一种1?脱氧野尻霉素的结晶方法
【专利摘要】本发明公开了一种1?脱氧野尻霉素的结晶方法，该方法包括：先将桑叶粉用酸性乙醇浸泡，并在超声波细胞破碎机中处理，过滤，收取滤液进行离心分离，制得粗提取液；通过阳离子交换树脂，进行洗脱；收集洗脱液后置于旋转蒸发仪中进行浓缩，再用正丁醇对浓缩物进行萃取；萃取后回收萃取液，将余物置于低温干燥箱中进行干燥；干燥后置于乙醇中，形成过饱和溶液后析出晶体，收集晶体干燥后即得成品。本发明提供的1?脱氧野尻霉素的结晶方法可获得约0.2％的桑叶1?DNJ提取率，显著高于传统的乙醇提取率0.00139％，及稀酸提取效率0.00147％，说明稀酸和乙醇在浸提桑叶1?DNJ中发生了协同作用，产生了不可预见的效果。
【专利说明】
一种1-脱氧野尻霉素的结晶方法
技术领域
[0001]本发明属于医学医药技术领域，尤其涉及一种1-脱氧野尻霉素的结晶方法。
【背景技术】
[0002]1-脱氧野尻霉素(1-deoxynoj irimycin，DNJ)为一种极性含N化合物，其化学名称是3，4，5_三羟基-2-羟甲基四氢吡啶，分子式为C6H13NO4,相对分子质量为163。1_脱氧野尻霉素具有很强的抑制α-葡萄糖苷酶的作用，是降血糖、治疗糖尿病的有效成分，此外还具有抗病毒、抗肿瘤转移等药理作用。近年来，国内外学者对1-脱氧野尻霉素的来源、在生物体内的合成机制及化学合成方法进行了大量的研究探索，研究发现桑树的桑叶中1-脱氧野尻霉素的含量相当的可观，且提取方法、操作简单。
[0003]中国专利技术(03101988.9)报道了一种含有桑叶总碱浸膏的制剂及其制备方法:桑叶用水或者亲水溶剂提取，絮凝，上清液离子交换，亲水性溶剂回流提取，浓缩至干得到浸膏。产品的纯度达到50%以上，该制剂具有明显的降血糖及改善糖耐量作用。该方法需要絮凝;被树脂吸附的物资需要用亲水溶剂回流洗脱下来，实际操作中有些不便。
[0004]中国专利技术(02113004.3)报道了桑枝提取物及其提取方法和新用途:桑枝提取物由单味药材桑枝用O?95%乙醇水溶液或氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等溶剂或它们的组合在10-100°C温度条件下提取I次或I次以上，合并提取液，回收溶剂即得;或用下列方法进一步纯化:提取液调PH为7.5-9.5，离心后上清液调pH为4-6，沉淀水洗至中性，干燥即得;提取液经石油醚或汽油脱脂而得;提取液经石油醚或汽油脱脂后，用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇或水分别或依次提取而得;提取液经大孔吸附树脂吸附后，用10-95 %乙醇水溶液解吸附而得；提取液经硅藻土、氧化铝等吸附后，用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等溶剂洗脱后，浓缩干燥而得;提取液经聚酰胺、硅胶或离子交换树脂等柱层析分离。以上纯化方法可单用或采用几种方法的组合。所得的桑枝提取物中含有大量黄酮类成分，包括芦丁、槲皮素、桑色素等。该专利技术未明确提取物含DNJ的纯度，而且纯化时石油醚脱脂、大孔树脂吸附等，操作程序复杂。
