一种快速富集水产蛋白酶解液中活性肽的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种快速富集水产蛋白酶解液中活性肽的方法，属于水产品加工与利 用的领域。
【背景技术】
[0002] 活性肽具有一般蛋白质的营养作用，还具有多种生物活性，包括抗氧化活性、降血 脂活性、降血压活性、增强免疫力以及抗疲劳等功效，以及良好的理化性质包括溶解性、乳 化性、稳定性等，可以应用于食品、医药、饲料、化工等各个领域。活性肽因为其独特的生理 功效和良好的理化性质而得到了广泛的关注，被誉为21世纪人类健康的新宠儿，是当前研 宄最热门的领域之一。海洋与淡水水产资源已成为获取及制备功能性肽的重要来源，一方 面是水产蛋白的肽链中普遍蕴含着功能区，即氨基酸以特定序列通过肽键连接而成的肽 段，该肽段为功能性肽的前体物质，经释放后可具有特殊的生物活性，另一方面是水产蛋白 作为动物蛋白，氨基酸组成比例平衡，必需氨基酸含量高，蛋白质消化吸收率达85~90%。 有研宄表明，肽的生物活性与分子量大小有关，具有生物活性的肽大都是分子量在6000 Da以下。而蛋白质的酶解产物都是不同大小肽段的混合物，因此，为了得到高含量目标活 性肽，必需进行分离富集。一般常用的方法是蛋白酶解液去渣(杂)，有离心、滤布、砂滤等方 法，然后利用微滤膜进一步对滤液进行过滤澄清，再通过超滤膜实现活性肽与大分子蛋白 或肽的分离，得到相对高含量的活性肽与氨基酸，必要时通过纳滤膜去除氨基酸，得到含量 更高的活性肽。超滤通常作为分离与富集活性肽的主要方法，但是，超滤需要严格的前处 理，一般需要经过0. 45um的微滤膜除杂澄清，而且超滤操作压力较高；超滤膜一般为聚砜 膜、聚砜酰胺膜和聚丙烯腈膜等有机膜，酶解液中的油脂对膜的污染较严重，清洗困难，影 响膜的使用寿命。这对超滤膜在蛋白酶解液分离纯化的大规模应用不利。无机陶瓷膜化 学稳定性好，耐酸碱与有机溶剂、耐菌、耐高温，可以处理含油脂的物料，机械强度高、分离 过程简单、能耗低、操作维护简便、使用寿命长等众多优势，已经成功应用于食品、饮料、植 (药)物深加工、生物医药、发酵、精细化工等众多领域。一般认为陶瓷膜主要用于除杂澄清、 浓缩或去除大分子物质方面，而在蛋白酶解液快速富集活性肽方面的应用没有见到报道。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供一种快速富集水产蛋白酶解液中活性肽的方法。
[0004] 本发明提供的一种快速富集水产蛋白酶解液中活性肽的方法是指从鱼类或贝类 蛋白酶解液中富集活性肽的方法。
[0005] -种快速富水产蛋白酶解液中集活性肽的方法，其特征在于该方法包括如下步 骤：（1)将搅碎后的鱼肉或贝肉与水按质量比为1 :1~5的比例混匀，接着将pH调节到 4.0~8.0,加入蛋白酶并在50 °C~60 °C保温酶解1h~6h，然后升温至85 °C~95 °C保温 灭酶lOmin，冷却到20°C~30°C后得到水产蛋白酶解液备用；（2)将步骤（1)制备的水产蛋 白酶解液通过附带有内置滤袋的三足式离心机离心去掉残渣与油脂得到过滤液；（3)将步 骤（2)所得过滤液通过陶瓷膜微滤去掉大分子蛋白与多肽，即可富集得到水产蛋白酶解液 中的活性肽。
[0006] 所述步骤（2)中三足式离心机为食品加工或制药用离心机；其所附带的内置滤袋 的孔径为200目~500目。
[0007] 所述步骤（3)的陶瓷膜微滤为采用孔径为50nm~200nm的陶瓷膜，微滤操作采 取的是循环式操作。
[0008] 本发明优点：（1)本发明提供的一种快速富集水产蛋白酶解液中活性肽的方法， 工艺过程简单，操作容易，成本低；（2)本发明提供的一种快速富集水产蛋白酶解液中活性 肽的方法，可以完全截留分子量15000Da以上的蛋白，能够截留绝大部分的分子量lOOOODa 以上的多肽，分子量小于5000Da的多肽得到有效的富集。（3)本发明提供的一种快速富集 水产蛋白酶解液中活性肽的方法，同时可以对蛋白酶解液脱色与澄清，为蛋白酶解液的开 发利用提供基础；（4)本发明提供的一种快速富集水产蛋白酶解液中活性肽的方法，使用 陶瓷膜装置，对蛋白酶解液的前处理要求低，过滤速度快，可达80-140L/m2.h，利于实现产 业化生产。
