碱进行调节，优选氢氧化钠、氢氧化钾、氨水、盐酸、磷酸和乙酸中的一种或至少两种，更为优选氢氧化钠和盐酸；优选的结晶pH值为8.0?8.2，更优选为8.0 ?8.1 ο
[0020]本发明中，地特胰岛素结晶过程的温度并不是关键的，温度的选择范围较宽，只要在样品稳定性可接受范围即可。初始的结晶温度可选择在常温(10?30°C )条件下进行，在该条件下可增加胰岛素的溶解度，利于晶核的形成；待结晶液中有稳定晶核形成后，再降低结晶温度，加快结晶速度。发明人经大量实验研宄得出:地特胰岛素在常温(10?30°C)条件下结晶3?6h，再转移至2?8°C条件下结晶12?24h，可得到更加稳定均一的地特胰岛素结晶。
[0021]本发明中，地特胰岛素结晶过程可选择静置或者缓慢搅拌，且优先选择初始结晶在缓慢搅拌条件下进行，再转移至低温(2?8°C )条件下静置结晶。
[0022]所述地特胰岛素结晶的制备方法在工业化制备地特胰岛素中进行应用。
[0023]本发明相对于现有技术具有如下优点及有益效果:本发明克服了地特胰岛素由于结构上与其他胰岛素的差异造成的结晶困难；本发明结晶的制备方法可获得均一稳定的地特胰岛素结晶，且晶体沉降体积小，易于与上清分离(可采用离心或抽滤的方式)，冻干时间短，生产效率高，适合工业化生产。
【附图说明】
[0024]图1是实施例1制备的地特胰岛素结晶在显微镜下160倍放大图。
[0025]图2是实施例2制备的地特胰岛素结晶在显微镜下160倍放大图。
[0026]图3是实施例3制备的地特胰岛素结晶在显微镜下160倍放大图。
[0027]图4是实施例4制备的地特胰岛素结晶在显微镜下160倍放大图。
[0028]图5是实施例5制备的地特胰岛素结晶在显微镜下160倍放大图。
[0029]图6是实施例6制备的地特胰岛素结晶在显微镜下160倍放大图。
[0030]图7是实施例7制备的地特胰岛素结晶在显微镜下160倍放大图。
[0031]图8是实施例8制备的地特胰岛素结晶在显微镜下160倍放大图。
【具体实施方式】
[0032]下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0033]材料
[0034]地特胰岛素(赖氨酸Β29(Νε-十四酰)去(Β30)人胰岛素):珠海联邦制药股份有限公司提供，批号:201301001
[0035]三水合乙酸钠采购于西陇化工股份有限公司，批号:1304011 ;二水合柠檬酸三钠采购于西陇化工股份有限公司，批号:1301161 ;氯化钠采购于西陇化工股份有限公司，批号:1303241 ;乙酸铵采购于西陇化工股份有限公司，批号:1303061 ;三羟甲基氨基甲烷盐酸盐采购于阿拉丁试剂(上海)有限公司；批号:37963 ;苯酚采购于西陇化工股份有限公司，批号130306 ;氯化锌采购于西陇化工股份有限公司，批号:130104 ;二水合乙酸锌采购于西陇化工股份有限公司，批号:1301112 ;乙醇采购于西陇化工股份有限公司，批号:1312011 ;乙腈采购于天津市康科德科技有限公司，批号130409 ;乙酸采购于西陇化工股份有限公司，批号:1309161 ;氢氧化铵采购于西陇化工股份有限公司，批号:1312101 ;氢氧化钠采购于西陇化工股份有限公司，批号1302041 ;盐酸采购于珠海市华成达化工有限公司，批号:20130626。
[0036]实施例1