[0005]中国专利技术(200710060127.2)报道了从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法:选用溶剂为20 %?90 %的乙醇或10 %?90 %的丙酮回流提取，得到滤液和滤渣;滤液浓缩、加水溶解后，通过大孔树脂分离得含量为30 %?50 %的黄酮类化合物;经过大孔树脂后的溶液，再通过离子交换树脂分离得含量为40 %?60 %的生物碱类化合物；桑叶滤渣，用水煎煮并脱色，10 %?60 %醇沉，得含量为55 %?85 %的酸性多糖类化合物。该技术需要大量的乙醇或者丙酮进行提取，工艺技术成本高，能耗高，未得DNJ纯品。
[0006]中国专利技术(200510030333.X)报道了从桑叶中提取有效成分的方法:将吸附有桑叶提取物的树脂置于萃取釜中，连续通入CO2进行萃取洗脱，收集流出萃取釜的co2，卸压至常压，CO2放空或加压后回用，获得卸压后的残留物，即为桑叶有效成分，萃取釜中0)2为超临界状态。本发明的方法，纯化过程不易氧化，便于进行规模化从桑叶中提取、提纯桑叶脱氧野尻霉素类生物碱和桑叶黄酮，选择性高，产物中，脱氧野尻霉素生物碱和桑叶黄酮的总含量可达到75?90%。该技术采用超临界萃取技术，最终产品也未得到脱氧野尻霉素纯品。
[0007]中国专利技术(200710067498.3)报道了一种从桑叶中提取1-脱氧野尻霉素的方法:通过在桑叶的提取液中加入无机酸酸化处理，经冷却除去杂质，再经过柱层析获得。可使桑叶提取物含量不低于10%，但是未得纯品。
[0008]中国专利技术(200810122998.7)报道了一种从桑叶总生物碱中分离1-脱氧野尻霉素单体的方法:桑叶总碱溶于水，离子交换树脂吸附，吸附完成后，分布洗脱并收集脱氧野尻霉素纯品部分，减压浓缩干燥，多次重结晶，得到纯品。该方法要求原料的“总生物碱”含脱氧野尻霉素40%以上，分步洗脱剂为不同浓度的醇溶液，重结晶为甲醇和丙酮混合溶液;分步洗脱时需要大量的检测工作和收集纯品部位，操作比较麻烦，重结晶的混合溶剂难以处理。
[0009]中国专利技术(200810236144.1)报道了一种联产桑叶黄酮、多糖和生物碱的复合提取工艺，但是并未分离得到脱氧野尻霉素纯品。
[0010]中国专利技术(200910192542.2)报道了一种从桑叶中连续提取分离1-脱氧野尻霉素(DNJ)、黄酮的方法:将桑叶和乙醇混合后提取，离心过滤，浓缩后加入絮凝剂絮凝沉淀;除去沉淀后将滤液加入连通的多个阳离子交换树脂柱，并流经与该树脂柱串连在一起的大孔吸附树脂柱;滤液加入结束后用纯净水洗至大孔树脂柱流出液无色时将其断开，再用氨水或含氨的乙醇溶液从阳离子树脂柱上洗脱1-脱氧野尻霉素(DNJ);洗脱液再上阳离子树脂柱，重复操作后收集洗脱液，用80D纳滤膜浓缩过滤后喷雾干燥，得棕黄色粉末状1-脱氧野尻霉素(DNJ)。用3%?10%的乙醇洗涤大孔树脂柱以除去胶性杂质，再用50%?70%乙醇洗脱黄酮，收集棕红色洗脱液，减压浓缩回收乙醇后喷雾干燥，得黄棕色粉末状桑叶总黄酮。该技术原料需要用乙醇反复提取，生产成本较高，能耗也较高。
[0011]中国专利技术(200710099911.4)报道了一种用离子交换树脂分离桑叶总生物碱的方法。该技术未获得脱氧野尻霉素单体。
[0012]中国专利技术(201010130263.6)报道了一种从桑叶中制备黄酮、生物碱的方法:碱水加热提取黄酮，90-95%乙醇和活性炭再提取生物碱，黄酮提取液调酸过大孔树脂柱，酸化结晶和70-80 %乙醇溶解重结晶，生物碱提取液浓缩，丙酮再溶解，过氧化铝短粗柱，氨化结晶和85-90%乙醇溶解重结晶。本技术需要大量的有机溶剂，而且未得到脱氧野尻霉素单体。
