专利名称：淫羊藿碱a的分离提取方法
技术领域：
本发明属于淫羊藿碱A的分离提取方法。
背景技术：
淫羊藿(Herba Epimedii)又名仙灵脾，系小檗科(Berberbidaceae)淫羊藿属(Epimedium)植物的地上干燥部分，具有补肾壮阳，强筋骨，祛风湿之功效，现代药理研究表明，淫羊藿还具有防治骨质疏松、提高免疫系统功能作用等。2000年版中国药典收载了5种淫羊藿属植物，朝鲜淫羊藿是其中的一种，且为长白山道地中药材之一。朝鲜淫羊藿中化学成分的研究多集中在黄酮类化合物方面，而对其生物碱类化合物的研究较少，自1957年发现木兰碱后，一直未有该方面的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种淫羊藿碱A的分离提取方法。
生物碱一般是指存在于植物中的碱性含氮化合物，许多生物碱是极有价值的药物。自1957年在朝鲜淫羊藿中发现木兰碱后，一直未有该方面的报道。本发明先从朝鲜淫羊藿叶片中提取总生物碱，将总碱纯化，然后采用柱层析分离，最后用高效液相色谱法进一步分离、纯化，得到纯品。采用核磁、傅立叶变换离子回旋共振质谱、红外光谱技术，确定化合物的结构，为淫羊藿碱A。这种生物碱是首次在朝鲜淫羊藿叶片中分离得到的新化合物。
本发明首先从朝鲜淫羊藿叶片中提取总生物碱，用90-95％乙醇回流，提取液经浓缩、过滤、除叶绿素，得到总生物碱；总碱以0.2-0.5％的HCl或H2SO4水溶液处理，过滤除去不溶于水的亲脂性杂质，再将HCl或H2SO4的酸水液用氨水调至pH为9.5-10.5，使生物碱游离，用氯仿萃取即得较纯的总生物碱。然后采用硅胶柱，氯仿-甲醇-氨水体系进行柱层析，并收集馏分，浓缩后通过碱性三氧化二铝层析柱，用氯仿作洗脱剂进行洗脱，收集馏分，浓缩。
用高效液相色谱a条件进行分离，收集保留时间为9-12min的馏分；将馏分蒸干溶于甲醇和甲酸水的体系，二者的体积比为，甲醇∶甲酸水＝1-1.5∶10-10.5、pH＝3-3.5，加入氯仿，水层以氨水调至pH为9.5-10.5，平衡后，将氯仿层用高效液相色谱b条件进行分离，收集保留时间为10.45-11.15min的组分，挥干溶剂，得淡黄色粉末，mp 298℃～299℃。
液相条件a，流动相为乙睛∶水＝50∶50-52；流速4ml/min，色谱柱YWG-C18，ID 11mm×30cm，30μm，波长210nm，进样1ml，总体积50ml氯仿，柱温30℃；液相条件b，流动相为乙睛∶水＝1∶1-1.1，流速1ml/min，色谱柱YWG-C18，ID 4.6mm×250mm，30μm，波长210nm，柱温30℃。
采用核磁、傅立叶变换离子回旋共振质谱、红外光谱技术，确定新化合物的结构。
附图1是淫羊藿碱A的结构式。
依据图1的结构式命名为6-羟基-11，12-二甲氧基-2，2-二甲基-1，8-二氧-1，3，4，8-四氢-2H-7-氧杂-2-氮鎓-苯并[c]菲，简称淫羊藿碱A。
附图2FT-ICRMS高分辨质谱图FT-ICRMS高分辨质谱给出分子式为C20H20O6N1，分子量为370.1285012(M+)，不饱和度为11.5。
附图3IR谱图IR cm-13371～3241(OH)；1079(OH)；2951、2907、1463、1412、1376(CH2、CH3)；3081、1598、1544、842、788、679(Ph-H)；1713、1754(C＝O)；1132～1304(C-C、C-N、C-O、-C-O-C-)。
