专利名称：黄连总生物碱的提取工艺及其新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药的提取工艺及其新用途，特别是涉及一种黄连总生物碱的提取工艺及其新用途。
本发明目的是通过如下技术方案实现的黄连先破碎，然后水浸泡并同时进行超声波处理，水浸泡时间为30～240分钟，使黄连的含水量达100％～300％，水浸泡后的黄连在温浸条件下进行总生物碱提取，提取温度为70℃～98℃，提取时溶剂水量为5～16倍生药材重量，提取时间为30～180分钟，提取次数为1～4次，所得提取液进行减压浓缩，浓缩时的真空度为0.04～0.08MPa，浓缩提取液至2～10倍生药材重量的水的体积，然后用浓盐酸调节浓缩提取液的pH值至1～5，再加入氯化钠趁热溶解，氯化钠加入量为4％～16％浓缩提取液量的水的重量，浓缩提取液静置4～24小时，然后通过抽滤或离心甩干收集提取液中的沉淀物，沉淀物在50℃～80℃的温度下进行烘干，干燥后的沉淀物被粉碎即可得到黄连总生物碱盐酸盐成品。
本发明的提取工艺适合黄连总生物碱的提取，本发明的工艺在浸泡过程中用了超声波处理，提取工艺采用温浸水提法，提取液进行适度减压浓缩，黄连总生物碱从提取液中分离出来是通过形成生物碱盐酸盐并在盐析作用下形成结晶而沉淀下来，结晶沉淀物用抽滤或离心甩干的方法收集，所述超声波处理设在水浸泡过程中，它直接影响黄连药材浸润速度和程度，进而影响总生物碱的提取效果，采用温浸水提取法可大大简化生产设备及生产操作，另外温浸水提取也可避免黄连中过多的杂质被带到提取液中，对提取液进行适度浓缩再用盐酸调pH值并加氯化钠以进一步降低黄连生物碱盐酸盐在提取液中的溶解度，所得沉淀物杂质少黄连总生物碱含量高，而且也缩短提取液浓缩的时间，浓缩时间缩短可减少黄连生物碱中某些成分因受热过长而分解的程度，采用抽滤或离心甩干能很有效地从沉淀物去除溶有氯化钠的残留液，从而保证了黄连总生物碱提取物的纯度及质量。黄连总生物碱鉴定薄层层析法定性分析用薄层层析法对沉淀物样品进行定性分析，选用硅胶G薄层板，以苯—醋酸乙脂—甲醇—异丙醇—浓氨试液为展开剂，试液的比例为6∶3∶1.5∶1.5∶0.5，实验中用对照品包括盐酸小檗碱，盐酸药根碱以及盐酸巴马汀，溶剂为甲醇，溶有沉淀物样品及对照晶的甲醇溶液分别滴在薄层板上，先在浓氨水中平衡15分钟，然后在展开剂中展开，展开结束后取出凉干，在365nm的紫外灯下检视，结果显示以对照品为参考，沉淀物中盐酸小檗碱，盐酸药根碱以及盐酸巴马汀均存在。高效液相定量分析用高效液相法对沉淀物样品进行定性和定量分析，选用乙腈和0.02mol/L的磷酸二氢钠为有机和无机流动相，二相的比例为36∶64，流动相流速为0.85ml/min，进样量为20μl，实验中用对照晶包括盐酸小檗碱，盐酸药根碱以及盐酸巴马汀，选用去离子水为沉淀物样品及对照品的溶剂，沉淀物样品进样浓度设定在0.05mg/ml，检测波长设定在345nm，以对照品高效液相图谱为对照，所有用本工艺提取所得沉淀物中盐酸小檗碱，盐酸药根碱以及盐酸巴马汀均存在，用对照品已知进样浓度和相应的高效液相图谱吸收峰面积作标准回归线，对一套提取工艺正交试验所得沉淀物样品进行高效液相图谱分析，计算得沉淀物中盐酸小檗碱含量达55％～74％，盐酸约根碱和盐酸巴马汀含量分别达5.3％～6.8％和5.5％～8.5％，见表1和表2。表1 对照品和沉淀物样品进样浓度以及高效液相色谱吸收峰面积
表2.沉淀物样品中三种盐酸生物碱盐浓度及含量百分比的计算值
实验例1、对四氧嘧啶(Alloxan) 高血糖小鼠血糖的影响alloxan高血糖小鼠的形成昆明小鼠，雄性，体重23-25g，尾静脉注射alloxan 100mg/Kg。72h后预测血糖(葡萄糖氧化酶法)。选用11.1mmol/L以上者，分为6组，分别为对照组、总碱25，50，100，200mg/kg及已知降血糖药二甲双胍200mg/kg组。每日灌胃给药1次，于给药第7天，取血测血糖。
总碱对Alloxan高血糖小鼠的血糖有较强的降低作用，且有较好的量效关系，总碱200mg/kg组作用明显强于二甲双胍200mg/kg组，详见表3及图1。
表3.总碱对Alloxan高血糖小鼠血糖的影响
