专利名称：一种制备黄连总生物碱方法
技术领域：
本发明涉及中药有效部位的提取分离方法，尤其是从中药黄连中提取分离有效部位总生物碱的方法。
背景技术：
黄连(RHIZOMA COPTIDIS)为毛茛科植物黄连、三角叶黄连或云连的干燥根茎，收载于2005版中国药典一部，具清热燥湿、泻火解毒之功效，为中医临床治疗消渴(糖尿病)的常用药物，主要含原小檗碱型生物碱如小檗碱、巴马汀、药根碱，黄连碱等生物碱类成分。
生物碱是自然界中广泛存在的一大类碱性含氮化合物，是许多中草药的有效成分，中性和酸性条件下常以阳离子形式存在，所以一般能用阳离子交换树脂从提取液中分离富集，如具有良好的抗癌作用钩吻总生物碱，其阳离子交换树脂法提取工艺为取干燥的钩吻根碎片1g，加0.3％硫酸水溶液浸泡2d，过滤滤渣，再浸泡1次，合并滤液，用氢氧化钠调pH至5.0后通过0017强酸性阳离子交换树脂柱，用2mol/L的HCl洗脱生物碱，洗脱液用NaOH中和调pH至11.0，再以氯仿萃取2次，浓缩萃取液至干，总收率为1.07％，纯度大于96％[徐坚，梁崇真，药学学报，1988，23(6)341]。离子交换树脂分离生物碱上样量小且步骤烦琐，而采用大孔树脂分离简便快速、上样量大、易于洗脱和再生，近年来在中药有效成分分离、分析中的应用逐渐增多。目前主要用于中药样品中苷类、黄酮类成分的处理，应用于生物碱类成分分离的文献较少(马振山.大孔树脂在药学领域中的研究应用[J]。中成药，1997，19(12)40)。尚未发现采用苯乙烯型大孔树脂大量分离制备黄连总生物碱的文献报道，本工艺采用苯乙烯型大孔树脂制备黄连总生物碱，解决了黄连水煎液体积大、浓缩费时、杂质含量高等问题。
发明内容
本发明针对黄连等药材提取时，水煎液体积大、浓缩费时、杂质含量高等问题，采用苯乙烯型大孔树脂制备黄连总生物碱，具体内容如下称取经适当粉碎的药材，以水提取，水煎液过滤或离心沉降，控制流速将水煎液上清液加至预处理好的树脂柱上，水洗，用含水乙醇洗脱，将含水乙醇洗脱液浓缩即可析出大量生物碱沉淀，于燥即得；提取物总生物碱含量经HPLC检测，以盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱和硫酸黄连碱为对照品，黄连总生物碱含量25～100％。
优选的，药材为经适当粉碎的黄连、黄柏、三棵针的市售或新鲜药材。
优选的，经适当粉碎的黄连药材，以12～24倍量水煎煮2～3次，水煎液过滤或离心沉降。
更优选的，树脂柱所填充大孔树脂为苯乙烯型，其最大吸附量为50～300g黄连药材/1000g树脂。
更优选的，上样和清洗控制流速为2～50mL·min-1。
更优选的，所采用含水乙醇为10～50％含水乙醇。
更优选的，干燥方法可采用烘干、减压干燥或其它干燥方法。
该法制得的总生物碱经HPLC检测，以盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱，硫酸黄连碱为对照品，黄连总生物碱含量25～100％。
该法也可用于黄柏、三棵针等药材中小檗碱型生物碱的大量制备。
大孔树脂的处理与再生方法为大孔树脂使用前经含水乙醇浸泡，水洗后即可上样；洗脱后树脂的再生可采用含水乙醇浸泡，水洗后即可进入下一循环。
本工艺采用新型大孔树脂应用于黄连等药材中生物碱的制备，大大缩短了浓缩过程、去除了杂质，具有简便快速、上样量大、易于洗脱和再生等优点，适于黄连等药材中生物碱的大量制备。
具体实施例方式
实施例1称取经适当粉碎的黄连药材350g，分别以9、6倍量水煎煮2次，水煎液离心沉降，上样和清洗控制流速为2mL·min-1，将上清液加至预处理好的DS-401树脂柱上(5.1×75cm玻璃柱)，水洗，用20％的含水乙醇洗脱，将含水乙醇洗脱液浓缩即可析出大量生物碱沉淀，减压干燥即得23g。以盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱，硫酸黄连碱为对照品，黄连总生物碱HPL(、测定结果见表1，提取物中已知生物碱含量40.26％。
表1黄连总生物碱中已知成分百分含量测定结果
实施例2称取经适当粉碎的黄连药材500g，分别以9、6、6倍量水煎煮3次，水煎液离心沉降，上样和清洗控制流速为10mL·min-1，控制流速将上清液加至预处理好的DA-201树脂柱上(8.0×96cm玻璃柱)，水洗，用30％的含水乙醇洗脱，将含水乙醇洗脱液浓缩即可析出大量生物碱沉淀，烘干即得35.421g。提取物总生物碱含量见表2。
表2 黄连总生物碱中已知成分百分含量测定结果
