红螯螯虾抗脂多糖因子及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及红馨馨邮，尤其是设及红馨馨邮抗脂多糖因子及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 红馨馨邮烟lerax qua化icarinatus)又名澳洲淡水龙邮，来源于澳大利亚，是世 界最名贵的淡水经济邮种之一。红馨馨邮由于食性很广，生长快，肉质细嫩，味道鲜美，营养 丰富，自1992年引进我国后，颇受消费者欢迎。但在养殖过程中该邮也经常受病害影响，提 高其抗病力是目前研究的重点。
[0003]与脊椎动物相比，作为无脊椎动物一员的甲壳动物只能通过先天免疫系统抵御外 界病原微生物的侵染W，而先天免疫系统由细胞免疫和体液免疫组成。在体液免疫中，一些 具有免疫功能的效应分子参与免疫反应，如抗菌肤（AntimicrobialP巧tides,AMPs)、凝集 素和补体系统蛋白等W，其中抗菌肤是体液免疫的重要的效应分子。抗菌肤是一种具有广 谱抗菌活性的小分子多肤，广泛存在于生物体内?，目前从甲壳动物中鉴别的抗菌肤主要 包括：邮青素（Penaeidin) [4'5'6]，甲壳肤（Crustin) [7'8'9]，溶菌酶（Xysozyme)和抗脂多糖因 子（ALF) 等。抗脂多糖因子是水生甲壳动物重要的免疫因子，对抗脂多糖因子的研 究有助于深入探索无脊椎动物免疫防御机制，并且将抗脂多糖因子作为饲料添加剂在水产 养殖业具有广阔的应用前景。
[0004] 体外重组表达抗脂多糖因子不仅在研究红馨馨邮免疫防御机制方面具有重要意 义，而且为研发抗病原微生物药物提供参考依据。 阳00引参考文献：
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【发明内容】
[0019] 本发明的目的在于提供红聲聲邮抗脂多糖因子的基因序列。
[0020] 本发明的第二目的在于提供红聲聲邮抗脂多糖因子的氨基酸序列。
[0021] 本发明的第兰目的在于提供红聲聲邮抗脂多糖因子的制备方法。
[0022] 本发明的第四目的在于提供红聲聲邮抗脂多糖因子的应用。
[0023] 所述红聲聲邮抗脂多糖因子命名为Cq-ALF。
[0024] 所述红聲聲邮抗脂多糖因子Cq-ALF的基因序列为：
[0025]
[0028] 所述红馨馨邮抗脂多糖因子Cq-ALF的制备方法包括W下步骤：
[0029] 1)构建Cq-ALF重组表达载体；
[0030] 2)将步骤1)所得的重组表达载体转化宿主细胞，并对宿主细胞进行诱导表达，获 得表达产物；
[0031] 3)分离纯化步骤2)所得的表达产物，获得重组蛋白，即Cq-ALF。
[0032] 在步骤1)中，所述表达载体可选用pPICZaA等。
[0033] 在步骤2)中，所述宿主细胞可选用毕赤酵母等。
[0034] 在步骤3)中，所述表达产物可先进行透析，再进行亲和层析。
[0035] 所述红馨馨邮抗脂多糖因子Cq-ALF对多种病原菌和对邮白斑综合征病毒（WSSV) 具有明显的抑杀活性，因此红馨馨邮抗脂多糖因子Cq-ALF可在制备抗微生物药物和作为 水产养殖业中防治病害的饲料添加剂中应用。
[0036] 本发明在分离得到Cq-ALF的基础上，根据Cq-ALF基因序列特征成功构建重组表 达载体并在毕赤酵母系统中表达并纯化获得重组Cq-ALF蛋白，该重组蛋白具有广谱抗菌 活性和较强的抗WSSV活性。研究结果表明，Cq-ALF是一种重要的先天