方式，而不应理解为对本发明的限制。在不违背本发明的精神和原则的前提下，对发明进行改动得到的技术方案都将落入本发明的权利要求范围之内。
[0034]在本发明中所采用的材料及试剂分别如下:
[0035]I)实验动物
[0036]珍珠龙胆石斑鱼购自广东大麟洋海洋生物有限公司(经分子方法验证未感染水产动物病毒)，体重为160g。
[0037]2)培养基及其它试剂
[0038]胎牛血清(fetalbovine serum, FBS), Gibco 公司；0.25%膜蛋白酶(Trypsin),Gibco公司；PSN抗体混合液(青霉素penicillin，链霉素streptomycin，制霉菌素nystatin)，Gibco 公司;二甲基亚讽(dimethyl sulfoxide，DMS0)，Sigma 公司；Leiboviz'sL15 培养基，Life Technologies 公司产品，胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)，Gibco 公司；0.25% 膜蛋白酶(Trypsin), Gibco 公司；MEM (Eagle’s minimum essential medium)、Leibovitz’ s L_15、M199培养基，Life Technologies公司产品，培养基按产品说明书配制后过滤除菌，4°C保存备用。
[0039]本发明的目的之一在于提供一种珍珠龙胆石斑鱼吻端组织细胞系，该细胞系于2015年01月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉大学保藏中心，地址:武汉市武昌珞珈山，邮编:430072)，并证明存活，保藏登记入册编号为CCTCC NO:C201505。该细胞系细胞生长状态良好，细胞在温度25-32°C、含10-15%胎牛血清的L15培养基中增殖良好。细胞形态为成纤维样细胞，能稳定增殖，目前细胞已传至70代以上。染色体分析显示特征染色体数目为48条。
[0040]本发明的目的之二在于提供所述的鱼吻端组织细胞系的构建方法，该构建方法包括以下步骤:
[0041]I)吻端组织的处理
[0042]取健活珍珠龙胆石斑鱼，置于含有浓度均为1000IU/ml的青霉素和链霉素高双抗海水中充气暂养24小时，鱼体用医用酒精浸泡l-5min进行整体消毒，然后使用75%酒精再次消毒，置于超净工作台中，用灭菌解剖器械取其吻端组织块，浸泡于漂洗液中；所述漂洗液为含有400IU/ml青霉素、400 μ g/ml链霉素和800 μ g/ml制霉菌素的M199溶液；
[0043]2)原代培养
[0044]吻端组织块使用漂洗液冲洗4-6次，锋利刀片切至l_4mm3的小组织块，加l_2ml贴块专用培养液，浸没所有小组织块，将上述小组织块接种于细胞培养瓶中，翻转瓶身28°C恒温干贴8-12h，再加入2-3ml完全培养液，翻正瓶身以使小组织块浸入培养液中，28°C恒温培养箱开始原代培养，每4-6天更换培养液一次；
[0045]所述的贴块专用培养液包括以下组分:基础培养液、终浓度为30%的胎牛血清、0.046mmol/L NaCl.0.026mmol/L NaHC03、400IU/ml 青霉素及 400 μ g/ml 链霉素；所述基础培养液为Leiboviz's L15培养液；
[0046]所述的完全培养液包括以下组分:基础培养液、终浓度为5-2O %胎牛血清、0.046mmol/L NaCl.0.026mmol/L NaHC03、400IU/ml 青霉素及 400 μ g/ml 链霉素；所述基础培养液为Leiboviz's L15培养液或MEM培养液或M199培养液；
[0047]3)传代培养
[0048]原代培养细胞长至60-90%汇合度时，进行原代细胞的传代；用0.25%胰酶室温下消化2?3min，加入完全培养液吹下贴壁细胞；将细胞悬液接种于2个培养瓶中28°C培养箱培养；以后每5-7天传代一次，传至第5-10代时，将细胞培养液中血清浓度降15%，抗生素浓度降至正常使用浓度，即青霉素浓度为100IU/ml、链霉素浓度为100 μ g/ml ;传至第15-20代时，将培养液中血清含量降至8-10%。
[0049]实施例1:
