L蔗糖。
[0021] 步骤4,将灭菌后的发酵罐接入600ml的初始发酵培养基，利用储气罐控制C02和 空气的混合气(体积比为1:5 )的通气量为2vvm，搅拌转速为50r/min，按照接种量为10% (v/v)接入发酵菌种，初糖浓度为150g/L，当培养基糖耗完，使用碳源补料罐一次性添加糖， 使糖浓度达到30g/L，全程使用氢氧化钠控制pH为6. 5,发酵温度：37°C，发酵60h结束。
[0022] 实施例3 步骤1至步骤3同实施例1。
[0023] 步骤4,将灭菌后的发酵罐接入600ml的初始发酵培养基，利用储气罐控制C02和 空气的混合气（体积比为1:3 )的通气量为3vvm，搅拌转速为500r/min，按照接种量为 10% (v/v)接入发酵菌种，初糖为30g/L，当培养基糖耗完，使用碳源补料罐一次性添加糖， 使糖浓度达到30g/L，全程使用氢氧化镁控制pH为6. 5,发酵温度：37 °C，发酵30小时结束。
[0024] 实施例4 步骤1至步骤3同实施例1，其中碳源补料罐培养液为淀粉糖化液。
[0025] 步骤4,将灭菌后的发酵罐接入600ml的初始发酵培养基，利用储气罐控制C02和 空气的混合气（体积比为1:1 )的通气量为2vvm，搅拌转速为300r/min，按照接种量为 10% (v/v)接入发酵菌种，初糖为50g/L，当培养基糖耗完，使用碳源补料罐一次性添加糖， 使糖浓度达到30g/L，全程使用碳酸钾和碳酸镁控制pH为6. 5,发酵温度：37°C，发酵72小 时结束。
[0026] 实施例5 步骤1至步骤3同实施例1，其中碳源补料罐培养液为糖蜜。
[0027] 步骤4,将灭菌后的发酵罐接入600ml的初始发酵培养基，利用储气罐控制C02和 空气的混合气(体积比：1:5 )的通气量为2vvm，搅拌转速为200r/min，按照接种量为10% (v/v)接入发酵菌种，初糖为50g/L，当培养基糖耗完，使用碳源补料罐一次性添加糖，使糖 浓度达到30g/L，全程使用氢氧化钾控制pH为6. 5,发酵温度：37°C，发酵30小时结束。
[0028] 实施例6 步骤1至步骤3同实施例1，其中碳源补料罐培养液为木质纤维素水解液。
[0029] 步骤4,将灭菌后的发酵罐接入600ml的初始发酵培养基，利用储气罐控制C02和 空气的混合气（体积比为1:5 )的通气量为2vvm，搅拌转速为300r/min，按照接种量为 10% (v/v)接入发酵菌种，初糖为50g/L，当培养基糖耗完，使用碳源补料罐一次性添加糖， 使糖浓度达到30g/L，全程使用碳酸钠控制pH为6. 8,发酵温度：37°C，发酵72小时结束。
[0030] 将上述实施例的发酵物进行液相测定，所得产物如数据表1所示。
[0031] 表1本发明实施例1-6发酵产率记录表
【主权项】
1. 一种用放线杆菌微氧发酵产丙酮酸的方法，其特征在于：以产琥珀酸放线杆菌为菌 株在微氧环境下发酵产丙酮酸。
2. 根据权利要求1所述的用放线杆菌微氧发酵产丙酮酸的方法，其特征在于，包括以 下步骤： 步骤1，配种子培养基、发酵培养基、碳源补料罐培养液； 步骤2,对发酵罐、碳源补料罐、种子培养基、发酵培养基、碳源补料罐培养液以及血清 瓶进行灭菌处理； 步骤3,取灭菌后的血清瓶，接入种子培养基，通入C02后再接入产琥珀酸放线杆菌，摇 床培养后作为发酵菌种； 步骤4,在灭菌后的发酵罐接入发酵培养基，通入气体，再按照接种量体积比为3~10% 接入发酵菌种后，通过调控通气量、搅拌转速、初糖浓度和补糖浓度，改变进气成分和pH调 节剂，发酵30~72h得丙酮酸，发酵全程pH为6. 5~7. 5,温度为35~40°C。
3. 根据权利要求2所述的用放线杆菌微氧发酵产丙酮酸的方法，其特征在于：所述步 骤1的种子培养基成分包括：葡萄糖，酵母膏，玉米楽，NaHC0 3, NaH2P04 ? 2H20, K2HP04 ? 3H20， pH 7. 0 ;发酵培养基成分包括：葡萄糖，酵母膏，玉米楽，乙酸钠，KH2P04，MgCl2 NaCl，Na2HP04 ? 12H20, NaH2P04 ? 2H20, pH 7. 0 ;碳源补料培养液：葡萄糖、蔗糖、淀粉糖化液、 糖蜜或木质纤维素水解液。
4. 根据权利要求2所述的用放线杆菌微氧发酵产丙酮酸的方法，其特征在于：所述步 骤4的进气成分为空气或者0)2和空气的混合气，所述通气量为1~3 vvm。
5. 根据权利要求4所述的用放线杆菌微氧发酵产丙酮酸的方法，其特征在于：所述CO 2 和空气的混合气的体积比为1:5、1:3或1:1。
6. 根据权利要求2所述的用放线杆菌微氧发酵产丙酮酸的方法，其特征在于：所述步 骤4的搅拌转速为50~500 r/min，所述发酵培养基的体积为0. 05~50000L。
7. 根据权利要求1所述的用放线杆菌微氧发酵产丙酮酸的方法，其特征在于：所述产 琥珀酸放线杆菌为产琥珀酸放线杆菌NJ113或产琥珀酸放线杆菌130Z。
8. 根据权利要求2所述的用放线杆菌微氧发酵产丙酮酸的方法，其特征在于：所述pH 调节剂为碳酸钠、碳酸钾、碳酸镁、氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化镁中的一种或者多种。
9. 根据权利要求3所述的用放线杆菌微氧发酵产丙酮酸的方法，其特征在于：所述发 酵培养基中糖为葡萄糖、蔗糖、淀粉糖化液、糖蜜或木质纤维素水解液中的任一种。
10. 根据权利要求2所述的用放线杆菌微氧发酵产丙酮酸的方法，其特征在于：所述步 骤4的初糖浓度为30~150 g/L，补糖浓度为30 g/L。
【专利摘要】一种用放线杆菌微氧发酵产丙酮酸的方法，以产琥珀酸放线杆菌为菌株在微氧环境下发酵产丙酮酸，具体包括：步骤1，配种子培养基、发酵培养基、碳源补料罐培养液；步骤2，对发酵罐、碳源补料罐、种子培养基、发酵培养基、碳源补料罐培养液以及血清瓶进行灭菌处理；步骤3，取灭菌后的血清瓶接入种子培养基，通入CO2后再接入产琥珀酸放线杆菌培养后作为发酵菌种；步骤4，在灭菌后的发酵罐接入发酵培养基，通入气体再接入发酵菌种后，通过调控通气量、搅拌转速、初糖浓度和补糖浓度，改变进气成分和pH调节剂发酵得丙酮酸。以野生型菌株为生产菌株，菌株性能稳定，产率高，工艺简单，成本低廉，具有良好的市场前景。
【IPC分类】C12R1-01, C12P7-40
【公开号】CN104531782
【申请号】CN201410845465
【发明人】陈可泉, 王震, 刘泽蒙, 肖文, 李艳, 何珣, 欧阳平凯
【申请人】南京工业大学
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月31日