL调正至pH6.16.3，贴上消毒灭菌指示纸条，置高压容器内，排除冷空气后12rC灭菌15分钟，待压力归零后排除余汽开盖自然冷却到56'C，保温状态下备用。取1个洁净容器加入适量灭菌纯化水，称取酵母浸液、尿素、精氨酸、L-半胱氨酸、酚红逐一加入容器拿溶解，通过0.22pm的过滤器后注入保温的培养基中，取无菌容器注入适量灭菌水，先后溶解两性霉素B和青霉素，然后加入到上述培养基中，再加入小牛血清200ml，保温状态下混匀并且用预温灭菌纯化水补足1000ml体积，最后用1NHCL调正pH至pH6.1~6.3后，倾注在50mm100mm直径的无菌平皿，室温自然冷却后置28'C保存备用。取分装后的固体平皿培养基，置37。C培养24小时，进行培养基的无菌实验。实施例3不同培养基对临床样品检测能力的比对取临床样品的拭子，放入含有50nl~20(Hd生理盐水的无菌小试管中，充分搅拌后弃拭子，将液体样品均等地分别加入本发明、进口A和国产B的液体培养基中，在37°C、5%C02条件下培养24小时，各自转种到本发明和进口A的固体培养基中，由于国产B商品没有相应的固体培养基，只比较液体培养基的性能。含有待检测样品的液体和固体培养基，继续在37。C、5%C02条件下培养，至72小时。每12小时观察培养基如下指标液体培养基是否改变颜色和时间、浑浊度，固体培养菌落生长率，以了解培养的阳性率、pH缓冲能力，记录3种培养基相关指标的改变现象，统计结果见下表3种培养基Uu样品检测能力比对结果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>3种培养基Mh样品检测能力比对结果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>实施例4最大稀释浓度的标准菌株生长能力比较将ATCC27813(Uu)和ATCC23114(Mh)标准支原体菌株复苏后，分别加人到液体培养基，置37。C、5%0)2条件下培养直到颜色刚出现变化，作为增菌液。取经高压灭菌的试管数根排列在试管架中，从第二管起每孔加入1.8ml肉汤，第一管加入2ml原倍增菌液，从第一管中吸出0.2ml，加入后一孔，混匀后吸出0.2ml加入后一孔，以次类推……将增菌液作连续10倍稀释，各取5(^1稀释培养物分别接种到本发明、进口A和国产B的液体培养基中，每个对应浓度接种3管液体培养基以计算均数，每个液体培养基体积为3ml，置37'C、5%C02条件下培养24小时，各自转种到本发明和进口A的固体培养基中，由于国产B商品没有相应的固体培养基，只比较液体培养基的性能。液体和固体培养基继续在37。C、5%C02条件下培养，至72小时，结合液体和固体培养的结果比较性能，以了解最低检测限。3种培养基标准菌株生长最大稀释倍数<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>抑制干扰细菌的能力比较试验选择临床泌尿生殖道常见革兰阳性菌嗜酸乳杆菌(1)、金黄色葡萄球菌(2)、表皮葡萄球菌(3)、粪肠球菌(4)、D型链球菌(5);革兰阴性菌大肠埃希氏(6)、肺炎克雷伯(7)、铜绿假单胞菌(8)和白假丝酵母(9)各l株，取1()8CFU/ml浓度的菌液5(^l分别加入本发明、进口A和国产B的3ml液体培养基中，置37'C、5%C02条件下培养24小时，各自转种到本发明和进口A的固体培养基中，由于国产B商品没有相应的固体培养基，只比较液体培养基的性能。液体和固体培养基继续在37'C、5%0)2条件下培养，至72小时，结合液体和固体培养的结果比较性能，以了解假阳性率、杂菌抑制能力，结果详见下表3种培养基抑制干扰细菌的能力比较试验<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>实施例6泌尿生殖道支原体检测方法将样品拭子直接置液体培养基中充分搅拌，或者取液状样品lOOjxl直接注入液体培养基中，置37'C、5%C02条件下培养4至24小时，无论液体培养基是否改变颜色，用微量移液头深入液体培养基的中部，取出10nl50nl直接滴种、或者划线转种到固体培养基上，继续置37'C、5%C02条件下培养24小时后，在10或者40倍物镜下观察是否有支原体生长Uu菌落具有金属光泽，呈现棕黑色海胆状菌落，数量明显比Mh菌落多，直径约50jxm30(^m圆形多见，菌落边缘较中央透明，"油煎蛋"状菌落的外边比较窄。Mh菌落比Uu明显大，直径约300晔~800,圆形多见，菌落边缘较中央透明，"油煎蛋"状菌落的外边比较宽。固体培养基中杂质少，没有污染菌生长，支原体菌落与背景反差大而容易鉴别。