一株桦褐孔菌qd04及其转化虎杖生成白藜芦醇、三萜皂苷和多糖的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然产物的生物转化和发酵工程技术领域，具体涉及一株禅褐孔菌 孤04及其转化虎杖生成白黎芦醇、H聰皂巧和多糖的方法。
【背景技术】
[0002] 白黎芦醇（3,4'，5- H羟基-反式-二苯己帰）是一种非黄丽类多酷化合物，存在 于虎杖、葡萄、花生等70余种植物中，是植物处于逆境下产生的一种植物抗毒素。研究表明 白黎芦醇具有抗癌、抗氧化、保护也血管系统、清除自由基和延缓衰老等功效。
[0003] 白黎芦醇的生产方法有化学合成和从天然植物中提取。化学合成法成本高，污染 环境，所W目前白黎芦醇的生产主要是从植物中提取。然而，植物中的白黎芦醇含量特别 低，其中在虎杖中含量最高，但也仅达到0. 43% (汉中地区)，该就使得其分离纯化成本偏高。 而白黎芦醇类似物白黎芦醇巧在植物中的含量远高于白黎芦醇。在虎杖中，白黎芦醇巧的 含量可达到2. 5% (汉中地区）。如果将白黎芦醇巧转化为白黎芦醇，白黎芦醇的产率可大幅 度提局。
[0004] 传统上，巧元的获得是通过水解相应的糖巧来实现的。但水解反应需要在高温高 压下由酸或碱催化来完成，对设备要求高，且对环境造成污染。相比之下，生物转化法具有 条件温和，过程简单，污染小等优点，已经成为药物修饰的重要手段。
[0005] 将白黎芦醇巧转化为白黎芦醇主要是通过酶法转化和微生物转化实现的。例如， 在粉末状虎杖原料中加入复合酶恒温酶解反应48~72小时，或者在虎杖提取液中加入纤维 素酶进行水解。酶法转化虽然取得了一定的效果，但是酶价格昂贵，限制了该些方法的推广 使用。一些研究者利用微生物转化虎杖的白黎芦醇巧粗提物，虽然白黎芦醇转化率较高(超 过95%)，但提取白黎芦醇巧增加了操作步骤且需要大量有机溶剂。另有研究将浸润后的虎 杖置于温度为20~5(TC的容器内自然发酵24~96小时或者在虎杖中加入专用微生物进行转 化提高了白黎芦醇的产率。但自然发酵过程中的菌群未知，条件难W控制，且空气中的霉菌 有可能产生有毒物质；专用微生物转化法中所用微生物未公开，无法验证和重复，其实用性 受到极大限制。再者，已报道的高效转化白黎芦醇巧的微生物菌种主要是霉菌，该样不仅得 到的白黎芦醇产品可能存在安全隐患，发酵过程中还产生大量菌丝体和药渣，造成资源浪 费和环境污染。
[0006] 药用真菌中的白腐菌能够同时分泌纤维素酶和木质素降解酶，比霉菌更适合水解 天然木质纤维素。研究表明，禅褐孔菌对液体深层发酵培养基中的甘藏渣、稻杆、麦杆和花 生壳的木质素、纤维素、半纤维素成分均有较好的降解效果。同时，禅褐孔菌主要活性成分 H聰皂巧在抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化和调节也血管系统等方面均呈现较好的生物活 性；禅褐孔菌多糖具有降血糖及血脂、抗病毒及肿瘤、抗氧化及衰老、抗炎及抗凝血、增强免 疫力和止痛等功效。另外，发酵产物禅褐孔菌菌丝体含有丰富的人体必需氨基酸，具有较高 的营养价值。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一株禅褐孔菌孤04及其转化虎杖生成白黎芦醇、H聰皂巧 和多糖的方法，所述禅褐孔菌孤〇4(//7(9/7(9加S 于中国典型培养物保藏中也保藏， 编号为CCTCC M 2015036, W下简称禅褐孔菌孤04。
[0008] 本发明的另一目的是禅褐孔菌孤04利用虎杖作为主要碳源，将植物中的白黎芦 醇巧转化为白黎芦醇，合成自身活性成分多糖和H聰皂巧，大大提高了白黎芦醇的收率。
[0009] 为实现上述发明目的，本发明采用W下技术方案予W实现： 本发明提供了一株禅褐孔菌孤04,其分类命名为禅褐孔菌/化wotos oW切W/S，保藏 于中国典型培养物保藏中也，其保藏编号为CCTCC M 2015036。
[0010] 所述孤04的菌落呈圆形，初始时为绒毛状，后变为棉絮状，具有同也轮纹；菌丝无 色透明，具有隔膜，树状分支较多，呈现交叉网状，菌丝前端较齐短。
[0011] 本发明还提供了所述的禅褐孔菌孤04转化虎杖生成白黎芦醇、H聰皂巧和多糖 的方法，它包括W下步骤： 1) 种子培养：将所述禅褐孔菌孤04接种到种子培养基中进行培养得种子培养液，摇床 转速为100~2(K)巧m，温度为20~3(TC，培养时间为4~6 d ; 2) 发酵培养；将所述种子培养液接种到发酵培养基中，接种量为按照体积比5%~15%， 摇床转速为100~2(K)巧m，温度20~3(TC，培养时间为8~12 d，发酵产物中含有所述白黎芦 醇、H聰皂巧和多糖。
[0012] 对上述技术方案的进一步改进；所述种子培养基的组分包括葡萄糖1~3%、蛋白腺 0. 5~2. 0%、KH2PO4 0. 2~0. 4%、M拆〇4 ? 7&0 0. 1~0. 3%和款皮0. 5~2%，按质量体积百分比计。
[0013] 对上述技术方案的进一步改进；所述发酵培养基包括碳源、氮源、无机盐和诱导 物，所述碳源包括添加量占培养基质量体积比为0. 5~8. 0%的虎杖；所述氮源的添加量占培 养基质量体积比为0. 5~2. 5%，所述诱导物为占培养基质量体积比为0. 5~4. 0%的款皮。
[0014] 对上述技术方案的进一步改进；所述碳源还包括添加量占培养基质量体积比为 0. 5~2. 0%的补充碳源，所述补充碳源为麦芽糖、葡萄糖、可溶性淀粉、藏糖或玉米粉中的一 种或几种。
[0015] 对上述技术方案的进一步改进；所述氮源为蛋白腺、黄豆粉、豆稍、牛肉膏、酵母膏 或（NH4)2S0冲的一种或几种。
[0016] 对上述技术方案的进一步改进；所述无机盐为KH2PO4和M拆〇4 ? 7&0,其添加量分 别占培养基质量体积比为0. 3%和0. 15〇/〇。
[0017] 对上述技术方案的进一步改进；所述方法还包括步骤3)发酵罐培养；在发酵罐中 进行，接种量为按照体积比5%~15%，转速为150~35化pm,温度为20~3(TC，发酵过程中 通入空气量为0. 8~1. 5vvm，发酵时间为8~lO