实验例2.总碱对胰岛素抵抗MSG小鼠的胰岛素耐量及葡萄糖耐量的影响MSG小鼠的形成新生ICR小鼠出生第二日起每日皮下注射L-谷氨酸钠(MSG)4g/Kg(按体重)，连续7日，对照组注射等量生理盐水。第21日后断乳，MSG组及对照组均按雌雄分笼饲养。由于MSG损伤下丘脑，诱发动物的高血糖、高胰岛素血症及胰岛素抵抗。MSG小鼠分为3组对照组、总碱100mg/kg及已知胰岛素增敏剂罗格列酮2。5mg/kg组。每日灌胃给药1次，于给药第7天进行胰岛素耐量实验于给药第12天进行葡萄糖耐量实验。
表4及图2说明，总碱明显改善了胰岛素抵抗MSG小鼠对胰岛素的反应性，皮下注射胰岛素0.4IU/kg，测定0、40及90分钟的血糖，并计算血糖曲线下面积(AUC)均明显低于对照表4.总碱对胰岛素抵抗MSG小鼠胰岛素耐量的影响
与对照组相比，*P＜0.05表5及图3表明，总碱明显改善了胰岛素抵抗MSG小鼠葡萄糖耐量实验，口服灌胃葡萄糖2g/kg，测定0，30及120分钟的血糖及血糖曲线下面积(AUC)均明显低于对照组。
表5.总碱对胰岛素抵抗MSG小鼠糖耐量的影响
与对照组相比，*P＜0.05
结论上述实验结果说明，总碱可明显降低高血糖小鼠的血糖，呈量效关系，对胰岛素抗性的小鼠，总碱可明显改善其异常的胰岛素及糖耐量具有胰岛素增敏剂的特点。此外，在以往实验中发现，已上市的胰岛素增敏剂吡格列酮使动物体重增加，临床也有类似结果，被认为是副作用，总碱无增体重作用。
图1 总碱对Alloxan高血糖小鼠血糖的影响；图2 总碱对胰岛素抵抗MSG小鼠胰岛素耐量的影响；图3 总碱对MSG小鼠葡萄糖耐量的影响。
权利要求
1.黄连总生物碱的提取工艺，其特征在于该工艺为黄连先破碎然后水浸泡并同时进行超声波处理，水浸泡时间为30～240分钟，使黄连的含水量达100％～300％，水浸泡后的黄连在温浸条件下进行总生物碱提取，提取温度为70℃～98℃，提取时溶剂水量为5～16倍生药材重量，提取时间为30～180分钟，提取次数为1～4次，所得提取液进行减压浓缩，浓缩时的真空度为0.04～0.08MPa，浓缩提取液至2～10倍生药材重量的水的体积，然后用浓盐酸调节浓缩提取液的pH值至1～5，再加入氯化钠趁热溶解，氯化钠加入量为4％～16％浓缩提取液量的水的重量，浓缩提取液静置4～24小时，然后通过抽滤或离心甩干收集提取液中的沉淀物，沉淀物在50℃～80℃的温度下进行烘干，干燥后的沉淀物被粉碎即可得到黄连总生物碱盐酸盐成品。
2.根据权利要求1所述的黄连总生物碱的提取工艺，其特征在于该工艺为黄连破碎水浸泡的同时进行20kHz超声波处理，水浸泡时间为120分钟，使黄连的含水量达230％，水浸泡后的黄连在温浸条件下进行总生物碱提取，提取温度为82℃，提取时溶剂水量为10倍生药材重量，提取时间为60分钟，提取次数为2次，所得提取液进行减压浓缩，浓缩时的真空度为0.04～0.08MPa，浓缩提取液至3倍生药材重量的水的体积然后用浓盐酸调节浓缩提取液的pH值至2，再加入氯化钠，氯化钠加入量为14％浓缩提取液量的水的重量，浓缩提取液静置12小时，然后通过抽滤或离心甩干收集提取液中的沉淀物，沉淀物在60℃的温度下进行烘干，干燥后的沉淀物被粉碎即可得到黄连总生物碱盐酸盐成品
3.黄连总生物碱在制备降血糖药物中的应用。
4.黄连总生物碱在制备具有胰岛素增敏作用的药物中的应用。
5.黄连总生物碱在预防与治疗2型糖尿病中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种黄连总生物碱的提取工艺，该工艺包括黄连水浸泡并时超声波处理，在温浸条件下进行总生物碱提取，所得提取液进行减压浓缩，然后用浓盐酸调节浓缩提取液的pH值，再加入氯化钠，静置，然后通过抽滤或离心甩干收集提取液中的沉淀物，沉淀物被烘干，烘干后的沉淀物进行粉碎，即可得到黄连总生物碱盐酸盐成品。本发明工艺成本低、得率高、简便易行。本发明还公开了黄连总生物碱在制备降血糖及具有胰岛素增敏作用的药物中的新用途。
文档编号C07D455/00GK1450074SQ02103880
公开日2003年10月22日 申请日期2002年4月5日 优先权日2002年4月5日
发明者盛云杰, 袁开红 申请人:北京康思瞄医药技术开发有限公司, 江苏恒瑞医药股份有限公司