m/z 707.5892[M+Na] +，提示其分子式为 C3iH4Q〇i7(calcd · for C3iH4Q〇i7Na，707 · 5873，不饱和度为 12)。化合物的UV(MeOH)Amax: 206， 288，332nm; IRvmax: 3402 · 7，1708 · 6，1387 · 7cm-1; 1H 匪R(O)3OD，400MHz)和 13C 匪R(CD3C)D， IOOMHz )，数据见表1。根据化合物的理化性质、波谱数据和HMBCAOESYJh-1H COSY等偶联相 关(如图2所示），确定化合物为一个新的苯乙醇苷类化合物，其结构式如式(I)所示，化学名 为：l〃-(7S)-7-(3-甲氧基-4-羟基苯基)-7_甲氧乙基-3〃-a-L-吡喃鼠李糖-4〃-[(8E)-7-(3，4，5-三羟基苯基-8-丙烯酸酯）]。
[0031] 表1化合物的1H NMR、13C NMR和HMBC相关数据
[0035] 考察式(I)的苯乙醇苷类化合物的降脂活性和抗氧化作用
[0036] -、降脂活性
[0037] (1)、实验材料与仪器
[0038]氯化钙，三羟甲基氨基甲烷，柠檬酸钠，HCl(ImoVL)，猪胰腺脂肪酶（Sigma产品， 货号L3126-25G)，4-甲基伞形酮油酸酯，式（I)化合物，酶标仪(SpectraMax M2)。
[0039] (2)、实验方法
[0040] a.三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)的配制：取氯化钙0.294g，加0.2m〇VL三羟甲 基氨基甲烷溶液40mL溶解，用lmol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至IOOmL，即得。
[0041] b.使用三羟甲基氨基甲烷缓冲液将式（I)化合物配置成不同浓度的样品液；取 IOmg猪胰腺脂肪酶，使用三羟甲基氨基甲烷缓冲液配制成lmg/mL的酶溶液；同时，使用三羟 甲基氨基甲烷缓冲液将4-甲基伞形酮油酸酯配置成O.lmmol/L底物溶液;使用三羟甲基氨 基甲烷缓冲液配制〇. lmmol/L的柠檬酸钠溶液，并使用HCl调至pH=4.2备用。
[0042] c.取30yL步骤b的样品液加入到30yL酶溶液中，充分混匀；再加入60yL底物溶液， 在25°C孵育20分钟，用I IOyL柠檬酸钠溶液终止反应。待测样品的终浓度分别为400、200、 100、50、25、12·5yg/mL。
[0043 ] d.选用样品液、酶溶液和底物溶液混合作为样品组，样品液与底物溶液混合作为 背景组，酶溶液和底物溶液混合作为对照组，底物溶液作为空白对照组。分别在320nm激发 光和450nm发射光测定吸光值。然后根据公式计算化合物的脂肪酶抑制率。实验结果见表2。 脂肪酶抑制率计算公式如下所示：
[0044] 脂肪酶抑制率％ = 1-(样品组-背景组)/(对照组-空白对照组）X100%
[0045] (3)、结论
[0046] 实验结果表明，本发明化合物对猪胰腺脂肪酶具有明显的抑制作用，脂肪酶抑制 率可达到89.57%，可以将其作为脂肪酶抑制剂用于肥胖症的研究。因此，本发明苯乙醇苷 类化合物对于研制治疗肥胖症的药物具有重要意义。
[0047] 表2式(I)化合物的降脂活性实验结果
[0049] 二、抗氧化作用
[0050] (1)、实验材料与仪器
[0051] 1，1_二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH)，式（I)化合物，维生素 C，紫外分光光度计 (GBC UV-916)，医用超声波清洗器(KQ-500E)，分析天平(XS105DU)。
[0052] (2)、实验方法
[0053] a.精密称定2.5mg式（I)化合物、2. Omg维生素 C，用无水乙醇溶剂定容至IOmU分别 配制成浓度为〇 . 25mg/mL的样品待测液、0.20mg/mL的阳性对照样品待测液，将上述待测液 按2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍、128倍稀释成系列浓度备用。
[0054] b.精密称取8.5mg DPPH，用无水乙醇配制成浓度为0.085mg/mL溶液备用。同时，精 密量取各待测液2ml，分别加入2mL的DPPH溶液(0.085mg/mL)，摇匀后静置30min。
