一种茶皂苷提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种由山茶科植物中提取的三萜皂苷类化合物，本发明同时涉及所述 三萜皂苷类化合物在制备抗炎和降血脂保健食品或药品中的应用，属生物医药领域。 技术背景
[0002] 茶科山茶属（Camellia)植物广泛分布于中国南方丘陵地区及其他东南亚国家， 在中国已有两千多年的种植历史。茶叶是中国著名特产。此外，山茶属植物种子中可以榨 油，获得的茶油不饱和脂肪酸含量高达90%，具有很高的营养价值；榨除茶油的茶籽饼柏 中特有的茶皂苷含量在10%左右。从山茶属植物种子、根、花蕾、叶中也发现了种类丰富的 茶皂苷。这些茶皂苷具有杀菌、抗肿瘤、杀虫、抗氧化、降血脂、溶血等多种药理作用，可应用 于药品、植物保护、水产养殖、日用化工等广泛领域[李夏，油茶根化学成分研究（II)，苏州 大学硕士学位论文，2014]。山茶属植物资源的综合开发利用近年来受到广泛关注和重视。
[0003] 茶皂苷是一类结构相似的复杂三萜皂苷类同系物。一般其苷元均为齐墩果酸型， 苷元上有3-5个羟基取代，其中1-2个羟基上与当归酸、惕各酸、乙酸、肉桂酸等有机酸成 酯；3-寡糖链取代基一般由2-4个糖基组成，主要糖基种类主要包括葡萄糖醛酸、半乳糖、 葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖等。这些取代基团的数量、种类、连接方式众多，因而不同植 物原料来源的市售茶皂苷均为成分组成未知的混合总皂苷。另一方面，由于天然的茶皂苷 含有多种取代酯基，其水溶性较弱，这阻碍了该提取物的进一步推广应用；采用物理和化学 改性茶皂苷的方法，是拓展其应用范围的研究热点之一[宋冰蕾，脱酯基茶皂素的制备与 性能，生物质化学工程，2011，45 (5)，8-10 ;钱伟，茶皂素改性衍生物制备与应用研究进展， 经济林研究，2012, 30 (4)，168-173]。
[0004] 针对现有茶皂苷产品组成复杂、质量难以控制的缺陷，发明人根据其结构特性，设 计采用碱水解法选择性脱去茶皂苷中的酯基，并结合大孔树脂、反相硅胶等柱层析制备技 术，以期获得化学组成稳定、质量可控的茶皂苷新产品。通过深入研究和大量实验，最终成 功获得目标茶皂苷产品，从而完成了本发明。
【发明内容】
[0005] 本发明提供一种如式（I)所示三萜皂苷类化合物：
[0006]
[0007] 其药学上可接受的盐，其水合物，其药物前体，或上述任一种的溶剂合物及其组合 物，特征在于其中：
[0008] 札选自CHO、CHAH或CH3;R2选自Η或OH;R3选自a-L-吡喃阿拉伯糖、β-D-吡 喃木糖、a-L-吡喃鼠李糖、β-D-吡喃葡萄糖、β-D-吡喃半乳糖中的任意1-2个糖基。
[0009] 具体地，私选自任意2个通过（2 - 1)苷键连接的糖基。例如，R3可选 自：3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-(2 - 1) -β-D-吡喃葡萄糖基，3-0-a-L-吡喃阿拉伯 糖-(2 - 1)-β-D-吡喃半乳糖基，3-0-α-L-吡喃阿拉伯糖-(2 - 1)-β-D-吡喃 木糖基，3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-(2 - 1) -a-L-吡喃鼠李糖基，3-0-β-D-吡喃半 乳糖-(2 - 1)-β-D-吡喃葡萄糖基，3-0-β-D-吡喃半乳糖-(2 - 1)-β-D-吡喃 半乳糖基，3-〇-i3-D-吡喃半乳糖-(2 -l)-i3-D-吡喃木糖基，3-〇-i3-D-吡喃半乳 糖-(2 - 1) -a-L-吡喃阿拉伯糖基，3-0-β-D-吡喃半乳糖-(2 - 1) -a-L-吡喃鼠李糖基 中的任意一种寡糖基。
[0010] 本发明同时提供一种如式（I)所示三萜皂苷类化合物及其组合物的制备方法，包 括以下步骤：
[0011] (1)选取山茶属植物原料，采用水、醇或含水-醇混合溶媒进行提取，浓缩，过滤， 提取液加适量水稀释，过滤，上大孔树脂柱进行吸附，先用水洗，再用30-95%乙醇洗脱，收 集30-95 %洗脱液，浓缩，干燥，得茶皂苷提取物CSA;
