新颖噬菌体和包括所述新颖噬菌体的抗细菌组成物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种具有针对肠毒性大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli ;ETEC)的特异性杀菌活性的新颖噬菌体以及包括所述新颖噬菌体的抗细菌组成物。 另外，本发明涉及一种使用所述新颖噬菌体或所述抗细菌组成物来预防或治疗动物疾病的 方法。
【背景技术】
[0002] 大肠杆菌（下文称为"大肠杆菌（E. coli) "）是一种属于埃希氏菌属 (Escherichia)和肠杆菌科（Enterobacteriaceae)的革兰氏阴性（Gram-negative)、短杆 状细菌，并且是存在于各种动物（包含哺乳动物）的肠中的正常菌丛中的一种。已知大部 分大肠杆菌的菌株是非致病性的并且可能导致机会性感染，但一些高度致病性菌株在动物 (包含人类）中导致多种肠疾病和败血症。
[0003] 大肠杆菌的实例可以包含肠毒性大肠杆菌（ETEC)、致肠病大肠杆菌 (enteropathogenic Ε· coli ;EPEC)、肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic E. coli ； EHEC)、肠聚集性大肠杆菌（enteroaggregative E. coli ;EAEC)、肠侵袭性大肠杆菌 (enteroinvacive E.coli;EIEC)、产坏死性大肠杆菌（necrotoxigenic E.coli;NTEC)等 等。已知在以上各种中，ETEC尤其在猪体内导致与大肠杆菌相关联的传染病。
[0004] 当前，随着在猪肉行业中大量的猪被集体地饲养，猪中的大肠杆菌病 (colibacillosis)已经作为最频繁并且棘手的疾病而成为焦点（非专利文献1)。最近，猪 大肠杆菌病的发生率在韩国（Korea)已经增加，其已经由于腹泻而导致幼龄猪的生长迟缓 和死亡，从而导致农民的巨大经济损失（非专利文献2)。
[0005] 为了预防和治疗猪体内的大肠杆菌病，在现有技术中已经向猪投予多种抗生素， 但当抗生素被误用或滥用时，误用或滥用的抗生素可能产生抗药性并且残留在猪体内。因 此，当前，抗生素的使用已经在全世界受到限制（非专利文献3)。
[0006] 同时，噬菌体是一种仅感染并且破坏细菌，并且可以仅在宿主细菌内自我复制的 特定病毒类型。噬菌体与抗生素相比具有强宿主特异性，并且最近，针对抗生素的菌株耐受 性的出现问题较为严重，以使得对噬菌体的实际使用的兴趣已经增加（非专利文献4和非 专利文献5)。
[0007] 因此，对噬菌体的研究已经在全世界的多个国家中积极地进行，并且除了针对噬 菌体的专利申请之外，获得对含有噬菌体的组成物的食品和药物管理局（Food and Drug Administration ;FDA)批准的尝试已经逐渐增多。
[0008] 作为噬菌体的现有技术，专利文献1中已经公开7种用于控制大肠杆菌0157 : Η的菌体，并且专利文献2中已经公开一种具有针对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)的特异性杀菌活性的噬菌体。此外，专利文献3中已经公开衍生自特异性地破坏细 菌细胞膜的肽聚糖结构的噬菌体的溶解蛋白，以及由所述溶解蛋白产生的细菌溶解物。
[0009] 然而，尽管存在以下现有技术，但与噬菌体相关联的用于预防和/或治疗由ETEC 导致的传染病（其在家畜行业，包含猪肉行业中仍然是重要的问题）的技术仍然不充足，以 使得应该开发菌体和与·菌体相关联的技术。
[0010][现有技术文献]
[0011] [专利文献]
[0012] (专利文献1)美国专利第6, 485, 902号
[0013] (专利文献2)韩国专利登记号10-0910961 B1
[0014] (专利文献3)韩国专利特许公开公开号10-2009-0021475 A
[0015] [非专利文献]
[0016] (非专利文献 1)朴杨 II (Young II Park)，猪伺养科学（Swine production science)，先进出版集团（Sunjin Publishing group)，353-359,1998
[0017] (非专利文献2)洪欧澈（Eu Chul Hong)，硕士毕业论文，檀国大学（Dankook University)，卵黄在早期断奶仔猪中的加成作用（Addition Effect of Egg Yolk in Early Weaned Piglets),2001
[0018] (非专利文献3)梅森HS (Mason HS)等人，生物技术趋势（Trends in Biotech)， 13 :388-392,1995
[0019] (非专利文献4)西斯罗M(CisloM)等人，免疫与治疗学实验文献（Arch. Immunol. Ther. Exp.) 2 :175-183,1987 免疫与治疗学实验文献 2 :175-183,1987
