0ml;
[0045] 13)把配制好的溶液置于试剂瓶中，密封后高压灭菌，室温备用。
[0046] 实施例2:分泌物样本稀释测试 [0047] 1)仪器、试剂和样本
[0048] 主要仪器:ABI 7500PCR检测仪、TGL-18R高速冷冻离心机、TDL-5-A台式离心机、 K10⑶干式恒温金属浴、BSC-1500IIA2-X生物安全柜、移液器等。
[0049] 主要试剂：中山大学达安基因股份有限公司的人乳头瘤病毒(HPV)16、18型核酸扩 增(PCR)荧光检测试剂盒。
[0050] 样本:新鲜的HPV16DNA临床阳性样本(分泌物，5.0E+07IU/ml)。
[0051] 2)实验方案
[0052]用普通稀释液和DNA类样本稀释保存液分别将HPV16DNA阳性样本稀释5倍、50倍、 500倍、5000倍。设计对照组和实验组两组稀释液，用中山大学达安基因股份有限公司的人 乳头瘤病毒(HPV)16、18型核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒对两组不同稀释液稀释的样本进 行提取。
[0053] 对照组:普通稀释液和HPV16DNA阳性样本。
[0054] 实验组:DNA类样本稀释保存液和HPV16DNA阳性样本。
[0055] 3)实验结果
[0056] PCR扩增检测图见图1、图2
[0057] 表1HPV16DNA阳性样本的检测结果
[0059] 4)实验结论
[0060]实验结果表明，用DNA类样本稀释保存液稀释的HPV16DNA阳性样本，扩增曲线呈典 型的S型曲线，稀释的浓度梯度间隔较好，适用于临床血浆样本的稀释。
[0061 ]实施例3 :UU培养物保存测试 [0062] 1)仪器、试剂和样本
[0063] 主要仪器:ABI 7500PCR检测仪、TGL-18R高速冷冻离心机、TDL-5-A台式离心机、 K10⑶干式恒温金属浴、BSC-1500IIA2-X生物安全柜、移液器等。
[0064] 主要试剂：中山大学达安基因股份有限公司的解脲脲原体核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法）。
[0065] 样本:UU 培养物（5.0E+07IU/ml)。
[0066] 2)实验方案
[0067]用DNA类样本稀释保存液将UU DNA培养物稀释10倍、1000倍，作为高、低浓度测试 样本分别标记为P1、P2。分别于-20±5°C环境中、2-8°C环境中、室温(20~25°C)环境中和37 °c下放置，本实验的设计如下:把稀释后的样本，做好标记，分别放入指定环境中，按指定周 期进行检验，具体如下:①-20 ± 5°C环境中，半年或一年检测一次;②2-8°C环境中，每半个 月检测一次，检测3个月；③室温(20~25°C)环境中，每8天检测一次，检测35天;④37°C环境 中，每2天检测一次，检测8天。用中山大学达安基因股份有限公司的解脲脲原体核酸检测试 剂盒(PCR-荧光探针法)对样本进行提取。
[0068] 对照组:放置-80°C环境中普通稀释液稀释的样本，放置_80°C环境中DNA类样本稀 释保存液稀释的样本。
[0069] 实验组:普通稀释液稀释的样本和DNA类样本稀释保存液稀释的样本分别放置-20 °(3环境中、2-8°C环境中、室温(20~25°C)环境中和37°C环境中的样本。
[0070] 3)实验结果
[0071] 表2 37°C环境中普通稀释液稀释的样本的检测结果(见图3、图4)
[0072]
[0073] 表3 37°C环境中RNA类样本稀释保存液稀释的样本检测结果(见图5、图6)
[0074]
[0075] 表4室温环境中普通稀释液稀释的样本检测结果(见图7、图8)
[0076]
[0077] 表5室温环境中RNA类样本稀释保存液稀释的样本检测结果(见图9、图10)
[0080] 表6 2-8°C环境中普通稀释液稀释的样本检测结果(见图11、图12)
[0081]
[0082] 表7 2-8°C环境中RNA类样本稀释保存液稀释的样本检测结果(见图13、图14)
[0083]
[0084] 表8 -20°C环境中普通稀释液稀释的样本检测结果(见图15、图16)
[0085]
[0086] 表9 -20°C环境中RNA类样本稀释保存液稀释的样本检测结果(见图17、图18)
[0087]
[0088] 四、实验结论
[0089]实验结果表明，用DNA类样本稀释保存液保存的UU DNA阳性样本比普通稀释液的 稳定性要好，适用于培养物样本的保存。
【主权项】
1. 一种DNA类样本保存稀释液，其成分主要由二甲基亚砜、山梨醇、Tris-HCl、乙二胺四 乙酸、1^切11-100、即-40、〇16161-100、叠氮钠、链霉素和去离子纯化水组成。2. 根据权利要求1所述的保存稀释液，其特征在于其主要组分的含量分别为:二甲基亚 讽1% ~3%[v/v]、山梨醇 0 · 5mol/L~lmol/L、Tris-HCl 0 · Olmol/L~0 · 05mol/)、乙二胺四 乙酸0.01mol/L~0.05mol/L、Triton-100 0.1%~0·5%[v/v]、ΝΡ-40 0.1%~0·5%[ν/ ν]、Chelex-100 1 % ~5% [w/v]、叠氮钠 0 · 08% ~0 · 1 % [w/v]、链霉素 400U/ml~800U/ml。3. 根据权利要求1所述的保存稀释液，其特征还在于其制备方法如下： (1) 量取若干毫升的去离子纯化水； (2) 分别加入二甲基亚砜、山梨醇、Tris-HCl、乙二胺四乙酸、Triton-100、NP-40、氢氧 化钠 、Che 1 ex-100、叠氮钠、链霉素，搅拌混匀； (3) 调pH值至7.8~8.2后定容； (4) 密封后高压灭菌，室温备用。4. 根据权利要求1所述的保存稀释液，其特征还在于可用作液态和固态DNA样本的保存 和/或稀释。
【专利摘要】本发明的目的是提供一种DNA类样本保存稀释液及其制备方法，属于聚合酶链式反应(PCR)技术领域核糖核酸(DNA)类样本的稀释和保存范畴。本发明的制备步骤包括：在去离子纯化水中加入一定量的DNA防腐剂和化学试剂；调pH值至7.8-8.2后定容；密封后高压灭菌，室温备用。本发明为一种白色透明溶液，具有稳定、易保存、便捷等优点，适用于血清、血浆、组织、尿液、分泌物等DNA类样本的保存和稀释。浸入DNA类样本稀释保存液后，新鲜组织细胞中DNA可以完好的在37℃下保存1周，在25℃下保存1个月，4℃下保存6个月，在-20℃或-80℃下长期保存。
【IPC分类】C12N15/10
【公开号】CN105524916
【申请号】CN201610021730
【发明人】李尔华, 高旭年, 钟凤然, 吴淑贤
【申请人】广州邦德盛生物科技有限公司
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2016年1月1日