用超临界流体从贝母花中提取贝母甲素的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及贝母总生物碱的提取，具体涉及用超临界流体从贝母花中提取贝母甲素的方法。
【背景技术】
[0002]贝母是百合科(ZiWaceae)贝母属{Fritillarii)植物，传统药用部位为其鳞莖，贝母主治伤寒烦热、咳嗽止气、安五脏、利骨髓、消痰润心肺，兼有消炎退肿、治疗痛疖肿毒等功效。1982年版《中药志》述:有“清热润肺、化痰止咳、散结功能等功效”，临床用于痰热咳嗽、脸色闷痰，治瘰疠和疮疡肿毒。贝母主要药用成份为贝母生物碱，包括贝母甲素、贝母乙素等，贝母生物碱具有自由基清除活性。目前从贝母中提取总生物碱的方法为传统的有机溶剂萃取，如公告号为CN1146425的发明专利，就公开了先将贝母用95%乙醇回流，加2%盐水溶解后，依次用石油醚、醋酸乙酯萃取多次，再用氯仿萃取，得到贝母总生物碱，然后再用硅胶柱层析贝母总生物碱，氯仿-甲醇洗脱，洗脱液浓缩后得到贝母甲素(C27H45NO3)13但传统方法萃取复杂，需反复萃取，萃取时间长，萃取效率低，且是以贝母鳞茎作为原料，而贝母花大多腐烂在田野中，得不到利用。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供一种提取简单、时间短、效率高的用超临界流体从贝母花中提取贝母甲素的方法。
[0004]本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:用超临界流体从贝母花中提取贝母甲素的方法，其步骤如下:
a、将当日摘取的鲜贝母花风干后粉碎，过45?60目筛，得到贝母花粉末，装入超临界萃取爸中；
b、在超临界萃取釜中，萃取温度为30?50°C，C(V流体压力为20?40MPa，夹带剂乙醇流速0.2?0.5ml/min,萃取时间I?3h，萃取物用甲醇吸收后得吸收液，其中10g贝母花粉末萃取后用20?30ml甲醇吸收；
C、吸收液用DlOl型大孔树脂层析柱层析，层析速度为每小时两个柱床体积流速，层析后先用蒸馏水洗层析柱，洗至流出液无色，然后用2个柱床体积的质量百分浓度50%乙醇洗层析柱，再用8个柱床体积的质量百分浓度95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱的洗脱液得到贝母花洗脱液，贝母花洗脱液在450?500Pa条件下减压浓缩30?50 min，得到浓缩液；
d、浓缩液用100目硅胶柱层析，每小时以4?6柱床体积流速用体积比17:2的乙酸乙酯-甲醇混合液洗脱，收集158?202 min洗脱液，浓缩干燥，得到白色的贝母甲素。
[0005]与现有技术相比，本发明的优点在于用超临界流体从贝母花中提取贝母甲素的方法，贝母花粉末在超临界萃取釜中，萃取温度为30?50°C，C(V流体压力为20?40MPa，夹带剂乙醇流速0.2?0.5ml/min，萃取时间I?3h，再用甲醇吸收，然后用大孔树脂层析柱层析，乙醇洗脱，95%乙醇洗脱的贝母花洗脱液减压浓缩30?50 min，浓缩后用100目硅胶柱层析，乙酸乙酯-甲醇混合液洗脱，收集158?202 min洗脱液，浓缩干燥，得到白色的贝母甲素。该方法步骤简单，提取时间缩短，提取效率较高，每公斤浙贝母花可以提取贝母甲素2.3克左右，且将贝母花充分利用，提高种植贝母的价值。
【具体实施方式】
[0006]以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
[0007]实施例1
