一种丁丙诺啡人工抗原的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种丁丙诺啡人工抗原的制备方法。
【背景技术】
[0002] 丁丙诺啡（BUP)属于麻醉镇痛药，为阿片受体部分激动剂。镇痛作用强于哌替啶。 起效慢，持续时间长。对呼吸有抑制作用。药物依赖性近似吗啡，与吗啡比较，具有作用时 间较长、药物依赖性低的特点。丁丙诺啡除了具有镇痛作用外，还对嗜吸毒品者产生戒毒治 疗作用。其结构式为：
[0003]
【主权项】
1. 一种丁丙诺啡人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 制备人工半抗原： (a) 将盐酸丁丙诺啡溶于纯化水，滴加氨水，游离使之pH?9 ;用乙酸乙酯萃取，转干， 得到白色固体产物I ;TLC:层析液为95%乙醇：氨水：二氯甲烷：1，4_二氧六环=8: 1: 10: I (v/v)，产物 Rf =〇· 8?0· 9 ; (b) 将产物I溶于5ml无水吡啶中，加入200mg 丁二酸酐，KKTC回流搅拌反应20小 时以上；反应结束后，将溶剂减压蒸馏，用二氯甲烷萃取，转干得棕褐色丁丙诺啡半抗原 II ;TLC:层析液为95%乙醇：氨水：二氯甲烧：1,4-二氧六环=8: 1: 10: l(v/v),产物Rf =0· 3?0· 4 ; (2) 制备丁丙诺啡人工抗原： (c) 将丁丙诺啡半抗原II溶于5ml N，N-二甲基甲酰胺中，加入40mg N-羟基琥珀酰 亚胺、72mg环己基碳酰二亚胺，室温搅拌反应20小时以上，反应结束后离心取上清液记为A 液； (d) 将氯化钠与十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠以摩尔比为78. 3:4. 2:1溶于双 蒸水中，制备钠离子浓度为〇. lmol/L的PBS缓冲液，pH为7. 2~7. 4 ; (e) 将牛血清蛋白溶于PBS缓冲液中，得到浓度为5mg/ml的B液； (f) 将A液缓慢滴加到B液，A液与B液的体积比为1:5,得到的混合液在2-8°C条件 下静置保存过夜，得到人工抗原混合液； (g) 将人工抗原混合液于PBS缓冲液中透析，透析结束后离心取上清液即得到人工抗 原：丁丙诺啡-牛血清蛋白。
【专利摘要】本发明提供了一种丁丙诺啡人工抗原的制备方法，第一步为半抗原的制备及检测：以盐酸丁丙诺啡与丁二酸酐为原料通过游离，接臂，反应得到含羧基的半抗原；第二步为人工抗原的制备与检测：通过碳二亚胺法使之与牛血清蛋白(BSA)结合制备丁丙诺啡的人工抗原即丁丙诺啡-牛血清蛋白。所制备的丁丙诺啡人工抗原可进行动物免疫，取得相应的丁丙诺啡抗体，可用于各种丁丙诺啡类免疫分析法的研究，为丁丙诺啡的检测提供更加方便快速准确的途径。
【IPC分类】C07K1-107, C07K14-765
【公开号】CN104558152
【申请号】CN201310522590
【发明人】韩洁茹, 董媛媛
【申请人】艾博生物医药(杭州)有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月29日