附图41HNMR谱图1HNMR(400MHz，CDCl3)，在δ(ppm)2.633(2H，t，J＝7.6Hz)；3.484(2H，t，J＝7.6Hz)；7.162(1H，s)；8.168与8.190(1H，d，J＝8.8Hz)；7.288与7.310(1H，d，J＝8.8Hz)处可观察到由3，4，5，9，10-H引起的峰信号；在2.373(6H，s)；4.10(6H，s)处可见到N-CH3氢、O-CH3氢引起的峰信号。
附图5、613CNMR谱图及Dept谱根据13C-NMR(400MHz，CDCl3)谱和Dept谱，δ(ppm)158.531(C-1)，157.494(C-8)均归属＞C＝O；δ60.129(C-3)，32.834(C-4)，136.491(C-4a)，116.452(C-4b)，111.246(C-5)，151.058(C-6)，118.123(C-6a)，126.776(C-9)，108.971(C-9a)，137.597(C-9b)，118.831(C-9c)，116.452(C-10)，150.760(C-11)，144.250(C-12)，56.513、56.414(O-CH3上的C)，45.152(N-CH3上的2个C)。
具体实施例方式
实施例1将淫羊藿叶片3kg用95％乙醇回流提取3次，每次提取2小时，合并提取液，减压浓缩得深绿色溶液，除去叶绿素，即得总生物碱。将总碱以0.2％盐酸水溶液溶解，过滤除去不溶于水的亲脂性杂质，再将酸水液用氨水碱化至pH＝9.5，使生物碱游离，用氯仿萃取即得较纯的总生物碱。用酸碱反复转溶2次。
将总碱通过硅胶柱层析，依次用不同梯度的洗脱剂洗脱，洗脱液用电喷雾质谱监测，收集洗脱剂为氯仿∶甲醇∶氨水＝10∶3∶0.6的馏分，浓缩后通过碱性三氧化二铝层析柱，用氯仿作洗脱剂，收集馏分，浓缩。用高效液相色谱a条件进行分离，流动相比例乙睛∶水＝50∶50，其它条件如a，收集保留时间为9-12min的馏分；将此馏分蒸干溶于甲醇∶甲酸水＝1.5∶10的体系，甲酸水的pH＝3，加入氯仿，水层以氨水调pH＝10.5，平衡后，将氯仿层用高效液相色谱b条件进行分离，流动相比例采用，乙睛∶水＝1∶1，收集保留时间为11.01min的组分挥干溶剂，得淡黄色粉末38mg。
实施例2将淫羊藿叶片3.5kg用90％乙醇回流提取2次，每次提取3小时，合并提取液，减压浓缩得深绿色溶液，除去叶绿素，即得总生物碱。将总碱以0.5％盐酸水溶液溶解，过滤除去不溶于水的亲脂性杂质，再将酸水液用氨水碱化至pH＝10，使生物碱游离，用氯仿萃取即得较纯的总生物碱。用酸碱反复转溶2次。
将总碱通过硅胶柱层析，依次用不同梯度的洗脱剂洗脱，洗脱液用电喷雾质谱监测，收集洗脱剂为氯仿∶甲醇∶氨水＝9.5∶2.8∶0.5的馏分，浓缩后通过碱性三氧化二铝层析柱，用氯仿作洗脱剂，收集馏分，浓缩。用高效液相色谱a条件进行分离，收集保留时间为9-12min的馏分；将此馏分蒸干溶于甲醇∶甲酸水＝1∶10的体系，甲酸水的pH为3.2，加入氯仿，水层以氨水调至pH＝10，平衡后，将氯仿层用用高效液相色谱b条件进行分离，流动相比例采用，乙睛∶水＝1∶1.1，收集保留时间为10.45min的组分挥干溶剂，得淡黄色粉末49mg。