[0013]中国专利技术(201110021131.4)报道了桑叶中1-脱氧野尻霉素的制备方法:采用高电压脉冲电场技术生产1-脱氧野尻霉素的方法，由于是常温提取，同时提高了产品质量和生产效率，降低了生产成本。该技术未得到脱氧野尻霉素纯品。
[0014]中国专利技术(200910167602.5)报道了天然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素的方法:原料干粉用亲水溶剂提取，提取液酸化、浓缩后以阴离子交换树脂浸泡，流出液和水洗液浓缩后用阳离子交换柱层析、有机溶剂萃取、重结晶、凝胶柱层析纯化，所得产物中1-脱氧野尻霉素含量不少于98%，具体实施已进入中试。该技术需要阴离子交换树脂和阳离子交换树脂，同时需要醇、丙酮、氯仿、丁醇等多种有机溶剂，尤其是涉及氯仿，毒性较大;提取过程中需要多次浓缩，能耗较高。
[0015]中国专利技术(201110038204.0)报道了由桑叶中提取分离高纯度1-脱氧野尻霉素的方法:将原料粉末用含水溶剂提取，滤掉药渣，物料离心，得提取液;提取液浓缩至无乙醇，超滤膜过滤;再用无机酸调PH至3.0-4.0，沉淀，离心除杂;酸化料液上强酸性阳离子树脂柱，水洗，再进行氨水洗脱;料液上大孔树脂柱，水洗，再用不同浓度的乙醇梯度洗脱，收集目标洗脱液；目标洗脱液减压浓缩、干燥，得到粗品;粗品用无水乙醇溶解，过碱性吸附柱除杂，收集流出液;流出液减压浓缩，进行常温结晶和重结晶，得到1-DNJ精制品。本发明整个工艺过程中，除乙醇外未使用其它有机溶剂，操作安全，1-DNJ含量可达98.3%。该工艺需要采用超滤技术，乙醇分布洗脱，收集目标洗脱液需要不断检测流出组份等，操作复杂;能耗较高。
[0016]到目前为止，从现有文献和专利技术上看，提取脱氧野尻霉素纯品或者使用过多的有机溶剂，尤其是使用氯仿，导致安全性不高;或者需要多次浓缩，能耗较高;或者需要使用过多的步骤，或者需要分步检测并收集目标成分，由于脱氧野尻霉素没有紫外吸收，检测比较麻烦，操作复杂，工业生产难以控制;或者无法得到纯品等。
[0017]现有技术一的缺点
[0018]1-脱氧野尻霉素标准品的价格过于高。
[0019]无法获取高纯度的1-脱氧野尻霉素与实验作为参照。
[0020]实验原料只存在于春夏两个季度，长时间储存的原料容易发霉变质。产品的浓度不尚。
[0021]1-脱氧野尻霉素属于强效α-葡萄糖苷酶抑制剂，1-脱氧野尻霉素通过对二糖类分解酶活性产生抑制作用，从而抑制小肠对双糖的吸收，降低食后血糖的高峰值。进而抑制人体糖分的转化，降低空腹血糖和餐后血糖的升高优于磺脲类药物，而发生低血糖和其它副作用的可能性大大低于其它降血糖药物，安全性好;使用1-脱氧野尻霉素可以不改变正常的饮食结构。1-脱氧野尻霉素是目前糖尿病治疗市场上唯一的国际公认的零伤害生物制剂。目前，国内1-脱氧野尻霉素的来源大属于进口，且价格昂贵，高纯度的每千克1-脱氧野尻霉素的价格可达到2至3千元。国内药用的1-脱氧野尻霉素的纯度都比较的低，净含量低于5%，且对于1-脱氧野尻霉素的研究相当的浅显，还无法将1-脱氧野尻霉素的纯化达到结成晶体，不具备真正的能够精确的从桑叶中提取纯的1-脱氧野尻霉素的流程工艺技术。
【发明内容】
[0022]本发明的目的在于提供一种1-脱氧野尻霉素的结晶方法，旨在解决目前提取脱氧野尻霉素纯品安全性不高;能耗较高;操作繁琐，检测比较麻烦，工业生产难以控制，无法得到纯品，而且价格高昂的问题。
[0023]本发明是这样实现的，一种1-脱氧野尻霉素的结晶方法，该方法包括以下步骤:
[0024]先将桑叶粉用酸性乙醇浸泡，并在超声波细胞破碎机中处理，过滤，收取滤液进行离心分离，制得粗提取液；
[0025]再将制备好的粗提取液通过732Η阴性阳离子交换树脂，进行洗脱；
[0026]收集洗脱液后置于旋转蒸发仪中进行浓缩，再用正丁醇对浓缩物进行萃取；
[0027]萃取后回收萃取液，将含有1-脱氧野尻霉素的萃取液置于低温干燥箱中进行干燥；
[0028]干燥后置于乙醇中，形成过饱和溶液后析出晶体，收集晶体干燥后即得成品。
[0029]进一步，1-脱氧野尻霉素的结晶方法具体为:
[0030]提取:
[0031 ] 将桑叶粉碎过40目筛，称取300g于100mL烧杯中，加入由HCL与乙醇混合得到pH为
6.5的65 %酸性乙醇800mL浸泡30min，放入超声波细胞破碎机中处理20min，过滤，收集滤液，残渣加入400mL 65 %酸性乙醇重复处理一次，过滤，弃去残渣，合并两次滤液，将合并两次后的滤液用旋转蒸发仪回收乙醇并浓缩至小体积，进行离心分离提取液，制得粗提取液，超声波的功率为300W;
[0032]纯化:将制备后收集的1-脱氧野尻霉素粗提取溶液上样到阳离子交换树脂的交换柱，并用蒸馏水洗脱，流速为1.0?2.0ml/min;待洗脱液由无色变为淡黄色时开始收集，直至洗脱液基本无色为止得到第一洗脱液，然后再用0.25mol/L的氨水洗脱第一洗脱液，洗脱速度为I 一 2ml/min，收集洗脱液，得到第二洗脱液；
[0033]浓缩:将第二洗脱液置于旋转蒸发仪中，对1-脱氧野尻霉素进行浓缩，在600mmHg条件下浓缩30min;
[0034]萃取:用浓缩液相同体积的正丁醇萃取3次，得到1-脱氧野尻霉素的正丁醇萃取液；
[0035]干燥:用蒸馏法对1-脱氧野尻霉素的正丁醇萃取液中的正丁醇进行回收，再将除去正丁醇后得到的物质置于300mmHg，l(TC条件下的真空中干燥即得1-脱氧野尻霉素成品；
[0036]结晶:
[0037]将一部分1-脱氧野尻霉素成品加热溶于水，形成饱和溶液，敞口放置于干燥环境，得到过饱和溶液，析出单晶晶体;剩余的另一部分蒸馏到0.8g/ml，加入96%乙醇搅拌结晶得到粉末状晶体；
[0038]1-脱氧野尻霉素晶体的检测方法:利用高效液相色谱一质谱联机检测法。
[0039]进一步，
[0040]结晶中所述敞口放置于干燥环境，具体为:敞口放置24h，放置于相对湿度20%的干燥环境。
[0041]进一步，对1-脱氧野尻霉素晶体置于40°C条件下进行干燥。
[0042]进一步，所述浓缩中将第二洗脱液静置12小时后置于旋转蒸发仪中，对1-脱氧野尻霉素进行浓缩。
[0043]本发明提供的1-脱氧野尻霉素的结晶方法可获得约0.2%的桑叶1-DNJ提取率，显著高于传统的乙醇提取率0.00139%，及稀酸提取效率0.00147%，说明稀酸和乙醇在浸提桑叶1-DNJ中发生了协同作用，产生了不可预见的效果，为桑叶1-DNJ产品的在医药和保健品方面的开发利用提供理论支持和技术指导；
[0044]本发明将桑叶中所含的1-脱氧野尻霉素提取结晶出来，最大化的将1-脱氧野尻霉素的结晶浓度提高，达到50%以上，已解决目前市面上1-脱氧野尻霉素纯度较低且价格高昂的问题。
【附图说明】
[0045]图1是本发明实施例提供的1-脱氧野尻霉素的结晶方法流程图。
【具体实施方式】
[0046]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0047]下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。