(见说明书附图1)用Dienes染色液(每配制100ml含美兰2.5g;天青II1.5g;麦芽糖10g;碳酸钠0.5g;苯甲酸0.2g)直接滴加在固体培养基上，常温下染色10分钟，用蒸馏水冲洗2次，在显微镜(100~400倍)下观察支原体菌落不出现褪色，Mh菌落比Uu菌落明显大，"油煎蛋"状菌落边缘较Uu宽。固体培养基中杂质少，没有污染菌生长。支原体菌落生长良好，兰色的支原体菌落与背景反差大，肉眼即可容易鉴别。(见说明书附图2)。权利要求1.泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征的组成是由液体和固体培养基组成，根据解脲脲原体(Uu)利人型支原体(Mh)生物学特性，优化了维持支原体生长的营养和环境、抑制杂菌生长抗生素组合，具体涉及培养基配方特征是含有胰酶大豆肉汤、酵母浸液、尿素、精氨酸、L-半胱氨酸、酚红、HEPES液、小牛(胎牛)血清、硫酸锰、万古霉素、两性霉素B、甲氧苄氨嘧啶、多粘菌素、青霉素等的要素和组合；具体涉及其液体培养基和固体培养基在培养、分离、鉴别泌尿生殖道支原体时组合使用，突出了培养基抑制杂菌能力，接种和转种样品不需要微孔滤器，支原体生长迅速；液体培养基具有维持和延长支原体生长对数期、指示生长；固体培养基观察Uu和Mh菌落，与背景反差大容易鉴别，其特征是避免了其他生物利用液体培养基中营养的微生物而引起的假阳性或假阴性，显著提高了泌尿生殖道支原体检测的敏感性和特异性。(1)泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是培养基的要素和组合包括A液体培养基每1000ml液体组成1.胰酶大豆肉汤5～10g2.NaCl3～7g3.磷酸二氢钾0.02～0.5g4.酵母浸液5～20g5.尿素1～5g6.精氨酸0.1～1g7.L-半胱氨酸20～50mg8.HEPES0.01～1g9.酚红5～30mg10.万古霉素0.1～5mg11.两性霉素B10～50μl12.甲氧苄氨嘧啶0.1～5mg13.多粘菌素0.3～6mg14.小牛血清100ml15.蒸馏水至1000mlB固体培养基每1000ml体积组成1.胰酶大豆肉汤10～50g2.硫酸锰0.01～0.03g3.琼脂11g4.蒸馏水500ml5.小牛血清200ml6.酵母浸液1～3g7.尿素0.1～0.5g8.精氨酸0.1～0.5g9.L-半胱氨酸20～30mg10.青霉素(钾盐)G10万U/ml0.01～0.02g11.两性霉素B10～20μl12.蒸馏水至1000ml(2)泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其检测方法的特征是液体培养基和固体培养基在培养、分离、鉴别泌尿生殖道支原体时组合使用。2.按照权利要求1所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是每1000ml液体和固体培养基中胰,大豆肉汤干粉分别是510g和10~50g。3.按照权利要求1所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特祉是每1000ml液体和固体培养基中L-半胱氨酸含量分别是20~50mg和20~30mg。4.按照权利要求1所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是每lOOOral液体培养基中HEPES液5~30mg。5.按照权利耍求1所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是每1000ml液体和固体培养基中两性霉素B含量分别是1050n!和10~20nl。6.按照权利耍求1所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是每1000ml液体培养基中万古霉素含量是0.15mg。7.按照权利要求1所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是每1000ml液体培养基中甲氧卡氨嘧啶含量分别是0.1-5mg。8.按照权利要求1所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是每1000ml液体培养基中多^te菌素是0.36mg。9.按照权利要求1所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是每1000ml固体培养基中硫酸锰0.01~0.03g。10.按照权利要求1所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是液体培养基用十接种临床样品、抑制杂菌、促进支原体生长、指示是否有支原体生长；固体培养基用于观察培养物是否支原体、鉴别解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)。