将当日摘取的鲜贝母花(可以是浙贝母、川贝母等)风干后粉碎，过45?60目筛，得到贝母花粉末，称重50g，装入超临界萃取釜中，萃取温度为38°C，C(V流体压力为33MPa，夹带剂乙醇流速0.25ml/min，萃取时间2h，萃取物用10?15ml甲醇吸收后得吸收液，吸收液DlOl型大孔树脂层析柱层析，以每小时两个柱床体积流速用蒸馏水洗层析柱，洗至流出液无色，然后用2个柱床体积的质量百分浓度50%乙醇洗层析柱，再用8个柱床体积的质量百分浓度95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱的贝母花洗脱液，贝母花在450?500Pa条件下减压浓缩30?50 min,得到浓缩液，浓缩液用100目硅胶柱层析，每小时以4?6柱床体积流速用体积比17:2的乙酸乙酯-甲醇混合液洗脱，收集158?202 min洗脱液，浓缩干燥，得到白色的贝母甲素0.116克，采用超高效液相色谱法-蒸发光散射法测定含量，纯度达到99.17%ο
[0008]实施例2
与实施例1基本相同，所不同的只是萃取温度为30°C，C(V流体压力为20MPa，夹带剂乙醇流速0.20ml/min，萃取时间3h，萃取物用30ml甲醇吸收后得吸收液，得到白色的贝母甲素0.114克。
[0009]实施例3
与实施例1基本相同，所不同的只是萃取温度为50 °C，C(V流体压力为40MPa，夹带剂乙醇流速0.50ml/min，萃取时间lh，萃取物用20ml甲醇吸收后得吸收液，得到白色的贝母甲素0.113克。
【主权项】
1.用超临界流体从贝母花中提取贝母甲素的方法，其特征在于步骤如下: a、将当日摘取的鲜贝母花风干后粉碎，过45?60目筛，得到贝母花粉末，装入超临界萃取爸中； b、在超临界萃取釜中，萃取温度为30?50°C，C(V流体压力为20?40MPa，夹带剂乙醇流速0.2?0.5ml/min,萃取时间I?3h，萃取物用甲醇吸收后得吸收液，其中10g贝母花粉末萃取后需用20?30ml甲醇吸收； C、吸收液用DlOl型大孔树脂层析柱层析，层析速度为每小时两个柱床体积流速，层析后先用蒸馏水洗层析柱，洗至流出液无色，然后用2个柱床体积的质量百分浓度50%乙醇洗层析柱，再用8个柱床体积的质量百分浓度95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱的洗脱液得到贝母花洗脱液，贝母花洗脱液在450?500Pa条件下减压浓缩30?50 min，得到浓缩液； d、浓缩液用100目硅胶柱层析，每小时以4?6柱床体积流速用体积比17:2的乙酸乙酯-甲醇混合液洗脱，收集158?202 min洗脱液，浓缩干燥，得到白色的贝母甲素。2.如权利要求1所述的用超临界流体从贝母花中提取贝母甲素的方法，其特征在于步骤b中，萃取温度为38°C，C(V流体压力为33MPa，夹带剂乙醇流速0.25ml/min，萃取时间2h。3.如权利要求1所述的用超临界流体从贝母花中提取贝母甲素的方法，其特征在于步骤b中，萃取温度为30°C，C(V流体压力为20MPa，夹带剂乙醇流速0.20ml/min,萃取时间3h。
【专利摘要】本发明公开了用超临界流体从贝母花中提取贝母甲素的方法，贝母花粉末在超临界萃取釜中，萃取温度为30～50℃，CO2流体压力为20～40MPa，夹带剂乙醇流速0.2～0.5ml/min，萃取时间1～3h，再用甲醇吸收，然后用大孔树脂层析柱层析，乙醇洗脱，95%乙醇洗脱的贝母花洗脱液减压浓缩30～50min，浓缩后用100目硅胶柱层析，乙酸乙酯-甲醇混合液洗脱，收集158～202min洗脱液，浓缩干燥，得到白色的贝母甲素。该方法步骤简单，提取时间缩短，提取效率较高，每公斤浙贝母花可以提取贝母甲素2.3克左右，且将贝母花充分利用，提高种植贝母的价值。
【IPC分类】C07J71/00
【公开号】CN105218619
【申请号】CN201510676692
【发明人】王强, 戴永峰
【申请人】浙江大学宁波理工学院
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年10月20日