[0048]如图1所示:一种1-脱氧野尻霉素的结晶方法，该方法包括以下步骤:
[0049]SlOl:先将桑叶粉用酸性乙醇浸泡，并在超声波细胞破碎机中处理，过滤，收取滤液进行离心分离，制得粗提取液；
[0050]S102:再将制备好的粗提取液通过阳离子交换树脂，进行洗脱；
[0051]S103:收集洗脱液后置于旋转蒸发仪中进行浓缩，再用正丁醇对浓缩物进行萃取；
[0052]S104:萃取后回收萃取液，将余物置于低温干燥箱中进行干燥；
[0053]S105:干燥后置于乙醇中，形成过饱和溶液后析出晶体，收集晶体干燥后即得成品O
[0054]1-脱氧野尻霉素的结晶方法具体为:
[0055]提取:
[0056]将桑叶粉碎过40目筛，称取300g于100mL烧杯中，加65 %酸性乙醇800mL浸泡30min，放入超声波细胞破碎机中处理20min，过滤，收集滤液，残渣加入400mL 65 %乙醇重复处理一次，过滤，弃去残渣，合并两次滤液，将合并两次后的滤液用旋转蒸发仪回收乙醇并浓缩至小体积，进行离心分离提取液，制得粗提取液，超声波的功率为300W;
[0057]纯化:将制备后收集的1-脱氧野尻霉素粗提取溶液上样到阳离子交换树脂的交换柱，并用蒸馏水洗脱，流速为1.0?2.0ml/min;待洗脱液由无色变为淡黄色时开始收集，直至洗脱液基本无色为止得到第一洗脱液，然后再用0.25mol/L的氨水洗脱第一洗脱液，洗脱速度为I 一 2ml/min，收集洗脱液，得到第二洗脱液；
[0058]浓缩:将第二洗脱液置于旋转蒸发仪中，对1-脱氧野尻霉素进行浓缩，在600mmHg条件下浓缩30min;
[0059]萃取:用浓缩液相同体积的正丁醇萃取3次，得到1-脱氧野尻霉素的正丁醇萃取液；
[0060]干燥:用蒸馏法对1-脱氧野尻霉素的正丁醇萃取液中的正丁醇进行回收，再将除去正丁醇后得到的物质置于300mmHg，l(TC条件下的真空中干燥即得1-脱氧野尻霉素成品；
[0061]结晶:
[0062]将一部分成品的1-脱氧野尻霉素加热溶于乙醇，形成饱和溶液。敞口放置于干燥环境(相对湿度20%，约24h)，得到过饱和溶液，在搅拌的条件下结晶得到1-脱氧野尻霉素晶体；
[0063]1-脱氧野尻霉素晶体的检测方法:利用高效液相色谱一质谱联机检测法。
[0064]结晶中所述敞口放置于干燥环境，具体为:敞口放置24h，放置于相对湿度20%的干燥环境。
[0065]对制得的1-脱氧野尻霉素晶体还需进行干燥。
[0066]所述浓缩中将第二洗脱液静置12小时后置于旋转蒸发仪中，对1-脱氧野尻霉素进行浓缩。
[0067]下面结合实验方案对本发明进一步说明。
[0068]实验方案设计
[0069]提取
[0070]将桑叶粉碎过40目筛，称取300g于100mL烧杯中，加65%乙醇800mL浸泡30min，放入超声波细胞破碎机(超声波的功率为300W)中处理20min，过滤，收集滤液。残渣加入400mL65%乙醇重复处理一次，过滤，弃去残渣，合并两次滤液，将滤液用旋转蒸发仪回收乙醇并浓缩至小体积，进行离心分离提取液。
[0071]纯化----阳离子交换树脂法
[0072]将制备后收集的1-脱氧野尻霉素粗提取溶液上样到阳离子交换树脂的交换柱，并用蒸馏水洗脱，流速为1.0?2.0ml/min。上柱时流速要慢，使浓缩液与离子交换树脂进行充分结合。待洗脱液由无色变为淡黄色时开始收集，直至洗脱液基本无色为止得到洗脱液I。然后再用0.25mol/L的氨水洗脱(洗脱速度I 一 2ml/min)，收集洗脱液，得到洗脱液2。
