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');C-26 糖部分:104.9 (RhaC-1" ' )，75.2 (RhaC-2" ' )，78.3 (RhaC-3 " ' ), 71.8(RhaC-4" 1 )，78.6 (RhaC-5 " 1 )，62.9 (RhaC-6 " 1 )，13C-NMR 和 13H-NMR 与原薯蓣皂苷的文献报道核磁数据一致，鉴定为原薯菌阜苷(protod1scin)。
[0027]有益效果:本发明的优点包含以下几点:
[0028]I)应用本发明方法，可制备得到高纯度的原薯蓣皂苷，原薯蓣皂苷含量达到90_99.9% ；
[0029]2)应用本发明方法，可得到公斤级的原薯蓣皂苷；
[0030]3)本发明制备工艺方法简单，精制效率高，耗能低，环保，操作工艺条件容易控制，质量可控性强；
[0031]4)本发明综合反相硅胶柱层析和反相树脂基柱层析的分离技术，得率高，除杂质和色素效果好；
[0032]5)本发明所述的高纯度原薯蓣皂苷，无溶剂残留，安全性高，可以单独作为制备药品和保健品的原料，也可与相关药理活性成分相须使用，以达协同增效之功。
【附图说明】
[0033]图1是本发明的原薯蓣皂苷结构图。
[0034]图2是本发明的原薯蓣皂苷样品纯度检测色谱图。
【具体实施方式】
[0035]下面通过具体实施例对本发明进行进一步说明:
[0036]具体实施例一:
[0037]准备干燥的穿山龙药材150kg，粉碎成粗粉后，装入不锈钢中药提取罐中，用质量百分比浓度为70%乙醇溶液，加热回流提取3次，每次8倍量，每次2h ;其次，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.08 (40°C)，放冷，静置过夜后，过滤，滤液经AB-8大孔吸附树脂柱层析，大孔吸附树脂柱内大孔吸附树脂的柱体积为200L (柱直径0.4m，柱高
1.6m)，其中柱体积是指大孔吸附树脂装柱后，从柱的底板到树脂沉积表面的体积；树脂柱内树脂的体积与药材重量(干重)之比为4:3，待滤液完全流入树脂柱后，先用2.5倍柱体积的水洗涤至流出液清澈透明后，再用3倍柱体积的质量百分比浓度为20%的乙醇溶液洗脱洗涤至流出液清澈透明后，然后接着用5倍柱体积的质量百分比浓度为20%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱流速为150L/h，每50L洗脱液收集为一流分，液相跟踪检测，合并含原薯蓣皂苷的流份，得到大孔树脂柱洗脱液。将大孔树脂柱洗脱液减压浓缩至相对密度为1.13 (40°C)，放冷，静置过夜，取上清液；然后将上清液经C18柱(直径500mm，高度800mm, 50-70 μ m)柱层析，分别用水洗脱、25%乙腈洗脱、34%乙腈洗脱，液相跟踪检测，合并含原薯蓣皂苷的流份，浓缩；再进行第二次C18柱(10mmX 250mm，50 μ m)柱层析，分别用25%乙腈和34%乙腈洗脱，液相跟踪检测，合并含原薯蓣皂苷的流份，浓缩；然后利用反相树脂基柱(200mmX 250mm，50 μ m)分离，依次用25%乙腈和30%乙腈洗脱，液相跟踪检测，合并目标流分，减压回收溶剂至干，冷冻干燥，得原薯蓣皂苷0.72公斤(纯度95.2%)。
[0038]具体实施例二:
[0039]准备干燥的穿山龙药材90kg，粉碎成粗粉后，装入不锈钢中药提取罐中，用质量百分比浓度为50%乙醇溶液，加热回流提取3次，每次8倍量，每次2h。合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.01(40°C )，放冷，静置过夜后，过滤，滤液经AB-8大孔吸附树脂柱层析，大孔吸附树脂柱内大孔吸附树脂的柱体积为120L，其中柱体积是指大孔吸附树脂装柱后，从柱的底板到凝胶沉积表面的体积。待滤液完全流入树脂柱后，先用2.5倍柱体积的水洗涤至流出液清澈透明后，再用3倍柱体积的质量百分比浓度为20%的乙醇溶液洗脱洗涤至流出液清澈透明后，然后接着用5倍柱体积的质量百分比浓度为30%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱流速为90L/h，每50L洗脱液收集为一流分，液相跟踪检测，合并含原薯蓣皂苷的流份，减压浓缩至相对密度为1.07 (40°C)，放冷，静置过夜，取上清液；然后将上清液经C18柱(200mmX 250mm，50-70 μ m)柱层析，分别用水洗脱、25%乙腈洗脱、34%乙腈洗脱，液相跟踪检测，合并，合并含原薯蓣皂苷的流份，减压浓缩至相对密度为1.11(40°C)，放冷，然后利用反相树脂基柱(200mmX250mm，70μπι)分离，依次用20%乙腈和30%乙腈洗脱，液相跟踪检测，合并目标流分，减压回收溶剂至干，冷冻干燥，得原薯蓣皂苷0.4公斤(纯度91.2%)。
[0040]具体实施例三:
