值；
[0113] 该实施例利用ELISA原理的基础上结合原子吸收光谱（AA巧原理，利用原子吸收 光谱仪检测馨合于IgG上的铅，由于溶液中仅含有IgG，且所用试剂中不含任何重金属（阴 性对照组结果为阴性），不会对结果造成干扰，因而当所读取的结果显示为阳性时，即可证 明检测出IgG上馨合的金属铅。
[0114] 立法三^酶联免疫与电感禪合等离子体质谱结合法巧LISA法+ICP-MS法）检测 铅-IgG馨合物按照如下步骤检测：
[0115] 1)将能够捕获IgG的物质，如人IgG抗体包被于固相载体上；用稀释缓冲液稀释 抗IgGAb至50000-400000倍，加入化ISA板微孔中，4°C过夜16-18小时，或37°C水浴1-3 小时，储存冰箱；
[0116] 2)从循环系统取全血，作待检样品，lOOOrmp离屯、5-8分钟，离屯、弃去沉淀；
[0117] 3)封闭；移去稀释缓冲液，并用洗漆液进行洗漆，待洗漆完成后，加入W1% -5% 牛血清白蛋白或脱脂奶粉作为封闭液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用洗漆液进行洗 漆，洗漆完成后，ELISA板于36. 5-37. 5°C放置1-2小时；
[0118] 4)加待检样品，并且温育；加入步骤2)中的待检样品、W已知含量的铅-IgG馨合 物作标准品；用稀释缓冲液稀释待检样品稀释至相应倍数，即稀释10-40倍，加入微孔中， 37°C作用1-2小时；
[0119] 5)洗脱；移去待检样品，并用洗漆液进行洗漆，待洗漆完成后，用洗脱液洗脱1-3 小时。
[0120] 6)酸化；在步骤5)中的溶液中加入酸化剂对溶液进行酸化，封口过夜，彻底酸 化；
[012。 7)检测；加入过氧化氨，并且加热赶酸，并从ELISA试剂板中洗脱的溶液中取样， 于电感禪合等离子体质谱仪下检测馨合于IgG的铅，并绘制标准曲线，读出相应数值。
[0122] 该方法在利用ELISA原理的基础上，结合感禪合等离子体质谱（ICP-M巧原理，用 电感禪合等离子体质谱仪检测馨合于IgG上的铅，由于溶液中仅含有IgG,且所用试剂中不 含任何重金属（阴性对照组结果为阴性），不会对结果造成干扰，因而当所读取的结果显示 为阳性时，即可证明检测出IgG上馨合的金属铅。
[0123]方法四；提纯铅-IgG馨合物与酶联免疫结合法（提纯法+ELISA法）检测铅-IgG 馨合物，按照如下步骤检测：
[0124] 1)从全血中提取IgG;采用聚己二醇PEG沉淀法、超速离屯、、分子超滤、凝胶过滤等 方法采用全血提取法将血液的提纯出来的IgG复溶，得到IgG的复溶液；
[0125] 2)将抗pbAb包被于固相载体上；用稀释缓冲液稀释抗pbAb至500000-4000000 倍，加入ELISA板微孔中，4°C过夜16-18小时，或37°C水浴1-3小时，储存冰箱；
[0126] 3)封闭；移去稀释缓冲液，并用洗漆液进行洗漆，待洗漆完成后，加入W1% -5% 牛血清白蛋白或脱脂奶粉作为封闭液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用洗漆液进行洗 漆，洗漆完成后，ELISA板于36. 5-37. 5°C放置1-2小时；
[0127] 4)加待检样品，并且温育；从提取的IgG的复溶液中取样，作待检样品；W已知含 量的铅-IgG馨合物作标准品；用稀释缓冲液稀释相应倍数，即稀释10-40倍，加入微孔中， 37°C作用1-2小时；
[0128] 5)酶结合物温育：移去IgG的复溶液，并用洗漆液进行洗漆，待洗漆完成后，加入 用稀释缓冲液稀释的酶标抗体，使稀释的酶标抗体的浓度为2yg/ml，，37°C作用1-2小时， 使其与酶标抗体反应；
[0129] 6)底物温育；移去酶标抗体，并用洗漆液进行洗漆，待洗漆完成后，加入底物， 37°C避光作用30分钟；
[0130] 7)终止反应；滴加终止液至每一微孔；
[013。 8)取波长405nm，加完终止液后，将化ISA板置于酶标仪上分别读取待检样品和标 准品的0D值，通过绘制标准曲线，求得待检样品的含量（也可不使用酶标仪，直接通过染色 情况进行定性检测）。
[0132]方法节.；提纯铅-IgG馨合物与原子吸收光谱结合法（提纯法+AAS法）检测血样 中铅-IgG馨合物，按照如下步骤检测：
[0133] 1)从全血中提取IgG;采用聚己二醇PEG沉淀法、超速离屯、、分子超滤、凝胶过滤等 方法从全血提取法将血液的提纯出来的IgG复溶，得到IgG的复溶液；
[0134] 2)检测；从步骤1)中的复溶液中取样，于原子吸收光谱仪检测馨合于IgG上的 铅，并绘制标准曲线，读出相应数值。
[01巧]方法六；提纯铅-IgG馨合物与电感禪合等离子体质谱结合法（提纯法+ICP-MS法）检测铅-IgG馨合物，按照如下步骤检测：
[0136] 1)从全血中提取IgG;采用聚己二醇PEG沉淀法、超速离屯、、分子超滤、凝胶过滤等 方法从全血提取法将血液的提纯出来的IgG复溶，得到IgG的复溶液；
