氨酸14. 4mg/ml的PH为6.8的d地2〇溶液。
[0059] 本发明提供一种铅-IgG馨合物，铅离子与IgG通过琉基或/和半脱氨酸残基馨合 而成。
[0060] 本发明还提供一种铅-IgG馨合物的制备方法，包括W下步骤：
[0061] A)铅与IgG的馨合反应；在人源的IgG或按照生物学方法重组的IgG中加入铅离 子进行馨合反应，得到反应溶液；
[0062]B)纯化铅-IgG馨合物的提取；采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的 IgGW及多余的铅离子，即得铅-IgG馨合物，具体步骤如下：
[0063] (1)溶解样品；向经过步骤A)得到的反应溶液中加入生理盐水，使铅-IgG馨合物 复溶
[0064] (2)平衡层析柱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与IgG特 异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；
[006引 做上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（1)中样品，然后上柱，IgG与 填料特异性结合；
[0066] (4)洗脱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 05-0.Imol/L的磯 酸盐溶液进行洗脱；
[0067] (5)收集；收集经过步骤（4)洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；
[0068] (6)透析；将步骤巧）中的收集的洗脱液，装透析袋，用d地2〇透析除盐，换水S次 后，4°C透析过夜，收集样本；
[0069] (7)平衡层析柱；采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能 与铅特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱；
[0070] 做上样；待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤做中样本，然后上柱；
[0071] (9)洗脱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 5-1.Omol/L的磯 酸盐溶液进行洗脱；
[0072] (10)收集；收集经过步骤（9)洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；
[007引 （11)透析；将步骤（10)中的收集的洗脱液，装透析袋，用(1化0透析除盐，换水立 次后，4°C透析过夜，收集样本，即得铅-IgG馨合物；
[0074]C)对铅-IgG馨合物的鉴定，具体步骤如下：
[0075] (1)制备胶床；W琼脂糖凝胶、聚丙締酷胺凝胶中的一种作为介质制备胶床；
[0076] (2)加样；取步骤B)中提取纯化得到的铅-IgG馨合物，加入稀释缓冲液，并混匀， 然后加样于样品槽中；
[0077] 做电泳：连接电泳板，进行电泳；
[0078] (4)检测；在胶床上找出含铅的蛋白条带，将该蛋白条带取出，将蛋白条带复溶， 然后再采用ICP-MS法、AAS法或化ISA法检测是否含有铅W及检测铅的含量。
[0079] 本发明还提供一种至少包括如上述的铅-IgG馨合物作为对照品的试剂盒。
[0080] 优选地，该试剂盒中还包括包被液，该包被液含有可捕获IgG的蛋白或可捕获金 属铅的物质。
[0081] 在本发明中，能实现本发明目的的试剂盒可W列出W下几种，但并不限于此。
[0082] -种检测血样中铅-IgG馨合物的试剂盒，包括：含有可捕获IgG的蛋白的包被液、 封闭液、洗漆液、作为二抗的可捕获铅的物质、酶标抗体、底物、终止液、稀释缓冲液、上样缓 冲液、阳性对照、阴性对照等。
[0083] -种检测血样中铅-IgG馨合物的试剂盒，包括：含有可捕获IgG的蛋白的包被液、 封闭液、洗漆液、洗脱液、上样缓冲液、阳性对照、阴性对照等。
[0084] -种检测血样中铅-IgG馨合物的试剂盒，包括：含有可捕获IgG的蛋白的包被液、 封闭液、洗漆液、洗脱液、上样缓冲液、酸化剂、过氧化氨、标准品、阴性对照等。
[0085] -种检测血样中铅-IgG馨合物的试剂盒，包括：作为提纯全血中IgG所需提取试 剂、复溶液、含有可捕获铅的物质的包被液、封闭液、洗漆液、酶标抗体、底物、终止液、稀释 缓冲液、上样缓冲液、阳性对照、阴性对照等。
[0086] -种检测血样中铅-IgG馨合物的试剂盒，包括：作为提纯全血中IgG所需提取试 剂、复溶液、上样缓冲液、阳性对照、阴性对照等。
[0087] -种检测血样中铅-IgG馨合物的试剂盒，包括：作为提纯全血中IgG所需提取试 剂、上样缓冲液、复溶液、酸化剂、过氧化氨、阳性对照、阴性对照等。
[008引一种检测血样中铅-IgG馨合物的试剂盒，包括：含有可捕获IgG的蛋白的包被液、 胶床介质、复溶液、上样缓冲液、溶解胶床上含铅的蛋白条带所需液体、含有可捕获铅的物 质的包被液、封闭液、洗漆液、酶标抗体、底物、终止液、稀释缓冲液、阳性对照、阴性对照等。