实施例3称取经适当粉碎的黄柏药材，分别以9、6倍量水煎煮2次，水煎液过滤，上样和清洗控制流速为15mL·min-1，控制流速将上清液加至预处理好的装有D-101-I型的树脂柱上(8.0×96cm玻璃柱)，水洗，用30％的含水乙醇洗脱，将含水乙醇洗脱液浓缩即可析出大量生物碱沉淀，减压干燥即得。提取物总生物碱含量见表3。
表3 黄连总生物碱中已知成分百分含量测定结果
实施例4称取经适当粉碎的三棵针药材，分别以9、6倍量水煎煮2次，离心沉降，上样和清洗控制流速为30mL·min-1，控制流速将上清液加至预处理好的DM-301树脂柱上(8.0×96cm玻璃柱)，水洗，用40％的含水乙醇含水乙醇洗脱，将含水乙醇洗脱液浓缩即可析出大量生物碱沉淀，烘干即得。提取物总生物碱含量见表4。
表4 黄连总生物碱中已知成分百分含量测定结果
实施例5黄连总生物碱的HPLC检测
1.仪器、试剂和药品SHIMADZU高效液相色谱仪(LC-10AT泵，LC-10紫外检测器)(日本)，N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)。盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱均购自中国药品生物制品鉴定所，硫酸黄连碱由周洪雷博士提供(纯度＞99％)。
2.色谱条件色谱柱Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相乙腈-水(48∶52，每1L含磷酸二氢钾3.4g，十二烷基硫酸钠1.7g)；流速为1.0mL·min-1；检测波长为345nm，进样量20μl。
3.样品测定分别取0.645mg·mL-1的盐酸小檗碱溶液0.5mL，0.285mg·mL-1的盐酸巴马亭溶液1mL，0.125mg·mL-1的硫酸黄连碱2mL，0.502mg·mL-1的药根碱溶液0.5mL于10mL容量瓶中，甲醇定容，作为混合对照品溶液。精密称取制得的黄连总生物碱10.0mg，甲醇溶解并定容至100mL，作为供试品溶液。微孔滤膜过滤，在上述色谱条件下进样测定，外标一点法计算含量。
权利要求
1.一种黄连总生物碱的制备方法，其特征在于称取经适当粉碎的药材，以水提取，水煎液过滤或离心沉降，控制流速将水煎液上清液加至预处理好的树脂柱上，水洗，用含水乙醇洗脱，将含水乙醇洗脱液浓缩即可析出大量生物碱沉淀，干燥即得；提取物总生物碱含量经HPLC检测，以盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱和硫酸黄连碱为对照品，黄连总生物碱含量25～100％。
2.据权利要求书1所述黄连总生物碱的制备方法，其特征在于药材为经适当粉碎的黄连、黄柏、三棵针的市售或新鲜药材。
3.据权利要求书1所述黄连总生物碱的制备方法，其特征在于经适当粉碎的黄连药材，以以12～24倍量水煎煮2～3次，水煎液过滤或离心沉降。
4.据权利要求书1所述黄连总生物碱的制备方法，其特征在于树脂柱所填充大孔树脂为苯乙烯型，其最大吸附量为50～300g黄连药材/1000g树脂。
5.据权利要求书1所述黄连总生物碱的制备方法，其特征在于上样和清洗控制流速为2～50mL·min-1。
6.据权利要求书1所述黄连总生物碱的制备方法，其特征在于所采用含水乙醇为10～50％的乙醇水溶液。
7.据权利要求书1所述黄连总生物碱的制备方法，其特征在于干燥方法可采用烘干、减压干燥或其它干燥方法。
8.据权利要求书2所述黄连总生物碱的制备方法，其特征在于该法也可用于黄柏、三棵针等药材中小檗碱型生物碱的大量制备。
全文摘要
一种黄连总生物碱的制备方法，采用一种新型苯乙烯型大孔树脂分离黄连生物碱，工艺简单、快速，去除杂质效率高，大大简化了黄连水煎液的浓缩工艺。称取经适当粉碎的黄连药材，以水煎煮，控制流速将水煎液上清液加至预处理好的树脂柱上，水洗，含水乙醇洗脱，洗脱液浓缩即可析出大量生物碱沉淀，干燥即得，经HPLC检测，黄连总生物碱含量25～100％。该树脂对于黄连生物碱具有上样量大、吸附能力强且易于从树脂上洗脱、可重复利用等特点，特别适用于药厂企业药材提取物、中药单方或含黄连复方新制剂的大量生产，也可用于中药单方或含黄连复方新制剂的质量检验过程。
文档编号C07D455/00GK1730480SQ20051004434
公开日2006年2月8日 申请日期2005年8月2日 优先权日2005年8月2日
发明者魏英勤, 班青 申请人:山东轻工业学院