[0073]浓缩
[0074]将洗脱液2置于旋转蒸发仪中，对1-脱氧野尻霉素进行浓缩，在600mmHg条件下浓缩30min。
[0075]萃取
[0076]用浓缩液相同体积的正丁醇萃取3次，得到1-脱氧野尻霉素的正丁醇萃取液。
[0077]干燥
[0078]用蒸馏法对1-脱氧野尻霉素的正丁醇萃取液中的正丁醇进行回收，再将除去正丁醇后得到的物质置于300mmHg，l(TC条件下的真空中干燥即得成品。
[0079]结晶
[0080]将一部分成品的1-脱氧野尻霉素加热溶于乙醇，形成饱和溶液。敞口放置于干燥环境(相对湿度20%，约24h)，得到过饱和溶液，在搅拌的条件下结晶得到1-脱氧野尻霉素晶体。
[0081 ]成品的检测方法:尚效液相色谱一质谱联机检测法。
[0082]本发明提高了1-脱氧野尻霉素的纯净度，得到1-脱氧野尻霉素的晶体，更为方便的为药物中加入1-脱氧野尻霉素提供了方便。
[0083]本发明方法可获得约0.2%的桑叶1-DNJ提取率，显著高于传统的乙醇提取率
0.00139%,及稀酸提取效率0.00147 %，说明稀酸和乙醇在浸提桑叶1-DNJ中发生了协同作用，产生了不可预见的效果，为桑叶1-DNJ产品的在医药和保健品方面的开发利用提供理论支持和技术指导。
[0084]本发明提供的1-脱氧野尻霉素利用超声波辅助法对关键工艺参数优化。1-脱氧野尻霉素纯化时的阳离子交换树脂和大孔树脂的对比性比较。1-脱氧野尻霉素浓缩时使用旋转蒸发仪的时间以及温度进行控制。确定了 1-脱氧野尻霉素结晶时所需的工艺条件的各项指标参数的选择。
[0085]下面结合具体实施例对本发明的应用效果作详细的描述
[0086]以6000g桑叶提取1-脱氧野尻霉素的结晶方法为例说明:
[0087](I)提取:
[0088]将桑叶粉碎过40目筛，称取6000g于20L混合桶中，加65%酸性乙醇16L浸泡30min，放入超声波细胞破碎机中处理20min，过滤，收集滤液，残渣加入8L 65 %乙醇重复处理一次，过滤，弃去残渣，合并两次滤液，将合并两次后的滤液用旋转蒸发仪回收乙醇并浓缩至小体积，进行离心分离提取液，制得粗提取液，超声波的功率为300W;
[0089](2)纯化:
[0090]将制备后收集的1-脱氧野尻霉素粗提取溶液上样到732H型阳离子交换树脂的交换柱，并用蒸馏水洗脱，流速为1.0?2.0ml/min;待洗脱液由无色变为淡黄色时开始收集，直至洗脱液基本无色为止得到第一洗脱液，然后再用0.25mol/L的氨水洗脱第一洗脱液，洗脱速度为I?2ml/min，收集洗脱液，得到第二洗脱液；
[0091](3)浓缩:
[0092]将第二洗脱液置于旋转蒸发仪中，对含有1-脱氧野尻霉素的提取液进行浓缩，在600mmHg条件下浓缩30min;
[0093](4)萃取:
[0094]用和浓缩液相同体积的正丁醇萃取3次，得到1-脱氧野尻霉素的正丁醇萃取液；
[0095](5)干燥:
[0096]用蒸馏法对1-脱氧野尻霉素的正丁醇萃取液中的正丁醇进行回收，再将除去正丁醇后得到的物质置于300mmHg，l(TC条件下的真空中干燥即得1-脱氧野尻霉素成品；
[0097](6)结晶:
[0098]将一部分成品的1-脱氧野尻霉素加热溶于乙醇，形成饱和溶液。敞口放置于干燥环境(相对湿度20%，约24h)，得到过饱和溶液，在搅拌的条件下结晶得到1-脱氧野尻霉素晶体。
[0099]1-脱氧野尻霉素晶体的检测方法:利用高效液相色谱一质谱联机检测法。