实施例3将淫羊藿叶片3.5kg用95％乙醇回流提取2次，每次提取3小时，合并提取液，减压浓缩得深绿色溶液，除去叶绿素，即得总生物碱。将总碱以0.4％盐酸水溶液溶解，过滤除去不溶于水的亲脂性杂质，再将酸水液用氨水碱化至pH＝10.5，使生物碱游离，用氯仿萃取即得较纯的总生物碱。用酸碱反复转溶2次。
将总碱通过硅胶柱层析，依次用不同梯度的洗脱剂洗脱，洗脱液用电喷雾质谱监测，收集洗脱剂为氯仿∶甲醇∶氨水＝10.5∶3.2∶0.7的馏分，浓缩后通过碱性三氧化二铝层析柱，用氯仿作洗脱剂，收集馏分，浓缩。用高效液相色谱a条件进行分离，收集保留时间为9-12min的馏分；将此馏分蒸干溶于甲醇∶甲酸水＝1.5∶10.5的体系，甲酸水的pH＝3.5，加入氯仿，水层以氨水调至pH 9.5，平衡后，将氯仿层用用高效液相色谱b条件进行分离，流动相比例采用，乙睛∶水＝1∶1.收集保留时间为11.15min的组分，挥干溶剂，得淡黄色粉末43mg。
权利要求
1.一种淫羊藿碱A具有如下结构
2.一种如权利要求1所述淫羊藿碱A的分离提取方法，其特征是从朝鲜淫羊藿叶片中提取总生物碱，用90-95％乙醇回流，提取液经浓缩、过滤、除叶绿素，得到总生物碱；总碱以0.2-0.5％的HCl或H2SO4水溶液处理，过滤除去不溶于水的亲脂性杂质，再将HCl或H2SO4的酸水液用氨水调至pH为9.5-10.5，使生物碱游离，用氯仿萃取即得较纯的总生物碱，然后采用硅胶柱，氯仿—甲醇—氨水体系进行柱层析，并收集馏分，浓缩后通过碱性三氧化二铝层析柱，用氯仿作洗脱剂进行洗脱，收集馏分，浓缩；用高效液相色谱a条件进行分离，收集保留时间为9-12min的馏分；将馏分蒸干溶于甲醇和甲酸水的体系，二者的体积比为，甲醇∶甲酸水＝1-1.5∶10-10.5、pH＝3-3.5，加入氯仿，水层以氨水调至pH为9.5-10.5，平衡后，将氯仿层用高效液相色谱b条件进行分离，收集保留时间为10.45-11.15min的组分，挥干溶剂，得淡黄色粉末，mp298℃～299℃；液相条件a，流动相为乙睛∶水＝50∶50-52；流速4ml/min，色谱柱YWG-C18，ID 11mm×30cm，30μm，波长210nm，进样1ml，总体积50ml氯仿，柱温30℃；液相条件b，流动相为乙睛∶水＝1∶1-1.1，流速1ml/min，色谱柱YWG-C18，ID 4.6mm×250mm，30μm，波长210nm，柱温30℃。
全文摘要
本发明属于淫羊藿碱A的分离提取方法。该化合物是从本属植物中首次分离得到的。首先将一定量的朝鲜淫羊藿叶片用乙醇提取，提取液经浓缩、过滤、除叶绿素，得到总生物碱；再将总碱用酸碱反复转溶，得到较纯的总生物碱；最后采用柱层析法与高效液相法相结合的分离方法，得到了该化合物的纯品，为淡黄色粉末。采用核磁、傅立叶变换离子回旋共振质谱、电喷雾质谱、红外光谱等现代化手段，确定了其化学结构，此化合物为季铵型生物碱。本发明不但提供了一种提取分离生物碱的新方法，而且这一新化合物的发现丰富了淫羊藿属植物的化学成分，并为以后的药理研究及新药开发奠定了基础。
文档编号C07D493/04GK1680385SQ20051001656
公开日2005年10月12日 申请日期2005年2月1日 优先权日2005年2月1日
发明者刘志强, 刘春明, 刘淑莹, 宋凤瑞, 窦建鹏, 李丽 申请人:中国科学院长春应用化学研究所