一种野百合碱的提取、纯化方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种野百合碱的提取、纯化方法，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 野百合碱，CAS号：315-22-0 ;分子式！C16H23NO6;分子量：325. 36 ;分子结构如下：
野百合碱对小鼠肉瘤-180、白血病L615、大鼠瓦克癌-256等均有一定的抑制作用。临 床试用于皮肤癌及子宫癌有较好的疗效，对白血病亦有一定效果。此生物碱为双稠吡咯啶 类，其抗癌作用与烷化剂相似。
[0003] 高速逆流色谱技术是一种不用任何同态载体的液、液色谱技术，其原理是基于组 分在旋转螺旋管内的相对移动而互不混溶的两相溶剂间分布不同而分离，其分离效率和速 度可以与HPLC相媲美。HSCCC分离效率高，产品纯度高，不存在载体对样品的吸附和污染， 制备量大和溶剂消耗少，操作简单，能从极复杂的混合物中分离出特定的组分。被广泛应用 天然产物分离制备中。
[0004] 目前，国内很少见野百合碱提取方法的相关专利报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种野百合碱的提取、纯化方 法，此法操作简单，所得产品纯度高。
[0006] 为实现上述目的，一种野百合碱的提取、纯化方法通过以下技术方案来实现： 1) 原材料的处理：取干燥的野百合粉碎，过20-60目筛； 2) 酶解：称取一定量的粗粉，加入料液比为1 :2~5、70~90%的乙醇浸泡，并加入粗粉重 量0. 1%~0. 3%的生物酶在pH值4~5,温度为45~50°C的条件下浸泡酶解l~3h ; 3) 超声提取：酶解结束，将步骤（2)中的酶解物进行超声提取l~2h，过滤，收集滤液，滤 澄重复提取1~2次； 4) 有机溶剂萃取：收集提取液减压浓缩至原体积的1/5~1/3,收集浓缩液，依次加入浓 缩液体积1/3、1/4、1/6的氯仿搅拌，静置分层，弃去上层，收集下层，合并萃取液； 5) 高速逆流色谱仪纯化：萃取液采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收 试剂，冷冻干燥即得野百合碱。
[0007] 步骤2)中所述的生物酶为果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶中的一种或两种以上的 混合物。
[0008] 步骤3)中所述超声提取的频率为20~40KHz，温度为50~60°C。
[0009] 步骤5)中所述的高速逆流色谱分离的溶剂体系为氯仿-甲醇-水溶剂系统，混合 比例2-6 :5-10 :5-7,取下相做固定相，上相做流动相。
[0010] 本发明具有的优点为：1、采用了生物酶酶解辅助超声提取的提取方法，提取效率 高，溶剂用量少，对环境污染小；2、采用了高速逆流色谱法纯化，方法简便易操作，溶剂用量 小，样品无损失，制备量大，可连续制备，而且无污染。
【具体实施方式】
[0011] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明。
[0012] 实施例1 : 取干燥的野百合粉碎，过20目筛；称取一定量的粗粉，加入料液比为1 :2、70%的乙醇 浸泡，并加入粗粉重量〇. 1%的纤维素酶在PH值为4,温度为45°C的条件下浸泡酶解Ih ;酶 解结束，将所得酶解物在频率为20KHz，温度为50°C的条件下超声提取lh，过滤，收集滤液， 滤渣重复提取1次；收集提取液减压浓缩至原体积的1/3,收集浓缩液，依次加入浓缩液体 积1/3、1/4、1/6的氯仿搅拌，静置分层，收集下层，合并萃取液；萃取液以氯仿-甲醇-水为 溶剂系统，混合比例为2 :5 :5,取下相做固定相，上相做流动相，采用高速逆流色谱纯化，根 据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得野百合碱。经检测，含量为93. 5%。
[0013] 实施例2: 取干燥的野百合粉碎，过40目筛；称取一定量的粗粉，加入料液比为1 :4、80%的乙醇 浸泡，并加入粗粉重量〇. 2%的半纤维素酶在pH值为4,温度为45°C的条件下浸泡酶解2h ; 酶解结束，将所得酶解物在频率为30KHz，温度为55°C的条件下超声提取2h，过滤，收集滤 液，滤渣重复提取2次；收集提取液减压浓缩至原体积的1/4,收集浓缩液，依次加入浓缩液 体积1/3、1/4、1/6的氯仿搅拌，静置分层，收集下层，合并萃取液；萃取液以氯仿-甲醇-水 为溶剂系统，混合比例4 :7 :6,取下相做固定相，上相做流动相，采用高速逆流色谱纯化，根 据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻干燥即得野百合碱。经检测，含量为94. 1%。
[0014] 实施例3 : 取干燥的野百合粉碎，过60目筛；称取一定量的粗粉，加入料液比为1 :5、90%的乙醇 浸泡，并加入粗粉重量〇. 3%的果胶酶在pH值为5,温度为50°C的条件下浸泡酶解3h ;酶解 结束，将所得酶解物进行超声提取2h，过滤，收集滤液，滤渣重复提取2次；收集提取液减压 浓缩至原体积的1/5,收集浓缩液，依次加入浓缩液体积1/3、1/4、1/6的氯仿搅拌，静置分 层，收集下层，合并萃取液；萃取液以氯仿-甲醇-水为溶剂系统，混合比例6 :10 :7,取下相 做固定相，上相做流动相，采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收试剂，冷冻 干燥即得野百合碱。经检测，含量为94. 8%。
【主权项】
1. 一种野百合碱的提取、纯化方法，其特征在于包括以下步骤： 1) 原材料的处理：取干燥的野百合粉碎，过20-60目筛； 2) 酶解：称取一定量的粗粉，加入料液比为1 :2~5、70~90%的乙醇浸泡，并加入粗粉重 量0. 1%~0. 3%的生物酶在pH值4~5,温度为45~50°C的条件下浸泡酶解l~3h; 3) 超声提取：酶解结束，将步骤（2)中的酶解物进行超声提取l~2h，过滤，收集滤液，滤 澄重复提取1~2次； 4) 有机溶剂萃取：收集提取液减压浓缩至原体积的1/5~1/3,收集浓缩液，依次加入浓 缩液体积1/3、1/4、1/6的氯仿搅拌，静置分层，弃去上层，收集下层，合并萃取液； 5) 高速逆流色谱仪纯化：萃取液采用高速逆流色谱纯化，根据图谱收集目标成分，回收 试剂，冷冻干燥即得野百合碱。2. 根据权利要求1所述的一种野百合碱的提取、纯化方法，其特征在于步骤2)中所述 的生物酶为果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶中的一种或两种以上的混合物。3. 根据权利要求1所述的一种野百合碱的提取、纯化方法，其特征在于步骤3)中所述 超声提取的频率为20~40KHz，温度为50~60°C。4. 根据权利要求1所述的一种野百合碱的提取、纯化方法，其特征在于步骤5)中所述 的高速逆流色谱分离的溶剂体系为氯仿-甲醇-水溶剂系统，混合比例2-6 :5-10 :5-7,取 下相做固定相，上相做流动相。
【专利摘要】本发明公开了一种野百合碱的提取、纯化方法。其制备步骤为：原材料的处理→酶解→乙醇超声提取→氯仿萃取→高速逆流色谱仪分离纯化，冷冻干燥即得野百合碱。本方法快速、应用范围广，适合高纯度野百合碱的生产。
【IPC分类】C07D491/16
【公开号】CN104910169
【申请号】CN201510270112
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月26日