[0057] 步骤二、在100ml圆底烧瓶中，加入18mmol化合物a及36mmol三氯氧磷，油浴，在140 °〇下反应，TLC跟踪检测反应完全后，减压蒸馏去除过量三氯氧磷，得第二粗产物后，冷却， 将第二粗产物加入浓氨水和氯仿的混合物中，所述盛装浓氨水和氯仿混合物的容器置于冰 浴中，用浓氨水和氯仿的混合物洗涤烧瓶，洗涤液与含有第二粗产物的浓氨水和氯仿的混 合物混合，待第二粗产物全部溶解后，分离出氯仿层，水层继续用氯仿萃取，合并两次萃取 后的氯仿层，用无水氯化钙干燥，24h后过滤，蒸除溶剂，得到淡黄色粉末，即为化合物b; [0058] 步骤三、在100ml圆底烧瓶中，加入5mmol化合物b及50ml丙酮，60°C下溶解后加入 25mmol的NaSCN和2.5mmol的四丁基溴化铵，80°C回流反应，TLC跟踪检测反应完全后得到第 三粗产物，冷却至室温，收集析出的亮黄色针状晶体，抽滤，水洗后得到化合物c;
[0059] 步骤四、在100ml圆底烧瓶中，加入2mmol化合物c及60ml无水乙醇，60°C下溶解后 加入6mmol苯甲酰肼，80°C下回流反应，反应过程中有大量固体析出，TLC跟踪检测反应完全 后停止反应，得到第四粗产物后冷却，抽滤，得橙黄色粉末即化合物d;
[0060] 步骤五、在50ml圆底烧瓶中，加入lmmol化合物d及30ml质量分数为98%的浓硫 酸，在40°C下反应，TLC跟踪检测反应完全后，得到粗产物加10ml水后有固体析出，抽滤，得 到橙黄色固体即为化合物e，即2-苯基-5-( 2-甲基-9-B 丫啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑。
[0061 ] 实施例6
[0062] 步骤一、在250ml三颈瓶中，以邻溴苯甲酸26mmol和对甲苯胺34mmol为原料，碳酸 钾36.2mmol和铜粉4.7mmol作为催化剂，再加入30ml异戊醇作为溶剂，150°C回流搅拌，TLC 跟踪检测反应完全后，减压蒸馏去除溶剂，得到第一粗产物，向第一粗产物中加600ml水，70 °C下热水搅拌20min，过滤，收集滤液并洗涤滤饼，将洗涤后的洗涤液与滤液合并得到第一 溶液，用盐酸调节至所述第一溶液的pH为2,收集析出的淡绿色沉淀，抽滤后用氯仿重结晶， 得到化合物a;
[0063] 步骤二、在100ml圆底烧瓶中，加入18mmol化合物a及14.37ml三氯氧磷，油浴，在 135°C下反应，TLC跟踪检测反应完全后，减压蒸馏去除过量三氯氧磷，得第二粗产物后，冷 却，将第二粗产物加入浓氨水和氯仿的混合物中，所述盛装浓氨水和氯仿混合物的容器置 于冰浴中，用浓氨水和氯仿的混合物洗涤烧瓶，洗涤液与含有第二粗产物的浓氨水和氯仿 的混合物混合，待第二粗产物全部溶解后，分离出氯仿层，水层继续用氯仿萃取，合并两次 萃取后的氯仿层，用无水氯化钙干燥，24h后过滤，蒸除溶剂，得到淡黄色粉末，即为化合物 b；
[0064] 步骤三、在100ml圆底烧瓶中，加入5mmol化合物b及50ml丙酮，50°C下溶解后加入 12mmol的NaSCN和0.6mmol的四丁基溴化铵，55°C回流反应，TLC跟踪检测反应完全后得到第 三粗产物，冷却至室温，收集析出的亮黄色针状晶体，抽滤，水洗后得到化合物c;
[0065] 步骤四、在100ml圆底烧瓶中，加入2mmol化合物c及60ml无水乙醇，50°C下溶解后 加入3mmol苯甲酰肼，55°C下回流反应，反应过程中有大量固体析出，TLC跟踪检测反应完全 后停止反应，得到第四粗产物后冷却，抽滤，得橙黄色粉末即化合物d;
[0066] 步骤五、在50ml圆底烧瓶中，加入lmmol化合物d及12ml质量分数为98%的浓硫酸， 在30°C下反应，TLC跟踪检测反应完全后，得到粗产物加10ml水后有固体析出，抽滤，得到橙 黄色固体即为化合物e，即2-苯基-5-( 2-甲基-9-B 丫啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑。
[0067] 实施例7
[0068] 一种药物制剂，将20wt. %的实施例1制备的2-苯基-5-(2-甲基-9-叮啶亚氨基)_ 1，3,4-噻二唑、50wt. %的乳糖、20wt. %的葡萄糖以及5wt. %的淀粉混合后，用水均匀湿 润，湿润后过筛、干燥，加入5wt. %的硬脂酸镁后，压片，即得片剂。