[0089] -种检测血样中铅-IgG馨合物的试剂盒，包括：作为提纯全血中IgG所需提取试 剂、胶床介质、复溶液、上样缓冲液、溶解胶床上含铅的蛋白条带所需液体、阳性对照、阴性 对照等。
[0090] 一种检测血样中铅-IgG馨合物的试剂盒，包括：作为提纯全血中IgG所需提取试 剂、胶床介质、复溶液、上样缓冲液、溶解胶床上含铅的蛋白条带所需液体、酸化剂、过氧化 氨、阳性对照、阴性对照等。
[0091] 上述几种试剂盒中，所述阳性对照为标准品，即馨合有重金属铅的IgG馨合物或 馨合有重金属铅的BSA馨合物；所述阴性对照为稀释缓冲液。
[0092] 上述试剂盒用于检测馨合铅的IgG,W提高检测的准确性，重复性，并使之在临床 中得到推广。
[0093] 本发明还提供一种定量检测铅-IgG馨合物的方法，W已知含量的上述的铅-IgG 馨合物作为对照品，采用W下方法之一对样品进行检测；酶联免疫法、酶联免疫与原子吸收 光谱结合法、酶联免疫与电感禪合等离子体质谱结合法、提纯铅-IgG馨合物与酶联免疫结 合法、提纯铅-IgG馨合物与原子吸收光谱结合法、提纯铅-IgG馨合物与电感禪合等离子体 质谱结合法、电泳与酶联免疫或原子吸收光谱或电感禪合等离子体质谱结合法。在本发明 中，用检测铅馨合型免疫复合物的方法可W列出的有W下几种，但并不限于W下几种。
[0094] 其中，上述定量检测铅-IgG馨合物的方法中采用的试剂如下：
[0095]方法一：酶巧免巧法巧LISA法）检测铅-IgG馨合物，按照如下步骤检测：
[0096] 1)将能够捕获IgG的物质，如人IgG抗体包被于固相载体上；用稀释缓冲液稀释 抗IgGAb至50000-400000倍，加入化ISA板微孔中，4°C过夜16-18小时，或37°C水浴1-3 小时，储存冰箱；
[0097] 2)从循环系统取全血，作待检样品，lOOOrmp离屯、5-8分钟，离屯、弃去沉淀；
[0098] 3)封闭；移去稀释缓冲液，并用洗漆液进行洗漆，待洗漆完成后，加入W1% -5% 牛血清白蛋白或脱脂奶粉作为封闭液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用洗漆液进行洗 漆，洗漆完成后，ELISA板于36. 5-37. 5°C放置1-2小时；
[009引 4)加待检样品，并且温育；加入步骤。中的待检样品、W已知含量的铅-IgG馨合 物作标准品；用稀释缓冲液稀释待检样品稀释至相应倍数，即稀释10-40倍，加入微孔中， 37°C作用1-2小时；
[0100] W加入可W捕获铅的物质，并且温育；移去待检样品，并用洗漆液进行洗漆，待洗 漆完成后，加入用稀释缓冲液稀释与可W捕获铅的物质或能与铅反应形成抗原抗体复合物 的抗pbAb，37°C作用1-2小时，使抗pbAb与IgG上的金属铅反应；
[0101] 6)酶结合物温育；移去抗铅抗体，并用洗漆液进行洗漆，待洗漆完成后，加入用稀 释缓冲液稀释的酶标抗体，使稀释的酶标抗体的浓度为2yg/ml，37°C作用1-2小时，使其 与酶标抗体反应；
[0102] 7)底物温育；移去酶标抗体，并用洗漆液进行洗漆，待洗漆完成后，加入底物， 37°C避光作用30分钟；
[0103] 8)终止反应；滴加终止液至每一微孔；
[0104] 9)取波长405nm，加完终止液后，将化ISA板置于酶标仪上分别读取待检样品和标 准品的0D值，通过标准品绘制标准曲线，求得待检样品的含量（也可不使用酶标仪，直接通 过染色情况进行定性检测）。
[0105] 该方法利用化ISA原理，可W将全血中的特异性IgG提取出来，提取出来的IgG上 部分馨合有重金属铅，而该部分IgG上的铅可W被抗铅的特异性抗体所捕获，之后可W再 被辣根过氧化物酶、碱性磯酸酶等酶标记的抗体所捕获（该抗体不识别包被蛋白），捕获上 的抗体在显色剂及终止液的作用下，可W在仪器下读出0D值，而不含有馨合金属铅的IgG， 则不会被抗铅的特异性抗体所捕获，也不会与辣根过氧化物酶、碱性磯酸酶等酶标记的抗 体所捕获，而所用试剂中也不含有金属铅（阴性对照组结果为阴性），因而当所读取的0D值 结果显示为阳性时，即可证明检测出IgG上馨合的金属铅。
[0106]方法二：酶联免疫与原子吸收光谱结合法巧LISA法+AAS法）检测铅-IgG馨合物 按照如下步骤检测：
[0107] 1)将能够捕获IgG的物质，如人IgG抗体包被于固相载体上；用稀释缓冲液稀释 抗IgGAb至50000-400000倍，加入化ISA板微孔中，4°C过夜16-18小时，或37°C水浴1-3 小时，储存冰箱；
[010引 2)从循环系统取全血，作待检样品，100化pm离屯、5-8分钟，离屯、弃去沉淀；
[0109] 3)封闭；移去包被液，并用洗漆液进行洗漆，待洗漆完成后，加入W1% -5%牛血 清白蛋白或脱脂奶粉作为封闭液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用洗漆液进行洗漆，洗 漆完成后，ELISA板于36. 5-37. 5°C放置1-2小时；
[0110] 4)加待检样品，并且温育；加入步骤2)中的待检样品、W已知含量的铅-IgG馨合 物作标准品；用稀释缓冲液稀释待检样品稀释至相应倍数，即稀释10-40倍，加入微孔中， 37°C作用1-2小时；
[0111] 5)洗脱；移去待检样品，并用洗漆液进行洗漆，待洗漆完成后，用洗脱液洗脱1-3 小时。
[0112] 6)检测；从化ISA微孔中取样，于原子吸收光谱仪检测馨合于IgG上的铅，并绘制 标准曲线，读出相应数