[0100]经检测:6000g桑叶的1-脱氧野尻霉素的提取物与1-脱氧野尻霉素的标准曲线对比后得到提取率为0.18%。
[0101]以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种1-脱氧野尻霉素的结晶方法，其特征在于，该1-脱氧野尻霉素的结晶方法包括以下步骤: 先将桑叶粉用酸性乙醇浸泡，并在超声波细胞破碎机中处理，过滤，收取滤液进行离心分离，制得粗提取液； 再将制备好的粗提取液通过阳离子交换树脂，进行洗脱； 收集洗脱液后置于旋转蒸发仪中进行浓缩，再用正丁醇对浓缩物进行萃取； 萃取后回收萃取液，将余物置于低温干燥箱中进行干燥； 干燥后置于乙醇中，形成过饱和溶液后析出晶体，收集晶体干燥后即得成品。2.如权利要求1所述的1-脱氧野尻霉素的结晶方法，其特征在于，所述1-脱氧野尻霉素的结晶方法具体为: 提取: 将桑叶粉碎过40目筛，称取300g于100mL烧杯中，加入由HCL与乙醇混合得到pH为6.5的65 %酸性乙醇800mL浸泡30min，放入功率为300W的超声波处理20min，过滤，收集滤液，残渣加入400mL 65 %的酸性乙醇重复处理一次，过滤，弃去残渣，合并两次滤液，将合并两次后的滤液用旋转蒸发仪回收乙醇并浓缩至小体积，进行离心分离提取液，制得粗提取液；纯化:将制备后收集的1-脱氧野尻霉素粗提取溶液上样到阳离子交换树脂的交换柱，并用蒸馏水洗脱，流速为1.0?2.0ml/min;待洗脱液由无色变为淡黄色时开始收集，直至洗脱液基本无色为止得到第一洗脱液，然后再用0.25mol/L的氨水洗脱第一洗脱液，洗脱速度为I 一2ml/min，收集洗脱液，得到第二洗脱液； 浓缩:将第二洗脱液置于旋转蒸发仪中，对1-脱氧野尻霉素进行浓缩，在600mmHg条件下浓缩30min; 萃取:用浓缩液相同体积的正丁醇萃取3次，得到1-脱氧野尻霉素的正丁醇萃取液；干燥:用蒸馏法对1-脱氧野尻霉素的正丁醇萃取液中的正丁醇进行回收，再将除去正丁醇后得到的物质置于300mmHg，l(TC条件下的真空中干燥即得1-脱氧野尻霉素成品； 结晶: 将一部分1-脱氧野尻霉素成品加热溶于水，形成饱和溶液，敞口放置于干燥环境，得到过饱和溶液，析出单晶晶体;剩余的另一部分蒸馏到0.8g/ml，加入96%乙醇搅拌结晶得到粉末状晶体； 单晶晶体和粉末状晶体的检测方法:利用高效液相色谱一质谱联机检测法。3.如权利要求2所述的1-脱氧野尻霉素的结晶方法，其特征在于， 结晶中所述敞口放置于干燥环境，具体为:敞口放置24h，放置于相对湿度20 %的干燥环境。4.如权利要求2所述的1-脱氧野尻霉素的结晶方法，其特征在于，对制得的单晶晶体和粉末状晶体还需进行干燥。5.如权利要求2所述的1-脱氧野尻霉素的结晶方法，其特征在于，所述浓缩中将第二洗脱液静置12小时后置于旋转蒸发仪中，对1-脱氧野尻霉素进行浓缩。
【文档编号】C07D211/46GK106083696SQ201610395442
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月6日 公开号201610395442.X, CN 106083696 A, CN 106083696A, CN 201610395442, CN-A-106083696, CN106083696 A, CN106083696A, CN201610395442, CN201610395442.X
【发明人】林巧, 王治潘, 清源, 史碧波, 黄海燕, 郑飞, 焦钰
【申请人】西昌学院