用于具有抑菌作用的生物发酵麸皮的工业化生产 及相关领域中，应用前景十分广阔。
【具体实施方式】
[0026] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商 品说明书选择。本发明中所述的"室温"是指进行试验的操作间的温度，一般为15~25°C。 实施例中所使用的试剂若未加说明，均为分析纯试剂，购买自国药集团。
[0027] 实施例1生物发酵麸皮的制备与抑菌活性的检测
[0028] 1、材料与方法
[0029] 种子（发酵菌种）的制备：将类芽孢杆菌（Paenibacillus sp.)(所述类芽孢杆菌 的保藏编号为CGMCC No. 8333,该菌株的来源请参见公开号为CN 103740618A的中国专利） 的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于TYC固体培养基（购买自0X0ID Co.，英国），30°C好氧培养48h取出，用接种环挑取单菌落放入10mL TYC液体培养基（购买 自OXOID Co.，英国），运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，30°C、180rpm震荡 培养24h取出，以2% (体积百分比）接种量接种于TYC液体培养基（购买自OXOID Co.， 英国），30°C、180rpm震荡培养24h后，培养物15, OOOrpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无 菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。
[0030] 小麦麸皮购买自山东荷泽（淘宝店名：黄河滩农户人家，http://item.taobao. com/item.htm?spm=a230r.1.14. 34. 6aY7qR&id= 23590856555&ns=l&abbucket= 5#detail)〇
[0031] 指示菌株：金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus)CGMCC1. 879、藤黄微球菌 (Micrococcusluteus)CGMCC1. 1848、单增李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes)CGMCC 1. 9136,以上指示菌株都购自CGMCC。
[0032]指示菌液的制备：将金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌 (Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌（Listeria monocytogenes)的冻干粉用少量无菌 蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于LB固体培养基（购买自OXOID Co.，英国），30°C好氧 培养48h取出，用接种环挑取单菌落放入10mL LB液体培养基（购买自OXOID Co.，英国）， 运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，30°C、180rpm震荡培养24h取出，以2 % (体积百分比）接种量接种于LB液体培养基（购买自OXOID Co.，英国），30°C、180rpm震 荡培养20h后，即得相应的指示菌液。
[0033] 指示平板的制备：将上述方法制备的指示菌液进行稀释，使其细菌浓度约为 107cfu/mL，以体积比1 :150的比例吸取稀释的指示菌液注入45°C无菌LB固体培养基中， 充分混匀后迅速倒平板，待平板凝固且表面水分蒸发完全后即可。
[0034] 抑菌活性的检测方法：以点种法在指示平板上滴加20yL待测样品，置于30°C培 养20h后测量并记录抑菌圈直径。
[0035] 发酵培养基的制备：将小麦麸皮与蒸馏水按所需比例混合均匀，118 °C灭菌 15min，冷却至室温，即得无菌的发酵培养基。
[0036] 2、生物发酵麸皮的制备
[0037] 将类芽抱杆菌（Paenibacillus sp. )CGMCC No. 8333菌株以5% (体积百分比）接 种量接种于无菌的麸皮培养基中，25°C好氧培养72h获得发酵物，将上述发酵物于100°C烘 干，即得生物发酵麸皮A。其中，麸皮培养基的料液比为1 :1. 5,所述的料液比为麸皮与水的 质量比。
[0038] 3、生物发酵麸皮抑菌活性的检测
[0039] 向生物发酵麸皮A加入无菌蒸馏水配制成50mg/mL的发酵麸皮溶液，混合均匀后， 15, OOOrpm离心10min取上清，测定其抑菌活性。结果如下表所示：
[0040] 表1生物发酵麸皮的抑菌效果
【主权项】
1. 一种具有抑菌作用的生物发酵麸皮的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以 下步骤： (1) 将类芽孢杆菌（Paenibacillussp.)接种于麸皮培养基中，好氧培养获得发酵物； (2) 将步骤（1)所得发酵物烘干即得。
2. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)所述类芽孢杆菌的保藏编号为 CGMCCNo. 8333。
3. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)所述麸皮培养基的料液比为 1 :1~I:1. 5,所述的料液比为麸皮与水的质量比。
4. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)所述的类芽孢杆菌的接种量 为1~5%，所述百分比为体积百分比，所述好氧培养的温度为25°C~37°C，所述好氧培养 的时间为72小时~120小时。
5. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)所述的烘干的温度为80°C~ KKTC0
6. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)所述的类芽孢杆菌的接种量 为2~4%，所述百分比为体积百分比，所述好氧培养的温度为30°C~35°C，所述好氧培养 的时间为96小时~118小时。
7. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)所述的类芽孢杆菌的接种量为 3%，所述百分比为体积百分比，所述好氧培养的温度为33°C，所述好氧培养的时间为98小 时。
8. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)所述的烘干的温度为85°C~ 95。。。
9. 如权利要求1~8任一项所述的制备方法所得具有抑菌作用的生物发酵麸皮。
10. 如权利要求9所述的具有抑菌作用的生物发酵麸皮在制备功能性动物饲料中的应 用。
【专利摘要】本发明公开了一种具有抑菌作用的生物发酵麸皮及其制备方法和应用。其中所述具有抑菌作用的生物发酵麸皮的制备方法包括以下步骤：(1)将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)接种于麸皮培养基中，好氧培养获得发酵物；(2)将步骤(1)所得发酵物烘干即得。本发明所述制备方法采用固态发酵方法，菌种与原料单一，工艺简单，成本低廉，有利于发酵麸皮品质的标准化与工业大规模生产的成本控制。本发明制备所得具有抑菌作用的生物发酵麸皮用于动物饲料产业后可有效缓解甚至可以从根本上改变现有动物养殖行业抗生素滥用的现状。
【IPC分类】A23K1-16, C12P21-00
【公开号】CN104762350
【申请号】CN201510174003
【发明人】韩瑨, 郭本恒, 吴正均, 高彩霞, 刘振民
【申请人】光明乳业股份有限公司
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2015年4月13日