[0041]准备干燥的穿山龙药材120kg，粉碎成粗粉后，装入不锈钢中药提取罐中，用质量百分比浓度为70%乙醇溶液，加热回流提取3次，每次8倍量，每次2h。合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.05 (400C )，放冷，静置过夜后，过滤，滤液经AB-8大孔吸附树脂柱层析，大孔吸附树脂柱内大孔吸附树脂的柱体积为160L，其中柱体积是指大孔吸附树脂装柱后，从柱的底板到凝胶沉积表面的体积；待滤液完全流入树脂柱后，先用2.5倍柱体积的水洗涤至流出液清澈透明后，再用3倍柱体积的质量百分比浓度为20%的乙醇溶液洗脱洗涤至流出液清澈透明后，然后接着用5倍柱体积的质量百分比浓度为20%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱流速为120L/h，每50L洗脱液收集为一流分，液相跟踪检测，合并含原薯蓣皂苷的流份，减压浓缩至相对密度为1.07 (40°C)，放冷，静置过夜，取上清液；然后将上清液经C18柱(500mmX800mm，50-70 μ m)柱层析，分别用水洗脱、35%乙醇洗脱、55%乙醇洗脱，液相跟踪检测，合并含原薯蓣皂苷的流份，浓缩，进行第二次C18柱(500mmX 800mm, 50-70 μ m)柱层析，分别用25%乙腈和32%乙腈洗脱，液相跟踪检测，合并含原薯蓣皂苷的流份，减压浓缩至相对密度为1.14 (40°C)，放冷，然后利用反相树脂基柱(200mmX 250mm, 70 μ m)分离，依次用20%乙腈和30%乙腈洗脱，液相跟踪检测，合并目标流分，减压回收溶剂至干，冷冻干燥，得原薯蓣皂苷0.55公斤(纯度96.8%)。
[0042]具体实施例四:
[0043]首先先通过具体实施例一的步骤得到原薯蓣皂苷0.5公斤，然后用20%乙醇溶解，然后经C18柱(500mmX800mm，50-70 μ m)柱层析，依次用450L20%乙醇洗脱、450L40%乙醇洗脱，750L50%乙醇洗脱，液相跟踪检测，合并含原薯蓣皂苷的流份，减压回收溶剂至干，冷冻干燥，得原薯蓣皂苷0.43公斤(纯度98.7%)。
[0044]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明的技术范围作出任何限制，故凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何细微修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明的技术方案的范围内。
【主权项】
1.一种制备原薯蓣皂苷的方法，其特征在于:包括依次以大孔吸附树脂柱层析、反相硅胶柱层析、反相树脂基柱层析的方法来分离穿山龙药材提取液中的原薯蓣皂苷。
2.一种制备原薯蓣皂苷的方法，其特征在于:包括以下步骤: 1)将干燥的穿山龙药材加入到提取溶剂中，对药材进行提取处理，得到穿山龙提取液，将提取液浓缩、静置、过滤，取滤液； 2)将滤液采用洗脱剂通过大孔吸附树脂柱法进行洗脱处理，收集、合并含有原薯蓣皂苷的洗脱液，得到树脂柱洗脱液； 3)将树脂柱洗脱液浓缩、静置、过滤，得到滤液； 4)将滤液采用洗脱剂通过1-3次反相硅胶柱层析处理，收集、检测、合并洗脱液； 5)将反相硅胶柱洗脱液浓缩，浓缩液采用反相树脂基柱层析处理，收集、检测、合并洗脱液，洗脱液干燥后，得到原薯蓣皂苷。
3.根据权利要求2所述的一种制备原薯蓣皂苷的方法，其特征在于:所述的步骤I)中的提取溶剂选取质量百分比浓度为20%-90%含水乙醇溶液，优选为50%-75%含水乙醇溶液。
4.根据权利要求2所述的一种制备原薯蓣皂苷的方法，其特征在于:所述的步骤I)中的提取处理是通过加热回流来进行提取处理。
5.根据权利要求2所述的一种制备原薯蓣皂苷的方法，其特征在于:所述的步骤2)中的大孔吸附树脂所采用 D101、AB-8、DMl30H、XAD-2、D201、HP-20、X-5、H103、DMl I 或 ADS-17型树脂中的一种。
6.根据权利要求2所述的一种制备原薯蓣皂苷的方法，其特征在于:所述的步骤2)中的洗脱剂依次采用水和含水的乙醇溶液。
7.根据权利要求2所述的一种制备原薯蓣皂苷的方法，其特征在于:所述的步骤4)中的反相硅胶柱层析采用C18反相柱，所述的C18反相柱是以反相填料为载体的预装柱或DAC制备柱。
8.根据权利要求2所述的一种制备原薯蓣皂苷的方法，其特征在于:所述的步骤5)中的反相树脂基柱层析选择SMB、MC1、GEL、PRP型反相树脂基色谱柱中的一种，柱子规格选择内径5cm的预装柱或内径1cm的预装柱或DAC制备柱。
9.根据权利要求2所述的一种制备原薯蓣皂苷的方法，其特征在于:所述的步骤4)中的1-3次反相柱层析处理的洗脱剂为含水的乙腈溶液或者含水乙醇溶液。
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，涉及化学领域化合物的分离提取方法，具体涉及植物天然药理活性物质原薯蓣皂苷的一种制备方法，包括以穿山龙药材为原料，采用柱层析方法进行原薯蓣皂苷的纯化；本发明的精制工艺简单,易于操作，纯化效率高，精制时间短。
【IPC分类】C07J71-00
【公开号】CN104861035
【申请号】CN201410065803
【发明人】顾正兵, 张 杰
【申请人】江苏永健医药科技有限公司
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2014年2月25日