[0037]参照名称为“甘精胰岛素结晶的制备方法”的中国专利CN201110118026.2中的实施例I和实施例2进行地特胰岛素结晶的制备，成分和浓度如下:实验组A为地特胰岛素3.5g/L、乙腈 20% (v/v)、乙酸 0.7M、苯酸 0.4% (w/v)、氯化锌 120mg/L、乙酸钠 0.5M ;实验组B为地特胰岛素3g/L、乙醇15% (v/v)、乙酸0.5M、氯化锌90mg/L、苯酸0.2% (w/v)、氯化钠0.3M。制备过程如下:称取地特胰岛素两份，Al:0.175g，B1:0.15g，分别加入20ml水混悬待用；配制盐溶液al:乙腈10ml、乙酸2ml、6% (w/v)的苯酚水溶液3.33ml、乙酸钠3.4g和0.5M乙酸锌溶液55 μ 1，加水溶解并定容至25ml ;配制盐溶液bl:乙醇7.5ml、乙酸1.43ml,6% (w/v)的苯酚水溶液1.68ml、氯化钠0.88g、和0.5M乙酸锌溶液41 μ 1，加水溶解并定容至25ml ;将地特胰岛素Al溶液、BI溶液对应加入盐溶液al、bl，并加水定容至50ml，摇匀；5M氨水调节pH值分别为8.26和8.30，放置摇床100转/分钟，25 °C下放置10分钟后均出现沉淀。实验结果如图1所示，可见实验组A(图1(A))和B(图1(B))得到的均为沉淀，说明采用甘精胰岛素结晶的制备方法，不能使地特胰岛素结晶。甘精胰岛素结晶制备方法不适用于地特胰岛素。
[0038]实施例2
[0039]制备地特胰岛素结晶液，各组分浓度为:实验组A为地特胰岛素2g/L、乙腈7.5%(v/v)、乙酸铵0.1M、氯化钠0.2M、苯酚0.2% (w/v)、锌离子与地特胰岛素的摩尔比为2:1 ;实验组B在实验组A的基础上加入0.1M 二水合柠檬酸三钠。
[0040]制备过程如下:称取0.2g地特胰岛素，加入50ml浓度为15% (v/v)的乙腈水溶液，2M氢氧化钠溶液调节pH值至8.57，溶解完全，待用；配制盐溶液a2:乙酸铵0.39g、氯化钠0.58g、6% (w/v)的苯酚水溶液1.68ml，加水溶解并定容至25ml，2M氢氧化钠调节pH值至8.86 ;配制盐溶液b2:在溶液a2的基础上，加入1.47g 二水合柠檬酸三钠。取两份4g/L地特胰岛素溶液各25ml，对应加入25ml盐溶液a2和b2，摇匀；分别加入浓度为0.5M的乙酸锌溶液68 μ 1，2M盐酸调节pH值分别为8.16和8.13 ;放置摇床100转/分钟，室温22°C条件下结晶4h，然后转移至4°C条件下静置结晶15h。取结晶悬浮液在显微镜下放大160倍镜检，其结果如图2所示，可见实验组A (图2(A))为沉淀，实验组B (图2(B))为结晶。
[0041]实施例3
[0042]制备地特胰岛素结晶液，各组分浓度为:地特胰岛素lg/L、乙腈浓度5% (v/v)、柠檬酸三钠0.2M、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.4M、苯酚0.05% (w/v)、锌离子与地特胰岛素的摩尔比为7:1。
[0043]制备过程如下:称取地特胰岛素0.05g，加入25ml浓度为10% (v/v)的乙腈水溶液，2M氢氧化钠溶液调节pH值至8.64，溶解完全，待用；配制盐溶液:二水合柠檬酸三钠2.94g、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐3.15g、浓度为6% (w/v)的苯酚水溶液420 μ 1，加水溶解并定容至25ml，2Μ氢氧化钠溶液调节pH值至8.78，并加至25ml地特胰岛素溶液中，混匀；最后加入0.5M乙酸锌溶液118 μ 1，2Μ盐酸调节pH值至8.21 ;放置摇床100转/分钟，15°C条件下结晶3h，然后转移至2°C条件下静置结晶15h。取结晶悬浮液在显微镜下放大160倍镜检，其结果如图3所示，可见晶体均一性较好，晶体颗粒较细长。
[0044]实施例4
[0045]制备地特胰岛素结晶液，各组分浓度为:地特胰岛素4g/L、乙醇浓度8% (v/v)、柠檬酸三钠0.1M、乙酸铵0.4M、苯酚0.01% (w/v)、锌离子与地特胰岛素的摩尔比为3:1。
[0046]制备过程如下:称取地特胰岛素0.2g,加入25ml浓度为16% (v/v)的乙腈水溶液，2M氢氧化钠调节pH值至8.52，溶解完全，待用；配制盐溶液:二水合柠檬酸三钠1.47g、乙酸铵1.54g、6%苯酚水溶液84 μ 1，加水溶解并定容至25ml，2Μ氢氧化钠