【附图说明】
[0009] 图1 :酶解液与透过液的高压液相色谱图（A为酶解液；B为透过液)。
【具体实施方式】
[0010] 本发明结合实施工艺实例做进一步说明： 取洗净沥干后的马氏珠母贝肉9. 52kg，绞碎，按料水比为1:1. 5的比例加入14. 28kg的 水，搅拌均匀后倒入酶解罐中，升温至55°C，按照0. 3%比例加入中性蛋白酶28. 56g，于55°C 酶解3h。然后升温至85°C灭酶lOmin，冷却后用三足式离心机离心过滤(配有300目滤袋） 去渣，所得滤液即为酶解液。采用膜孔径为200nm的无机管式陶瓷膜，开启泵，调节频率为 50Hz，进口压力0. 2MPa左右，对酶解液进行循环式微滤。当残留液体积约为酶解液的10% 时，停止操作，得到透过液即为马氏珠母贝肉活性肽。附图1为酶解液与透过液的高压液相 色谱图，表1为根据标准分子量曲线计算得到的酶解液与透过液中不同分子量肽段的百分 比。
[0011] 由表1可以看出，透过液中小于2500Da肽的比例由28. 38%增加到32. 95%，增加 了 16.1%，2500Da-5000Da肽的比例由 27. 63% 增加到 36. 3%，增加了 31. 4%; 5000Da -10000Da多肽比例由33. 34%减少到29. 55%，减少了 11. 4% ;大于10000Da的多肽比例由 10. 6%减少为1. 18%，减少了 88. 9%。表明200nm微孔膜可以有效除去大于10000Da的多 肽，而小于5000Da肽的比例由56. 01%增加到69. 25%，增加了 23. 64%，得到富集。
[0012] 表1 :酶解液与透过液中不同分子量肽段的百分比（%)
【主权项】
1. 一种快速富集水产蛋白酶解液中活性肽的方法，其特征在于该方法包括如下步骤： (1) 将搅碎后的鱼肉或贝肉与水按质量比为1 :1~5的比例混匀，接着将pH调节到4.O~ 8. 0,加入蛋白酶并在50°C~60°C保温酶解Ih~6h，然后升温至85°C~95°C保温灭酶 lOmin，冷却到20°C~30°C后得到水产蛋白酶解液备用；（2)将步骤（1)制备的水产蛋白 酶解液通过附带有内置滤袋的三足式离心机离心去掉残渣与油脂得到过滤液；（3)将步骤 (2) 所得过滤液通过陶瓷膜微滤去掉大分子蛋白与多肽，即可富集得到水产蛋白酶解液中 的活性肽。
2. 根据权利要求1所述的一种快速富集水产蛋白酶解液中活性肽的方法，其特征在于 步骤（2)中所述的三足式离心机所附带的内置滤袋的孔径为200目~500目。
3. 根据权利要求1所述的一种快速富集水产蛋白酶解液中活性肽的方法，其特征在于 所述步骤（3)中陶瓷膜微滤孔径为50nm~200nm。
4. 根据权利要求1所述的一种快速富集水产蛋白酶解液中活性肽的方法，其特征在于 所述步骤（3)中陶瓷膜微滤采取的是循环式操作，过滤过滤速度为80L/m2.h~140L/m2.h。
【专利摘要】一种快速富集水产蛋白酶解液中活性肽的方法，是将鱼或贝肉清洗后绞碎，加入一定比例的水，再加入蛋白酶在一定条件下进行酶解得到酶解液，酶解液通过附带有内置滤袋的三足式离心机离心去掉残渣与油脂，得到过滤液，过滤液通过陶瓷膜循环式微滤去掉大分子蛋白与多肽，即可富集得到水产蛋白酶解液中的活性肽。本发明提供的一种快速富集水产蛋白酶解液中活性肽的方法，对水产蛋白酶解液的前处理要求低，过滤速度快，可达80～140L/m2.h，利于实现产业化生产。
【IPC分类】C12P21-06, C07K1-34
【公开号】CN104818310
【申请号】CN201510086017
【发明人】杨萍, 洪鹏志, 周春霞, 刘唤明
【申请人】广东海洋大学
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年2月24日