苯基-5-( 2-甲基-9-吖啶亚氨基)_1，3，4-噻二唑对小鼠学习记忆能力 的作用。
[0084] 阿尔茨海默病（Alzheimer' s Disease， AD)俗称老年痴呆，是一种大脑退行性疾 病，临床特征上首先表现为近期记忆力障碍，继而出现持续性智能衰退，判断推理能力丧 失，运动障碍。Morris水迷宫实验是常用的学习记忆测定方法。定位航行实验是训练小鼠经 过反复训练后能利用环境中的空间线索来定位水下平台，可以达到测定空间参考记忆获得 的目的，定位航行实验中以小鼠逃避潜伏期代表学习能力，随着训练时间的增加，小鼠逃避 潜伏期时间越短，表明其学习能力越强。
[0085]实验动物取健康小鼠50只，雌雄各半，每只小鼠体重(25 ± 5)g，健康小鼠的选择标 准是:将平台露出水面以使小鼠能够看见平台，小鼠放入泳池后如毫无困难地直接游向平 台，说明小鼠的游泳能力和视力均正常，可以开始实验。将健康小鼠平均分为5组，每组10 只，雌雄各半，正常对照组持续60天给予生理盐水腹腔注射;空白对照组、低剂量试验组、中 剂量试验组、高剂量试验组持续60天给予东莨菪碱腹腔注射，其中东莨菪碱是已知的引起 人类以及实验动物认知功能的减退的药物。
[0086]其中，按照动物实验方法学的方法根据人临床用药剂量换算小鼠的用药量，每只 小鼠的用药量=(人用剂量X人与鼠的换算系数)/小鼠重量。在具体实施过程中，实际体重 在标准体重的± 20 %范围内均采用此方法进行给药。
[0087] 对于正常对照组、空白对照组、低剂量试验组、中剂量试验组和高剂量试验组，从 注射第15天开始，同时进行灌胃给药干预。其中，正常对照组、空白对照组均以同剂量生理 盐水灌胃，以排除灌胃刺激与损伤的差异性，连续30天。其中，低剂量试验组、中剂量试验组 和高剂量试验组，均以低、中、高剂量实施例1制得的2-苯基-5-( 2-甲基-9-B 丫啶亚氨基)-1， 3,4-噻二唑灌胃，连续40天。
[0088] Morris水迷宫主要由圆形水池、自动摄像及分析系统组成，分析系统主要由计算 机、图像监视器组成，动物入水后启动自动摄像及分析系统，记录动物运动轨迹，试验完毕 自动分析报告相关参数。圆形水池由不锈钢制成，直径160cm，水池中有一可升降的圆形站 台，直径10cm，高28cm。沿水迷宫中心原点划分为四个象限，将站台设置在第一象限内，即目 标象限，其中站台的圆心距池壁30cm，在水池里注入自来水，水温为23-25°C，水面高出站台 2cm。水池上空通过一摄像机和计算机连接，当设定的训练时间已到或小鼠已爬到平台，计 算机停止跟踪并记录小鼠游泳轨迹、时间等。训练期间环境保持相对安静，把小鼠放入水池 后即离开。
[0089] 定位航行学习记忆实验方法是从同一池壁入水点将实验小鼠面向池壁放入水池， 自动记录小鼠找到站台的时间，作为小鼠逃避潜伏期。小鼠爬上站台后，让小鼠在站台上站 立10s;若小鼠在120s内未找到水池中的站台或未能爬上站台，则将小鼠轻轻拖动，引至站 台上站立10s。将小鼠从站台上取下，连续测试4d，作为小鼠学习记忆能力的训练。第5d记录 小鼠逃避潜伏期，检测小鼠定位航行记忆能力，试验结果如表3所示：
[0090] 表3小鼠逃避潜伏期情况记录（土S，n = 8)
[0091]
[0092] 从表3中可以看出，与正常对照组比较，空白对照组小鼠逃避潜伏期延长，差异具 有统计学意义，表明东莨菪碱发生作用导致痴呆，与空白对照组比较，低剂量试验组、中剂 量试验组、高剂量试验组小鼠逃避潜伏期明显缩短，差异具有统计学意义，表明2-苯基-5-(2-甲基-9-叮啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑能改善小鼠的学习记忆能力，能用于治疗老年痴呆 药物的制备。
[0093] 尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列 运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地 实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限 于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
【主权项】