[0050]鱼吻端组织细胞系的构建方法，其包括以下步骤:
[0051]I)吻端组织的处理:取健活珍珠龙胆石斑鱼，置于含有浓度均为1000IU/ml的青霉素和链霉素高双抗海水中充气暂养24h，鱼体用医用酒精浸泡5min进行整体消毒，然后使用75%酒精再次消毒，置于超净工作台中，用灭菌解剖器械取其吻端组织块，浸泡于漂洗液中；所述的漂洗液为含有400IU/ml青霉素、400 μ g/ml链霉素和800 μ g/ml制霉菌素的M199溶液；
[0052]2)原代细胞培养:吻端组织块用漂洗液冲洗5次，使用刀片切至4mm3的小组织块，加贴块专用培养液，浸没所有小组织块，将上述小组织块接种于细胞培养瓶中，翻转瓶身25°C恒温干贴12h，再加入完全培养液，翻正瓶身以使小组织块浸入完全培养液中，置于25°C恒温培养箱开始原代培养，每5天更换培养液一次；所述的贴块专用培养液包括以下组分:基础培养液、终浓度为30%的胎牛血清、0.046mmol/L NaCl、0.026mmol/L NaHC03、400IU/ml青霉素及400 μ g/ml链霉素；所述基础培养液为Leiboviz's L15培养液；所述的完全培养液包括以下组分:基础培养液、终浓度为30%胎牛血清、0.046mmol/L NaCl,0.026mmol/L NaHCO3、400IU/ml青霉素及400 μ g/ml链霉素；所述基础培养液为Leiboviz'sLI5培养液；
[0053]3)传代培养:原代培养细胞汇合度达60-90%时，加入0.25%的胰蛋白酶消化后，加入完全培养液使细胞悬浮，然后接种于两个培养瓶内，置于25°C培养箱中培养，每5天传代一次。
[0054]实施例2
[0055]鱼吻端组织细胞系的构建方法，按照实施例1的步骤，与实施例1的区别在于:在该实施例中，
[0056]所述的完全培养液包括以下组分:基础培养液、终浓度为3O %胎牛血清、0.046mmol/L NaCl.0.026mmol/L NaHC03、400IU/ml 青霉素及 400 μ g/ml 链霉素；所述基础培养液为MEM培养液；
[0057]实施例3
[0058]鱼吻端组织细胞系的构建方法，按照实施例1的步骤，与实施例1的区别在于:在该实施例中，
[0059]所述的完全培养液包括以下组分:基础培养液、终浓度为3O %胎牛血清、
0.046mmol/L NaCl.0.026mmol/L NaHC03、400IU/ml 青霉素及 400 μ g/ml 链霉素；所述基础培养液为M199培养液；
[0060]培养液是维持体外细胞生存和生长的基本溶液，是细胞培养的最重要条件。不同培养液营养成分不同，不同细胞对培养液要求不同。培养液除了要有细胞生命活动必需的各种营养物质之外，还必需提供调节细胞生长与功能活动的激素、生长因子以及生长基质成分等。此外，不同的培养条件对细胞的影响也不同。因此，为了获得珍珠龙胆石斑鱼吻端组织细胞系的适宜培养条件，进行如下条件筛选试验:
[0061]在本发明，我们进一步考察了不同培养液以及FBS浓度对细胞生长的影响。具体如下:
[0062]1.细胞在不同培养基中的生长情况
[0063]从实施例1的第45代细胞中分别取25 X 14个细胞接种于含10% FBS的L15、MEM和M199培养基中，28 °C下培养；在培养后1、3、5、7天用血球计数板进行细胞计数，绘制细胞系在不同培养基中的生长曲线。
[0064]结果如图5所示，细胞在L15、M199培养基中生长速度明显高于MEM培养基，且在L15培养基中细胞的生长速度略高于M199培养基；由此，可以确定其中较佳的培养基为L15
培养基。
[0065]2.细胞在不同FBS浓度下的生长情况
[0066]从实施例1的第45代细胞中分别取25X 14个细胞接种于含有2%、5%、10%或15% FBS的L15培养基中，28°C下培养。于培养后1、3、5、7天用血球计数板进行细胞计数，绘制细胞系在不同FBS浓度的生长曲线。
[0067]结果如图6所示，细胞生长速度与所添加的血清浓度成正比，当血清浓度为10-15%时细胞生长快，当血清浓度为5%时细胞生长速度出现比较明显的增幅，且血清浓度为5-15%时的细胞生长速度明显优于血清浓度为2%时的细胞生长速度。由此，结合细胞的培养情况和经济成本，优选血清浓度为5-20%为较佳条件。