；所 述可溶性淀粉培养基的成分为：可溶性淀粉10. 〇g，酵母膏2. 0g，CaCO3 3. 0g，琼脂粉16. 0g， 蒸馈水 1000. 〇ml，ρΗ6· 5 ; 步骤2 :在超净工作台上用灭菌的接种针挑取一块待保存的、直径为5mm的稻瘟病菌菌 块，将其置于可溶性淀粉培养基中心无稻杆处，使其菌丝面向下； 步骤3 :将培养皿平板放置于恒温培养箱中，25°C恒温培养至菌种长满培养皿； 步骤4 :在超净工作台上用灭菌镊子将稻杆夹出，放置于规格为138mmX67mm的灭菌纸 袋中； 步骤5 :在超净工作台上用宽度为20mm的透明胶带将纸袋封口； 步骤6 :在纸袋上标注菌种信息及保存日期； 步骤7 :将纸袋置于烘箱中，30°C恒温烘干48h ; 步骤8 :将烘干后的纸袋装入收纳盒，用宽度为50mm的透明胶带封口，并标注菌种信 息，再将收纳盒置于4°C保存。
[0013] 实施例2 一种稻瘟病菌菌种的长期保存方法，具体包括如下步骤： 步骤1 :在超净工作台上将灭菌的可溶性淀粉培养基倒入灭菌的直径为90mm的培养皿 平板中，待培养基凝固后快速将剪切好的、长为20mm的灭菌稻杆均匀放置于培养基上；所 述可溶性淀粉培养基的成分为：可溶性淀粉10. 〇g，酵母膏2. 0g，CaCO3 3. 0g，琼脂粉16. 0g， 蒸馈水 1000. 〇ml，ρΗ6· 5 ; 步骤2 :在超净工作台上用灭菌的接种针挑取一块待保存的、直径为5mm的稻瘟病菌菌 块，将其置于可溶性淀粉培养基中心无稻杆处，使其菌丝面向下； 步骤3 :将培养皿平板放置于恒温培养箱中，25°C恒温培养至菌种长满培养皿； 步骤4 :在超净工作台上用灭菌镊子将稻杆夹出，放置于规格为138mmX67mm的灭菌纸 袋中； 步骤5 :在超净工作台上用宽度为20mm的透明胶带将纸袋封口； 步骤6 :在纸袋上标注菌种信息及保存日期； 步骤7 :将纸袋置于烘箱中，30°C恒温烘干48h ; 步骤8 :将烘干后的纸袋装入收纳盒，用宽度为50mm的透明胶带封口，并标注菌种信 息，再将收纳盒置于-20°C保存。
[0014] 实施例3 一种稻瘟病菌菌种的长期保存方法，具体包括如下步骤： 步骤1 :在超净工作台上将灭菌的可溶性淀粉培养基倒入灭菌的直径为90mm的培养皿 平板中，待培养基凝固后快速将剪切好的、长为20mm的灭菌稻杆均匀放置于培养基上；所 述可溶性淀粉培养基的成分为：可溶性淀粉10. 〇g，酵母膏2. 0g，CaCO3 3. 0g，琼脂粉16. 0g， 蒸馈水 1000. 〇ml，ρΗ6· 5 ; 步骤2 :在超净工作台上用灭菌的接种针挑取一块待保存的、直径为5mm的稻瘟病菌菌 块，将其置于可溶性淀粉培养基中心无稻杆处，使其菌丝面向下； 步骤3 :将培养皿平板放置于恒温培养箱中，25°C恒温培养至菌种长满培养皿； 步骤4 :在超净工作台上用灭菌镊子将稻杆夹出，放置于规格为138mmX67mm的灭菌纸 袋中； 步骤5 :在超净工作台上用宽度为20mm的透明胶带将纸袋封口； 步骤6 :在纸袋上标注菌种信息及保存日期； 步骤7 :将纸袋置于烘箱中，30°C恒温烘干48h ; 步骤8 :将烘干后的纸袋装入收纳盒，用宽度为50mm的透明胶带封口，并标注菌种信 息，再将收纳盒置于-80 °C保存。
[0015] 保存菌种的存活率实验 在实施例1-3所保存的菌种分别于存放1、5、10年时进行活化，测定其存活情况，结果 见表1。
[0016] 表1保存不同年限后菌种的存活情况
【主权项】
1. 一种稻瘟病菌菌种的长期保存方法，其特征在于：用稻杆作为稻瘟病菌的保存载体 对稻瘟病菌进行保存。
2. 根据权利要求1所述稻瘟病菌菌种的长期保存方法，其特征在于：包括如下步骤： 步骤1 :将培养基倒入培养皿平板中，待培养基凝固后快速将剪切好的稻杆均匀放置 于培养基上； 步骤2 :用接种针挑取一块待保存的稻瘟病菌菌块置于培养基中心无稻杆处，使其菌 丝面向下； 步骤3 :将培养皿平板于25°C恒温培养至菌种长满培养皿； 步骤4 :用镊子将稻杆夹出放置于纸袋中； 步骤5 :用透明胶带将纸袋封口； 步骤6 :在纸袋上标注菌种信息及保存日期； 步骤7 :将纸袋于30°C恒温烘干48h ; 步骤8:将烘干后的纸袋装入收纳盒，用透明胶带封口，并标注菌种信息，再将收纳盒 置于-80°C至4°C保存。
3. 根据权利要求2所述稻瘟病菌菌种的长期保存方法，其特征在于：步骤1、步骤2、步 骤4和步骤5均须在无菌操作台上进行无菌操作。
4. 根据权利要求2所述稻瘟病菌菌种的长期保存方法，其特征在于：步骤1所述培 养基为可溶性淀粉培养基，其成分为：可溶性淀粉10. 〇g，酵母膏2. Og，CaCO3 3. Og，琼脂粉 16. 0g，蒸馈水 1000. 0ml，pH6. 5。
5. 根据权利要求2所述稻瘟病菌菌种的长期保存方法，其特征在于：步骤1所用培养 皿平板的直径为90mm。
6. 根据权利要求2所述稻瘟病菌菌种的长期保存方法，其特征在于：步骤1中剪切好 的稻杆长20mm。
7. 根据权利要求2所述稻瘟病菌菌种的长期保存方法，其特征在于：步骤2所取的稻 瘟病菌菌块直径为5mm。
【专利摘要】本发明提供了一种稻瘟病菌菌种的长期保存方法，是以稻杆作为保存载体对稻瘟病菌进行保存，具体是将培养基倒入培养皿平板中，待培养基凝固后快速将稻杆均匀放置于培养基上，待稻杆吸收培养基冷凝水及其携带的少量营养物质后，将稻瘟病菌菌种接种在培养基中心无稻杆处，使稻瘟病菌菌种在稻杆上生长和繁殖，再将生长好的稻杆于30℃恒温烘干后于-80℃至4℃放置，实现稻瘟病菌菌种的长期保存。本发明保存方法操作简单、方便、快速，经处理后稻瘟病菌菌种保存周期长、菌种性状稳定，且保存周期内不用定期移植，不仅可节省保存成本及保存空间，安全可靠，还可使菌种活化更加方便，对稻瘟病菌生物学特性及发展水稻抗病育种研究具有重要的应用价值。
【IPC分类】C12N1-04, C12R1-645
【公开号】CN104877909
【申请号】CN201510333869
【发明人】杜宜新, 石妞妞, 阮宏椿, 陈福如, 甘林, 杨秀娟
【申请人】福建省农业科学院植物保护研究所
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年6月17日