[0137] 2)酸化；从步骤1)中的复溶液中取样，在溶液中加入酸化剂（如硝酸）对溶液进 行酸化，封口过夜，彻底酸化；
[013引扣检测；加入过氧化氨，并且加热赶酸，并从相应溶液中取样，于电感禪合等离子 体质谱仪下检测馨合于IgG上的铅，并绘制标准曲线，读出相应数值。
[0139]方法韦：由泳与酶巧免疫法(电泳法-ELISA法）检测铅-IgG馨合物，按照如下步 骤检测：
[0140] 1)从全血中提取IgG;采用聚己二醇PEG沉淀法、超速离屯、、分子超滤、凝胶过滤等 方法从全血提取法将血液的提纯出来的IgG复溶，得到IgG的复溶液；
[0141] 2)制备胶床；根据需要选择琼脂糖凝胶或聚丙締酷胺凝胶或SDS-聚丙締酷胺凝 胶等作为介质，按照常规方法制备好相应胶床；
[0142] 3)加样；取步骤1)中的复溶液8uL加入2uL上样缓冲液，混匀，短暂离屯、；（注 意此处步骤不能煮）
[0143] 4)电泳；连接电泳板，进行电泳分离；
[0144] 5)检测；在胶床上找出含有铅的蛋白条带，将该条带取出，将该蛋白条带复溶，然 后再利用化ISA原理检测溶于液体中的铅含量。此外，还可W利用此方法检测馨合铅的IgG 的等电点、分子量及含量等。
[0145]方法八：电泳与原子吸收光谱法(电泳法-AAS法）检测铅-IgG馨合物，按照如下 步骤检测：
[0146] 1)从全血中提取IgG;采用聚己二醇PEG沉淀法、超速离屯、、分子超滤、凝胶过滤等 方法从全血提取法将血液的提纯出来的IgG复溶，得到IgG的复溶液；
[0147] 2)制备胶床；根据需要选择琼脂糖凝胶或聚丙締酷胺凝胶或SDS-聚丙締酷胺凝 胶等作为介质，制备好胶床；
[014引 3)加样；从步骤1)中的复溶液中取样，加入上样缓冲液，并混匀，然后加样于样品 槽中.
[0149] 4)电泳；连接电泳板，进行电泳分离；
[0150] W检测；在胶床上找出含有铅的蛋白条带，将该条带取出，将该蛋白条带复溶，然 后再利用AAS原理检测溶于液体中的铅含量。此外，还可W利用此方法检测馨合铅的IgG 的等电点、分子量及含量等。
[0151]方法力，：由威规合等离子体质谱结合法(电泳法-ICP-MS法）检测铅-IgG馨合 物，按照如下步骤检测：
[0152] 1)从全血中提取IgG;采用聚己二醇PEG沉淀法、超速离屯、、分子超滤、凝胶过滤等 方法从全血提取法将血液的提纯出来的IgG复溶，得到IgG的复溶液；
[0153] 2)制备胶床；根据需要选择琼脂糖凝胶或聚丙締酷胺凝胶或SDS-聚丙締酷胺凝 胶等作为介质，按照相应要求制备好相应胶床；
[0154] 3)加样；从步骤1)中的复溶液中取样，加入上样缓冲液，并混匀，然后加样于样品 槽中.
[0155] 4)电泳；连接电泳板，进行电泳分离；
[015引W检测；在胶床上找出含有铅的蛋白条带，将该条带取出，将该蛋白条带复溶，然 后再利用ICP-MS原理检测溶于液体中的铅含量。此外，还可W利用此方法检测馨合铅的 IgG的等电点、分子量及含量等。
[0157] 方法走至九中的IgG可W用多种方法提纯出来（例如超速离屯、法，高压液相层析 法，凝胶过滤层析法，凝胶电泳法，ELISA方法等），将提纯出来的IgG复溶，得到IgG的复溶 液，取一定量的IgG,利用电荷移动原理，进行电泳（electro地oresis，E巧，在凝胶板（可根 据需要采用不同介质）上可根据分子量、等电点等不同跑出不同的条带，寻找出富含铅的 相应条带，将凝胶中的蛋白质复溶，即可W在特定波长下检测相关IgG的含量，也可W利用 ELISA、AAS、ICP-MS等原理检测出馨合于IgG上的铅含量，由于溶液中仅含有IgG,且所用试 剂中不含任何重金属（阴性对照组结果为阴性），不会对结果造成干扰，因而当所读取的结 果显示为阳性时，即可证明检测出IgG上馨合的金属铅。
[015引蛮施但u;铅-IgG馨合物的制备方法，包括w下步骤：
[0159]A)铅与IgG的馨合反应；在人源的IgG中加入铅离子进行馨合反应，得到反应溶 液；
[0160] 试剂配制：
[0161] 1)棚酸盐缓冲液化01M);称取0. 31g棚酸溶于400ml超纯水中，用0. 1M的化0H 调节抑至9. 0,定容至500血。
[0162] 2) IgG溶液；称取4. OmgIgG溶于4. 0血0. 01M pH9. 0棚酸盐缓冲液中，充分振荡 溶解，配制成1. Omg/mL的蛋白溶液；
[0163] 3)5mmol/L邸TA+200mmol/LNaHC〇3溶液；称取邸TA.2H20 1.86g、NaHC〇3 16. 8g溶 于900血超纯水中，用l.OM化OH调整抑至8.0定容至1000ml，高压灭菌，室温保存；
[0164] 4HTCBE(购买自日本同仁化学研究所，货号M030)
[0165] 5)透析袋（截留分子量14000)炬ioshop Inc)
[0166] 制备步骤具体为：
[0167] 1)透析袋的处理；将透析袋放入500ml(根据烧杯体积可变换用量）体积的 5mmol/L邸TA+200mmo