[0055] c.以用无水乙醇为空白对照，在517nm处测定吸光度Al;将上述各待测液2mL与空 白溶剂(无水乙醇）2mL混合后，在517nm处测定吸光度A2;最后，将2mL DPPH溶液与2mL空白 溶剂混合后，再次在517nm处测定吸光度A3;将上述测定值Al、A2、A3代入DPPH自由基清除率 计算公式，即可计算出化合物对DPPH自由基的清除率。实验结果见表3。
[0056] DPPH自由基清除率计算公式:清除率（％ ) = [ 1-(A1-A2)/A3] X 100%。
[0057] 表3式（I)化合物和Vc对DPPH自由基的清除率(n = 6)
[0059] 注:表中纖表示Ρ〈0·01。
[0060] (3)、结论
[0061]实验结果表明，本发明化合物具有明显的清除DPPH自由基作用，从实验数据来看， 化合物的抗氧化活性明显强于阳性对照药VC。因此，本发明苯乙醇苷类化合物具有很强的 抗氧化活性，可以用于制备自由基清除剂药物，也可以制备保健食品，这对于今后从天然植 物中研制抗氧化药物具有重要意义。
【主权项】
1. 如式(I)所示的苯乙醇巧类化合物，2. -种权利要求1所述的苯乙醇巧类化合物的方法的制备方法，其特征在于取干燥的 小劑全株为原料，用70%-95%乙醇回流提取2-4次，每次1-3小时，提取液过滤，合并滤液， 浓缩得到总稠膏，总稠膏加水混悬后依次用石油酸、乙酸乙醋和正下醇各萃取2-4次，分别 浓缩得到石油酸部位萃取物、乙酸乙醋部位萃取物和正下醇部位萃取物；正下醇部位萃取 物上大孔吸附树脂，用1〇%-95%乙醇进行梯度洗脱，收集40-70%乙醇馈分，反复运用硅胶 柱层析和Se地adex LH-20柱层析进行分离纯化，得到（I)苯乙醇巧类化合物。3. 根据权利要求2所述的苯乙醇巧类化合物的方法的制备方法，其特征在于所述的小 劑全株和70 % -95 %乙醇的重量体积比为1:1 -2.化g/L。4. 根据权利要求2所述的苯乙醇巧类化合物的方法的制备方法，其特征在于所述的滤 液在30-50°C下低溫浓缩至无醇味得到总稠膏。5. 根据权利要求2所述的苯乙醇巧类化合物的方法的制备方法，其特征在于所述的总 稠膏和水按照体积比1:1进行混悬。6. 根据权利要求2所述的苯乙醇巧类化合物的方法的制备方法，其特征在于所述的40- 70%乙醇馈分的分离纯化得到（I)苯乙醇巧类化合物的方法为:进行第一次硅胶柱层析分 离，第一次硅胶柱层析的洗脱液为石油酸-丙酬，石油酸-丙酬的体积比为15:1-1:2;收集石 油酸-丙酬3:1馈分，进行第二次硅胶柱层析，第二次硅胶柱层析的洗脱液为石油酸-丙酬， 石油酸-丙酬的体积比为6:1-2:1，收集石油酸-丙酬3:1馈分，上S邱hadex LH-20柱，用85- 95%甲醇洗脱，得到式(I)苯乙醇巧类化合物。7. 权利要求1所述的式(I)所示的苯乙醇巧类化合物在制备降脂药物方面的应用。8. 权利要求7所述的应用，其特征在于所述的降脂药物为减肥药物。9. 权利要求1所述的式(I)所示的苯乙醇巧类化合物在制备抗氧化药物的应用。10. 权利要求9所述的应用，其特征在于所述的抗氧化药物为自由基清除剂药物。
【专利摘要】本发明公开了一种从小蓟中提取的苯乙醇苷类化合物及其制备方法和用途，其为如式(I)所示的苯乙醇苷类化合物。本发明依据“药食同源”的原理，选取小蓟作为研究对象，采用现代提取分离技术，简便有效地从小蓟中分离纯化得到一种新的苯乙醇苷类化合物，该化合物结构新颖，具有很好的降脂活性和抗氧化作用，可以应用于制备降脂药物方面，尤其是制备减肥药物方面；也可以应用于制备抗氧化药物，尤其是制备自由基清除剂药物方面；这为进一步开发疗效显著、毒副作用小的新型减肥药物和抗氧化作用药物奠定了重要的理论基础。
【IPC分类】C07H15/18, C07H1/08, A61P3/04, A61P39/06, A61K31/7028
【公开号】CN105541932
【申请号】CN201610049397
【发明人】马勤阁, 魏荣锐, 李亭, 徐坤, 桑志培, 郭锦辉, 孙潇潇
【申请人】南阳师范学院
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月25日