[0020] (非专利文献5)金胜励（Sung Hun Kim)等人，菌体，新颖替代抗生素 (Bacteriophage, novel alternative antibiotics)，生物波（Bio Wave)第 7 卷第 15 期， 2005, BRIC
【发明内容】
[0021] 技术问题
[0022] 本发明人进行了研究以便解决如在使用抗生素之后出现的耐受性细菌、残留 在肉中的抗生素等等的问题，并且有效地预防和治疗由致病性大肠杆菌导致的传染病， 并且因此，本发明人从自然中分离出了具有针对ETEC的特异性杀菌活性的新型噬菌体 ?CJ20(KCCM11362P) 〇
[0023] 另外，本发明人鉴别了新颖噬菌体的形态、生物化学以及遗传特征，并且确认了所 述噬菌体具有极好的耐酸性、耐热性等等，从而使用所述新颖噬菌体开发抗生素、消毒剂、 饲料添加剂以及其它组成物。此外，本发明人开发了一种用于预防或治疗由大肠杆菌导致 的传染病的组成物，和使用所述组成物预防或治疗所述疾病的方法。
[0024] 本发明提供一种具有针对ETEC的特异性杀菌活性的新颖噬菌体 ?CJ20(KCCM11362P) 〇
[0025] 另外，本发明提供一种用于预防和/或治疗由ETEC导致的传染病的组成物，其含 有噬菌体c&CJ20(KCCM11362P)作为活性成分。
[0026] 此外，本发明提供一种含有噬菌体?CJ20(KCCM11362P)作为活性成分的抗生素、 饲料添加剂、饮用水添加剂、消毒剂或清洁剂。
[0027] 此外，本发明提供一种使用噬菌体Φ CJ20 (KCCM11362P)或含有噬菌体 ?CJ20(KCCM11362P)作为活性成分的组成物来预防和/或治疗除人类以外的动物的由 ETEC导致的传染病的方法。
[0028] 问题的解决方案
[0029] 根据本发明的一个示范性实施例，提供一种具有针对肠毒性大肠杆菌（ETEC)的 特异性杀菌活性的新颖噬菌体〇CJ20(KCCM11362P)。
[0030] 根据本发明的另一个示范性实施例，提供一种用于预防或治疗由ETEC导致的传 染病的组成物，所述组成物含有如上文所描述的噬菌体?CJ20(KCCM11362P)作为活性成 分。
[0031] 根据本发明的另一个示范性实施例，提供含有如上文所描述的噬菌体 Φ CJ20 (KCCM11362P)作为活性成分的抗生素、饲料添加剂、饮用水添加剂、消毒剂或清洁 剂。
[0032] 根据本发明的另一个示范性实施例，提供一种预防或治疗由ETEC导致的传染病 的方法，其包括向除人类以外的动物投予如上文所描述的噬菌体?CJ20(KCCM11362P)或 含有噬菌体?CJ20作为活性成分的组成物。
[0033] 本发明的有利作用
[0034] 根据本发明的噬菌体?CJ20(KCCM11362P)具有特异性地杀死肠毒性大肠杆菌 (ETEC)的作用。
[0035] 另外，根据本发明的噬菌体?CJ20 (KCCM11362P)具有极好的耐酸性和耐热性，以 使得噬菌体Φ CJ20 (KCCM11362P)可以用作用于在各种温度或pH范围中预防或治疗由ETEC 导致的传染病的物质并且用作抗生素、饲料添加剂、饮用水添加剂、消毒剂、清洁剂等等。
[0036] 此外，根据本发明，由ETEC导致的传染病可以通过向除人类以外的动物投予噬菌 体?CJ20(KCCM11362P)或含有噬菌体?CJ20(KCCM11362P)作为活性成分的组成物加以预 防或治疗。
【附图说明】
[0037] 图1是新颖噬菌体〇CJ20 (KCCM11362P，下文称作" 〇CJ20"）的电子显微镜照片。
[0038] 图2示出新颖菌体C>CJ20的脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrophoresis ;PFGE)的结果。
[0039] 图3示出新颖菌体C>CJ20的十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳（sodiumd odecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis ;SDS_PAGE)结果。
[0040] 图4是示出新颖噬菌体?CJ20的耐酸性测试结果的曲线图。
[0041] 图5是示出新颖噬菌体?CJ20的耐热性测试结果的曲线图。
【具体实施方式】
[0042] 在下文中，将对本发明进行详细描述。因为所属领域或类似领域的技术人员可以 充分认识和推断出本说明书中未描述的内容，所以将省略其描述。
[0043] 详细地说，一个大体方面，本发明提供一种具有针对肠毒性大肠杆菌（ETEC)的特 异性杀菌活性的新颖噬菌体〇CJ20(KCCM11362P)。
[0044] 革兰氏阴性、杆状细菌ETEC是好氧或兼性厌氧的细菌，其分解乳糖或果糖以产生 酸和气体。ETEC在通用培养基中良好地生长并且可以在约7°C到48°C下生长，并且最佳生 长温度是约35°C到37°C。另外，ETEC可以在4. 5到9的pH范围中生长。
[0045] 因为ETEC产生类似于霍乱弧菌（Vibrio cho