11.按照权利要求1所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法培养基及制备方法，其特征的主要步骤是11.1液体培养基ll丄l称取胰酶大豆肉汤干粉，加入600ml纯化水溶解，加入NaCl3~7g和磷酸二氢钾0.02~0.5g;11丄2用1NHCL调正pH至6.2士0.1;1U.3置121。C，15分钟高压灭菌，冷却到56。C;11.1.4按照权利要求1所述分别称取酵母浸液、尿素、精氨酸、L-半胱氨酸、酚红，加入适量灭菌纯化水溶解，通过0.22nm过滤器后，加人到基础培养基中；11.1.5按照权利耍求1所述分别称取万古霉素、两性霉素B、甲氧节氨喷咬和多粘菌素，在适量灭菌纯化水溶解，加入到上述培养基中；1U.6加入小牛血清100ml;11丄7补足1000ml体积培养基，用1NHCL调正pH至6.2±0.2后，分装至经过高压灭菌的螺口瓶中，置28'C保存备用。11.2固体培养基(11.2.1按照权利要求l所述分别称取胰酶大豆肉汤干粉、琼脂粉、硫酸锰，加入500ml纯化水溶解；11.2.2用1NHCL调正pH至6.2士0.l溶解后；11.2.3置12rC，15分钟高压灭菌,冷却到56。C备用；11.2.4按照权利要求1所述分别称取酵母浸液、尿素、精氨酸、L-半胱氨酸、酚红，加入适量灭菌纯化水溶解，通过0.22nm过滤器后，加入道基础培养基中；11.2.5分别称取两性霉素B和青霉素，在适量灭菌纯化水溶解，加入到上述培养基中；11.2.6加入小牛血清200ml;11.2.7用预温灭菌纯化水补足1000ml体积培养基。11.2.8用1NHCL调正pH至6.2土0.l后，倾注在70mm直径的无菌平皿，室温自然冷却后置置28'C保存备用。12.按照权利耍求11所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是制备的培养基含有胰酶大豆肉汤、酵母浸液、尿素、精氨酸、L-半胱氨酸、酚红、HEPES液、小牛血清、硫酸锰、万古霉素、两性霉素B、甲氧苄氨嘧啶、多粘菌素、青霉素等的要素和组合。具有促进支原体的生长，延长Uu在液体培养基中生长对数期时间，降低因为pH升高导致Uu死亡转种到固体培养基的假阴性率，固体培养基中标本的背景杂质干扰物少。13.按照权利要求1所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是先将样品接种到液体培养基中，无论液体培养基是否改变颜色，然后转种到固体培养基。14.按照权利要求13所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是转种到固体培养时，不需要微孔过滤装置虑除细菌。15.按照权利要求14所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是固体培养中抑制杂菌的能力强，效果显著。16.按照权利要求13所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是固体培养中支原体生L々迅速，Uu和Mh在24小时就可以出现典型菌落。17.按照权利要求16所述的泌尿生殖道支原体培养基及检测方法，其特征是固体培养基在显微镜下观察转种标本屮支原体具有金属光泽，固体培养的Uu和Mh菌落形态典型，与背景反差大容易鉴别。18.按照权利要求13所述的泌尿生殖道支原休培养基及检测方法，其特征是Uu和Mh在液体和固体培养的阳性率比较吻合，临床样品的阳性检测率高。全文摘要本发明涉及泌尿生殖道微生物培养及检测方法，具体涉及泌尿生殖道解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)培养基和检测方法。培养基由液体和固体组成，在培养、分离、鉴别支原体时组合使用。配方含有胰酶大豆肉汤、酵母浸液、尿素、精氨酸、L-半胱氨酸、酚红、HEPES液、小牛(胎牛)血清、硫酸锰、万古霉素、两性霉素B、甲氧苄氨嘧啶、多粘菌素、青霉素等的要素，优化了维持支原体生长的营养、抑制杂菌生长抗生素组合，接种和转种样品不需要微孔滤器，支原体生长迅速；液体培养基具有维持和延长支原体生长对数期、指示生长；固体培养基观察Uu和Mh菌落，与背景反差大容易鉴别，显著提高了泌尿生殖道支原体检测的敏感性和特异性。文档编号C12N1/20GK101555457SQ20081003570公开日2009年10月14日申请日期2008年4月8日优先权日2008年4月8日发明者磊吴,阳杨,顾伟鸣申请人:上海市皮肤病性病医院