1. 一种化合物2-苯基-5-(2-甲基-9-B丫啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑，具有化学式（I)的结 构：2. 如权利要求1所述的2-苯基-5- (2-甲基-9-B 丫啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑的制备方法， 包括以下步骤： 步骤一、以邻溴苯甲酸和对甲基苯胺为原料，碳酸钾和铜粉为催化剂，以异戊醇或正戊 醇为溶剂，在140~160°C下回流搅拌，反应完全后减压蒸馏去除溶剂，得到第一粗产物后加 水溶解，过滤，收集滤液并洗涤滤饼，将洗涤后的洗涤液与滤液合并得到第一溶液，用无机 酸调节至所述第一溶液的PH小于4,收集析出的淡绿色沉淀，抽滤后用氯仿重结晶，得到化 合物a; 步骤二、将所述化合物a与过量的三氯氧磷在130~140°C下反应，反应完全后减压蒸馏 去除过量的三氯氧磷，得到第二粗产物，将所述第二粗产物提纯得到化合物b; 步骤三、将所述化合物b用有机溶剂溶解后，加入四丁基溴化铵与硫氰化钠，反应得到 第三粗产物后冷却，收集析出的亮黄色针状晶体，抽滤，水洗后得到化合物c; 步骤四、将所述化合物c用有机溶剂溶解后，加入苯甲酰肼，回流反应，得到第四粗产物 后冷却，收集析出的橙黄色固体，得到化合物d; 步骤五、将所述化合物d与浓硫酸或醋酸反应，得到粗产物，加水后收集析出的橙黄色 固体，抽滤，水洗后得到化合物e，即2-苯基-5-( 2-甲基-9-吖啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑。3. 如权利要求2所述的2-苯基-5- (2-甲基-9-B 丫啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑的制备方法， 其特征在于，所述步骤一中，邻溴苯甲酸和对甲基苯胺的摩尔比为1:1~2,碳酸钾与邻溴苯 甲酸的摩尔比为1~2:1，铜粉和邻溴苯甲酸的摩尔比为0.1~0.5:1。4. 如权利要求2所述的2-苯基-5- (2-甲基-9-B 丫啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑的制备方法， 其特征在于，所述步骤二中，提纯的具体方法为:浓氨水和氯仿混合得到混合物后，在冰浴 条件下将第二粗产物加入所述混合物中，全部溶解后，分离出有机层，用无水氯化钙干燥有 机层后，过滤，蒸馏去除溶剂，即得到所述化合物b。5. 如权利要求2所述的2-苯基-5- (2-甲基-9-B 丫啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑的制备方法， 其特征在于，所述步骤三中，四丁基溴化铵与化合物b的摩尔比为0.1~0.5:1，硫氰化钠的 用量与化合物b的摩尔比为2~5:1。6. 如权利要求2所述的2-苯基-5- (2-甲基-9-B 丫啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑的制备方法， 其特征在于，所述步骤四中，苯甲酰肼与化合物c的摩尔比为1~3:1。7. 如权利要求2所述的2-苯基-5- (2-甲基-9-B 丫啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑的制备方法， 其特征在于，所述步骤三与所述步骤四中的溶剂是选自甲醇、乙醇、丙酮以及乙腈中的一种 或多种。8. 如权利要求2所述的2-苯基-5- (2-甲基-9-B 丫啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑的制备方法， 其特征在于，所述步骤五中，浓硫酸或醋酸与化合物d的摩尔比为10~30:1。9. 一种如权利要求1所述的2-苯基-5-(2-甲基-9-吖啶亚氨基)-1，3,4_噻二唑的用途， 其用途在于，2-苯基-5-(2-甲基-9-B 丫啶亚氨基)-1，3,4_噻二唑在制备抗肿瘤药物中的应 用。10. -种如权利要求1所述的2-苯基-5-(2-甲基-9-B丫啶亚氨基）-1，3，4_噻二唑的用 途，其用途在于，2-苯基-5-(2-甲基-9-B 丫啶亚氨基)-1，3，4_噻二唑在制备治疗老年痴呆的 药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种化合物2-苯基-5-(2-甲基-9-吖啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑及其制备方法和应用，化合物具有化学式(I)的结构：本发明的制备方法反应条件温和且操作简便，本发明的2-苯基-5-(2-甲基-9-吖啶亚氨基)-1，3，4-噻二唑可应用于抗肿瘤药物或治疗老年痴呆药物的制备。
【IPC分类】A61P35/00, A61K31/473, A61P25/28, C07D417/12
【公开号】CN105481847
【申请号】CN201510830934
【发明人】霍丽妮, 陈睿, 李培源, 苏炜, 梁美雄
【申请人】广西中医药大学
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年11月25日