11^11后，在温度为30°(3的水中不负重游泳9〇1^11， 休息60min后摘眼球采血0.5mL (不加抗凝剂），置4°C冰箱3h，血凝固后2000r/min离心 15min，取血清送宁夏医科大学附属医院检验科检测。
[0118] 6.3肝糖原的测定末次给药3〇11^11后，在温度为25±1°(3的水中不负重游泳9〇1^11， 颈椎脱臼处死小鼠，用生理盐水洗净，并用滤纸吸干水分后，准确称取肝脏l〇〇mg，肝糖原检 测试剂盒检测小鼠肝糖原含量。
[0119] 6.4血乳酸的测定末次给药30min后采血，然后不负重在温度为30°C的水中游泳 lOmin后停止。乳酸仪测定方法:分别在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20yL加 入40yL破膜液中，立即充分振荡破碎细胞用乳酸仪测定。（血乳酸曲线下面积=5X游泳前 血乳酸值+3 X游泳后Omin的血乳酸值+2 X游泳后20min的血乳酸值）
[0120] 7.观察指标负重游泳时间，血乳酸、尿素、肝糖原值
[0121] 8.统计方法实验数据用x±s表示，采用t检验进行组间比较
[0122] 9.实验结果
[0123] 9.1本发明蜂王胎保健酒对小鼠体重的影响
[0124] 各组小鼠在给予G1~G5药物后，前、中，后期体重分别见下表所示，各组小鼠的初 始体重和增重体重与对照组比较均无统计学差异(P>〇.05)，表明G1~G5药物均无明显的 毒性。实验结果详见表2。
[0125] 表2负重游泳实验小鼠的初始体重、中期体重和结束体重±S )
[0126]
[0127]
[0128] 9.2本发明蜂王胎保健酒对小鼠负重游泳时间的影响
[0129] 经口给予小鼠 G1~G5药物后，G1~G2药物与空白对照组比较，可以明显延长小鼠 负重游泳时间，具有显著性差异(P<〇.05)，本发明蜂王胎保健酒G3~G5药物与空白对照组 比较，可以显著延长小鼠负重游泳时间，具有极显著性差异(P<〇.01)，且明显优于G1~G2 药物。结果详见表3。
[0130] 表3蜂王胎保健酒对小鼠负重游泳时间的影响士.、_)
[0131]
[0132] "*"p〈0.05vs 空白对照；
[0133] "**"？〈0.01￥8空白对照；
[0134] 9.3本发明蜂王胎保健酒对小鼠运动前后血乳酸的影响
[0135] 经口给予小鼠本发明的蜂王胎保健酒后，本发明蜂王胎保健酒G3~G5药物对小鼠 运动后血乳酸曲线下面积与对照组比较有统计学差异(P<〇.05)，G1~G2药物组小鼠血乳 酸曲线下面积与对照组比较虽有所降低，但并无统计学差异(P>〇.05)。结果见表4。
[0136] 表4本发明蜂王胎保健酒对小鼠运动前后血乳酸水平的影响^ )
[0137]
[0138] "*"p〈0.05vs 空白对照；
[0139 ] 9.4本发明蜂王胎保健酒对小鼠肝糖原的影响
[0140] 经口给予小鼠 G1~G5药物后，G1~G2药物与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均 有明显的升高，具有显著性差异(P<〇.05)，本发明蜂王胎保健酒G3~G5药物与与空白对照 组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有极显著性差异(P<〇.01)，且明显优于G1~ G2药物。结果详见表5。
[0141] 表5本发明蜂王胎保健酒对小鼠肝糖原含量的影响
[0142]
[0143] "*"p〈0.05vs 空白对照；
[0144] "**"？〈0.01￥8空白对照；
[0145] 9.5本发明蜂王胎保健酒对小鼠血清尿素的影响
[0146] 经口给予小鼠 G1~G5药物后，G1~G2药物组与空白对照组比较，小鼠运动后血清 尿素含量均有明显的降低，具有显著性差异(P<〇.05)，本发明蜂王胎保健酒G3~G5药物与 与空白对照组比较，小鼠运动后血清尿素含量均有明显的降低，具有极显著性差异（P< 0.01)，且明显优于G1~G2药物。结果详见表6。
[0147] 表6本发明蜂王胎保健酒对小鼠血清尿素含量的影响(λ-二s )
[0148]
[0149] "*"p〈0.05vs 空白对照；
[0150] "**"p〈0.01vs 空白对照；
[0151] 10.实验结论
[0152] 本实验主要通过小鼠负重游泳实验，同时检测小鼠肝糖原的储备来观察本发明蜂 王胎保健酒提高免疫力、抗疲劳的效果。初步研究结果显示如下：
[0153] 1、本发明G3~G5蜂王胎保健酒均能延长小鼠负重游泳时间（P<0.01)，且效果明 显优于其它G1~G2的蜂王胎保健酒。
[0154] 2、生化检测方面显示，本发明G3~G5蜂王胎保健酒各剂量组均能减少运动后小鼠 血清中葡萄糖无氧酵解所产生的乳酸含量，与对照组比较有显著性差异(P<〇.05)，而其它 G1~G2的蜂王胎保健酒虽然也能减少运动后小鼠血清中葡萄糖无氧酵解所产生的乳酸含 量，但与对照组比较，无统计学差异(P>〇.05);