[0069] 试验一、发明人对实施例1中所得黄色固体进行质谱分析，其1Η匪R实验结果如图 1所示，13C NMR实验结果如图2所示，数据如下：
[0070] 黄色粉末；FAB-MS m/z:369([M+H] + ) JH Mffi(DMS0-d6)S:8· 17(d，J = 8.5Hz，lH， ArH)，8.07(s，lH，ArH)，7.97~7.85(m，2H，ArH)，7.80(d，J = 6.9Hz，4H，ArH)，7.59~7.49 (m，3H，ArH)，7.48~7.34(m，lH，ArH)，2.45(s，3H，-CH 3);
[0071] 13C匪R(DMS0-d6，100M Hz)，δ168·73，160·12，157·49，140·60，138·98，137·32， 135.07,133.97,131.26,130.45,129.82,127.17,127.15,125.56,124.06,119.50,119.21， 118.10,117.00,21.44;IR(KBr)v:2792(吡啶类C-H N-H)，1366-1627(C = N，噻二唑的伸缩 振动)cnf1.
[0072] 实验结果表明黄色固体即为2-苯基-5-(2-甲基-9-叮啶亚氨基)-1，3,4_噻二唑， 并测得2-苯基-5-(2-甲基-9-叮啶亚氨基)-1，3,4_噻二唑的m.p.294-296°C。
[0073] 试验二、2-苯基-5-(2-甲基-9-叮啶亚氨基)-l，3,4-噻二唑对肿瘤细胞的生长抑 制作用。
[0074] 采用本发明的实施例1中的2-苯基-5-(2-甲基-9-叮啶亚氨基)-1，3,4_噻二唑分 别对胃癌细胞MGC80-3、肝癌细胞BEL-7404、肺癌细胞NCI -H460、膀胱癌细胞T24进行抑制细 胞生长增殖活性试验。采用MTT方法，进行体外细胞毒性测定。在96孔板中培养的对数生长 期细胞中加入2-苯基-5-(2-甲基-9-吖啶亚氨基)-1，3,4_噻二唑，同时进行5-FU、顺铂2组 对照实验比较。培养72小时后，加入MTT，测定其吸光度，分别计算抑制胃癌细胞MGC80-3、肝 癌细胞BEL-7404、肺癌细胞NCI-H460、膀胱癌细胞T24生长增殖到50%时化合物的浓度，以 IC50值表不，结果如表1所不：
[0075] 表1 2-苯基-5-(2-甲基-9-吖啶亚氨基)-1，3,4_噻二唑对不同细胞株的IC5Q值(μ Μ)
[0076]
[0077] 由表1中可以看出，本发明的2-苯基-5-(2-甲基-9-叮啶亚氨基)-1，3,4_噻二唑对 胃癌细胞MGC-803、肝癌细胞BEL-7404、肺癌细胞NCI-H460和膀胱癌细胞Τ24四种受测肿瘤 株均表现出较高的体外抗肿瘤活性，具有一定的药用价值，有望用于各种抗肿瘤药物的制 备。
[0078] 试验三、2-苯基-5-(2-甲基-9-叮啶亚氨基)-1，3,4_噻二唑对癌细胞转移的抑制 作用。
[0079]将孔径大小为8μπι的聚碳酸酯膜被50yg的Matrigel充分地包被1小时并在空气中 干燥24小时。将含有0.1 %BSA的条件培养基各30μ1加入到Boyden chamber的下室中。取3个 加入50μ1的人乳腺癌细胞MDA-MB-231的含有0.1 % BSA的RPMI1640培养基，分别向3个培养 基其中加入不同浓度的实施例1中的组合物，作为低剂量试验组、中剂量试验组和高剂量试 验组，然后分别加入到Boyden chamber的上室中。在37°C，5%⑶2和95%空气的湿度培养箱 中培养16小时后，用MeOH固定膜并用Quic溶液染色。通过分光法计算从上室进入到下室的 细胞数，结果见表2:
[0080] 表2 MDA-MB-231细胞转移抑制实验测试表
[0081]
[0082] 从表2中可以看出，本发明的实施例1的2-苯基-5-(2-甲基-9-叮啶亚氨基)_1，3， 4_噻二唑对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的转移有着很好的抑制作用，且较高剂量组的抑制效 果更好。
[0083] 试验四、2-