[0012] (2)由⑴所得茶皂苷提取物CSA，溶解于pH10-13溶液中，水解反应2-8小时，用 酸调节pH至4-7,加适量水稀释，上大孔树脂柱，依次用水、60-95 %乙醇洗脱，收集60-95% 乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得茶皂苷提取物CSB;
[0013] (3)由（2)所得茶皂苷提取物CSB，采用反相硅胶柱层析技术分离，得所述三萜皂 苷化合物及其组合物。
[0014] 本发明所述三砲阜苷类化合物及其组合物主要存在于山茶科山茶属（Camellia) 植物中，可由天然植物中获得。所述步骤（1)中植物可选自茶（Camelliasinensis)、油 茶（Camelliaoleifera)、山茶（Camelliajaponica)、阿萨姆茶（Camelliasinensisvar assamica)、茶梅（Camelliasasanqua)中的任意一种；所述原料选自其种子、花、叶、根的 任意一个或多个部位；其制备方法可参考已知文献进行。制备步骤（2)为碱水解工艺，其方 法可参考败酱皂苷碱水解工艺进行[陆昊等，败酱皂苷对照品制备工艺研究，中国现代中 药，2015,17 (6)，583-586];所述CSB含有所述三萜皂苷类化合物的组合物，并可根据需要， 采用文献公开的膜处理法进行进一步精制[赵敬娟等，茶皂素膜滤分离纯化放大实验，茶 叶通讯，2012, 39 (3)，22-26 ;徐国念等，生物法提取纯天然茶籽油联产茶皂素工艺研究，化 学与生物工程，2013, 30 (7)，64-66]。制备步骤（3)对CSB中所述三萜皂苷类化合物及其组 合物纯化，采用的反相硅胶优选反相碳十八填料，采用的洗脱剂优选甲醇溶液，柱层析技术 优选中压和高压制备色谱，获得的三萜皂苷化合物及其组合物纯度一般大于80%。
[0015] 本发明进一步提供一种如式（I)所示三萜皂苷类化合物及其组合物的制备 方法，其中所述制备步骤（1)中山茶属植物原料选自油茶种子，制备步骤（2)中CSB 含有所述三萜皂苷类化合物的组合物，所述化合物中R3选自：3-0_a-L-吡喃阿拉伯 糖-(2 - 1)-β-D-吡喃葡萄糖基，3-0-β-D-吡喃半乳糖-(2 - 1)-β-D-吡喃葡 萄糖基，3-0-β-D-吡喃半乳糖-(2 - 1) -β-D-吡喃半乳糖基，3-0-β-D-吡喃半乳 糖-(2 - 1) -a-L-吡喃阿拉伯糖基，3-0-β-D-吡喃半乳糖-(2 - 1) -β-D-吡喃木糖基中 的任意一种寡糖基。特别地，CSB中含有油茶皂苷2a，其含量大于10%。
[0016] 本发明进一步提供一种如式（I)所示三萜皂苷类化合物及其组合物的制备方法， 其中所述制备步骤（1)中山茶属植物原料选自油茶根，制备步骤（2)中CSB含有所述三萜 皂苷类化合物的组合物，所述化合物中R3选自：3-0-β-D-吡喃半乳糖-(2 - 1) -a-L-吡 喃阿拉伯糖基，3-0-β-D-吡喃半乳糖-(2 - 1)-β-D-吡喃木糖基中的任意一种寡糖基。 特别地，CSB中含有油茶皂苷4a和4b，二者含量总和大于20%。
[0017] 本发明进一步提供一种如式（I)所示三萜皂苷类化合物及其组合物的制备 方法，其中所述制备步骤（1)中山茶属植物原料选自茶种子，制备步骤（2)中CSB含 有所述三萜皂苷类化合物的组合物，所述化合物中R3选自：3-0-α-L-吡喃阿拉伯 糖-(2 - 1) -β-D-吡喃葡萄糖基，3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-(2 - 1) -β-D-吡喃木糖基， 3-0-a-L-吡喃阿拉伯糖-(2 - 1) -a-L-吡喃鼠李糖基中的任意一种寡糖基。特别地，CSB 中含有茶皂苷5a、5b和5c，三者含量总和大于20%。
[0018] 本发明采用碱水解方法脱去茶皂苷中的酯基，结合大孔树脂、反相硅胶等柱层析 制备技术，首次研制出组分新颖的茶皂苷提取物，提取物中组分的化学组成稳定、质量可 控、纯度高，水溶性等理化性质得到显著改善，所述制备工艺简洁、可控，容易实现放大生 产。
[0019] 本发明同时提供含有本文所述式（I)三萜皂苷类化合物及其组合物，在制备抗炎 或降血脂保健食品或药品中的应用。本发明所述茶皂苷提取物对试验动物模型具有显著的 抗炎、降血脂作用，因而可应用于制备治疗炎症和高脂血症相关的功能食品和药品。所述茶 皂苷提取物与现有技术相比，化学成