[0155] 3、本发明G3~G5蜂王胎保健酒各剂量组均能显著提高小鼠肝脏中糖原的储备(P <0.01)，且效果明显优于其它G1~G2的蜂王胎保健酒；
[0156] 4、高尿酸模型发现，本发明G3~G5蜂王胎保健酒能显著降低小鼠游泳后血清中尿 素的含量(P<〇.01)，且效果明显优于其它G1~G2蜂王胎保健酒；
[0157] 11.结论
[0158]上述实验证明本发明蜂王胎保健酒能显著提高机体免疫力，提高小鼠的体力和耐 力，降低小鼠运动后血清中尿素及乳酸的含量，且能显著提高小鼠肝脏中糖原的储备，有助 于缓解运动负荷引起的疲劳;能延长小鼠负重游泳至力竭的时间。
【主权项】
1. 一种蜂蛹虫保健酒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 将新鲜蜂王胎或雄蜂蛹与离子溶液按质量比1:0.5-1.5混合，于-18--22°c冷冻20-30min，破碎，破碎率为98-100%，破碎物粒径200-300μπι，用乳酸调节破碎物pH值为5-7，升 温至40-50°C，向其中加入新鲜蜂王胎或雄蜂蛹质量0.10-0.18 %的复合酶，混合均匀，于真 空度-0.07-0.09MPa脱气脱腥10-15min，静置，继续酶解10-15min得到酶解液； 所述复合酶质量组成为:风味蛋白酶:酸性蛋白酶:脂肪酶=2-4:1-3:0.3-0.5; 2) 将酶解液置真空离心机中5000-7000r/min真空离心8-10min，自上而下分离得到游 离脂肪、乳状液、水解液和残渣，将得到的乳状液控制温度为45-55°C，添加乳状液质量 0.08-0.12%的生物破乳剂破乳20_40min，破乳后于4000-6000r/min真空离心2次，间隔时 间l-3h，每次离心10-15min，合并三次离心得到的水解液，取其质量0.2-0.4 %的蛋清，放入 搅拌机中于转速800-1000r/min搅拌10-12min,直至蛋清全部成为泡沫得到蛋清泡沫，将蛋 清泡沫加入合并得到的水解液中，常压煮沸5-8min,降至室温，于5000-7000r/min真空离心 8-10min，收集水解液，依次经硅藻土过滤、超滤即得透明、稳定的蜂王胎或雄蜂蛹水解液； 3) 取蜂王胎或雄蜂蛹水解液质量1-3倍的基酒，向其中加入过氧乙酸溶液，使过氧乙酸 浓度为400-480ppm，均匀混合，于功率200-400W，频率30-40KHZ条件下进行超声波处理5-lOmin，经处理的基酒与蜂王胎或雄蜂蛹水解液均匀混合，控制混合料液温度为25-35°C，然 后通过连续式高压脉冲处理室处理，静置、过滤即得蜂王胎或雄蜂蛹保健酒。2. 如权利要求1所述的蜂蛹虫保健酒的制备方法，其特征在于，步骤1)所述离子溶液为 含有钠离子25-30mg/L、锌离子17-22mg/L、钾离子15-20mg/L、钙离子12-14mg/L和镁离子9-llmg/L的水溶液。3. 如权利要求1所述的蜂蛹虫保健酒的制备方法，其特征在于，步骤2)所述真空离心条 件为温度6-10°C、真空度-0 · 02-0 · 04MPa。4. 如权利要求1所述的蜂蛹虫保健酒的制备方法，其特征在于，步骤2)所述生物破乳剂 为糖脂类、脂肽类、胞壁结合类生物破乳剂中的一种或几种组合。5. 如权利要求4所述的蜂蛹虫保健酒的制备方法，其特征在于，所述生物破乳剂的质量 组成为:糖脂类:脂肽类:胞壁结合类=5-7:4-6:2-4。6. 如权利要求5所述的蜂蛹虫保健酒的制备方法，其特征在于，所述糖脂类生物破乳剂 为鼠李糖脂、烷基糖苷中的一种或两种组合;所述糖脂类生物破乳剂的质量组成为：鼠李糖 月旨:烷基糖苷= 3-5:1-2。7. 如权利要求1所述的蜂蛹虫保健酒的制备方法，其特征在于，步骤3)所述基酒为40-60度白酒。8. 如权利要求1所述的蜂蛹虫保健酒的制备方法，其特征在于，步骤3)所述过氧乙酸溶 液的质量百分比浓度为10-30%。9. 如权利要求1所述的蜂蛹虫保健酒的制备方法，其特征在于，步骤3)所述高压脉冲电 场处理条件为电场强度25_30kV/cm、脉冲数40-50。10. 如权利要求1-9任一制备方法制得的蜂蛹虫保健酒。
【专利摘要】本发明公开了一种蜂蛹虫保健酒，以蜂王胎或雄蜂蛹为唯一原料，全程采用冷冻、真空脱气、复合酶生物酶解、真空离心、生物破乳、超声处理、高压脉冲电场处理等低温加工技术，有效提高了蜂王胎或雄蜂蛹的利用率，降低了营养及保健物质的损失。将超声波和过氧乙酸有机结合催陈基酒，与蜂王胎或雄蜂蛹水解液科学复配，再次采用高压脉冲催陈，既防止了过氧乙酸对蜂王胎水解液生物活性成分的氧化，又提高了蜂王胎酒的陈华效果，提高了蜂王胎或雄蜂蛹酒的口感、稳定性和澄清度。最终制得一种无虫腥味、稳定性强、口感协调、醇厚、柔和、绵长，风味适宜、生物活性物质和营养价值高、保健功效好的澄清透明的蜂王胎或雄蜂蛹保健酒。
【IPC分类】C12G3/04
【公开号】CN105441286
【申请号】CN201610075061
【发明人】任迪维
【申请人】北京蜜蜂堂生物医药股份有限公司
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2016年2月3日