芳香化酶抑制剂的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一系列芳香化酶抑制剂，其结构通式中，R1、R2、R3可分别选自?H、?CN、?NO2、?CF3、?Cl，R4为?F、?Cl、?Br、?I或Ph?。本发明通过改变N?(4?硝基苯基)?N?苄基?4?胺基?1,2,4?三氮唑化合物的某些末端结构，合成出一系列含硝基的三唑化合物及其衍生物。使用市售芳香化酶荧光底物检测试剂盒检测，这些化合物对芳香化酶有较好的抑制作用。本抑制剂抑制芳香化酶的活性最高为IC50＝9.02nM。
【专利说明】
芳香化酶抑制剂
技术领域
[0001 ]本发明属于酶抑制剂领域，尤其是一种芳香化酶抑制剂。
【背景技术】
[0002] 1、芳香化酶的结构与功能
[0003] 芳香化酶(Aromatase，CYP19)属于细胞色素 P450家族，是一种由503个氨基酸组成 的酶蛋白，由血红蛋白和黄体蛋白构成，广泛存在于卵巢、胎盘、睾丸、脑、脂肪、骨等正常组 织器官中，表达于细胞内质网膜，并与膜紧密结合，在胎盘及卵巢滤泡粒层细胞高表达，在 皮下脂肪、肌肉、肝、脑、正常乳腺间质和乳腺癌等非腺体组织中也有低水平表达。80%雌激 素受体化R)阳性的绝经后乳腺癌患者的肿瘤组织内有芳香化酶活性。芳香化酶的活性中屯、 还有一个含铁的化嘟环(血红素辅基），它对酶的催化活性起着决定性作用，其中血红素辅 基中屯、的铁原子与化嘟环上4个化咯氮原子W配位键结合。
[0004] 芳香化酶(Aromatase，CYP19)，是体内负责雌激素生物转化的限速酶，它能将雄激 素催化生成雌激素，又称雌激素合成酶，催化雄締二酬和睾酬合成雌酬和雌二醇，可W使雄 激素转变为雌激素。研究表明，芳香化酶作用于雌激素生物合成的最后一步，因此抑制芳香 化酶的活性并不会干扰其他酱体的合成过程。在绝经前妇女中，雌激素主要经卵巢的芳香 化酶产生，雄激素转变为雌激素的过程受垂体的卵泡刺激素和黄体生成激素的调控，在正 常反馈环调控下，可由垂体分泌促性腺激素促进雌激素的分泌，W对抗雌激素的减少，因 此，对绝经前的乳腺癌患者单独使用芳香化酶抑制剂(Aroma化se 11111化;[1:0'3,413)不能有 效抑制雄、雌激素的转变。绝经后妇女的卵巢不再产生雌激素，雌激素主要来源于脂肪、肌 肉和肝脏等外周组织，此过程不受垂体调控，雄激素经由周围的芳香化酶变成雌激素，由于 没有反馈环对抗芳香化酶抑制剂产生的效果，故绝经后的乳腺癌患者服用芳香化酶抑制剂 后可大大降低雄、雌激素的转变速率。
[0005] 2、芳香化酶在乳腺癌中的表达和意义
[0006] 乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，其病死率位于各种癌症的前列，其中Ξ分之 一 W上为雌激素依赖型。芳香化酶(Aromatase)是细胞色素 P450酶家族中一个成员，在体内 W睾酬、雄締二酬和16-〇-径雄締二酬为生理底物，经过芳香化作用转化成雌酬和雌二醇。 临床研究发现，绝经后妇女外周循环中的雌激素水平明显下降，但在芳香化酶高表达的乳 腺组织，雌激素的水平依旧很高，因此乳腺癌组织中具有高浓度的雌激素环境，促进乳腺癌 的复发和转移。因此，故给绝经后的乳腺癌患者服用芳香化酶抑制剂是比较有效的治疗乳 腺癌的的一种途径。
[0007] 3、芳香化酶抑制剂的作用机制
[000引芳香化酶抑制剂的作用机制是通过抑制肾上腺、肝、脂肪包括乳腺癌组织中的芳 香化酶，阻止其利用雄締二酬及睾酬产生雌激素，从而降低雌激素水平，抑制雌激素依赖性 癌细胞生长。大多数乳腺癌组织中芳香化酶具有肿瘤内活性，运种活性与肿瘤内雌激素水 平直接有关，芳香化酶抑制剂对其具有显著的抑制作用，而抑制肿瘤细胞内的芳香化酶活 性有助于抑制肿瘤细胞的生长，由于肾上腺和脂肪组织也可产生雌激素，且为绝经后妇女 外周血雌激素的主要来源，故可将芳香化酶抑制剂作为绝经后妇女，特别是雌激素依赖性 乳腺癌患者的内分泌治疗的一个重要方向。
[0009] 4、芳香化酶抑制剂的分类
[0010] 从芳香化酶的生理功能及其结构特点来考虑，芳香化酶抑制剂的作用机制分为两 种:一种是与酶的天然底物具有相似的结构，可W竞争芳香化酶的结合位点，此类抑制剂多 为雄締二酬的类似物;另外一种是结构中具有杂原子(如S，0，N等），运些杂原子可W和血红 素中的铁原子结合。此外，还有一些抑制剂通过抑制相应基因的表达，间接地抑制芳香化酶 的活性;一些天然产物也具有芳香化酶抑制作用，也可作为芳香化酶的竞争性抑制剂。
[0011] 按照化合物结构分类，，可W芳香化酶抑制剂分为两型：1型是雄締二酬的酱体类 似物，酱体类芳香化酶抑制剂是一类含有雄締二酬母环结构的化合物，属于类固醇类芳香 化酶失活剂，不可逆地结合于芳香化酶的雄締二酬位点，起到酶灭活效应，主要包括第2代 的福美司坦和第3代的依西美坦；Π 型是非酱体性抑制剂，属于非类固醇类的芳香化酶抑制 剂，可通过一个基本氮原子可逆地与芳香化酶的亚铁血红素结合，阻碍NADPH脱氨氧化过 程，从而抑制芳香化酶的活性。
[0012] 5、芳香化酶抑制剂的临床发展
[0013] 按临床发展的时序，芳香化酶抑制剂可W分为3代:包括第1代的氨鲁米特，第2代 的法曲挫（化化ozole)罗谷亚胺(Rogletimide)和第3代的阿那曲挫(Anastrozole)、来曲挫 (Xetrozole)、伏氯挫（Vorozole)。
[0014] 第1代芳香化酶抑制剂的代表药物为氨鲁米特，该药能抑制肾上腺所有类固醇激 素的合成，起到药物性肾上腺切除的作用，但发现此药的选择性太差，因副作用较大，使用 不方便而先后在国外和国内停用
[0015] 第2代芳香化酶抑制剂第二代产品主要有非酱体类的法曲挫化化ozole和酱体类 的福美司坦(FormeStane，商品名兰特隆，Lentaron)，两者在选择性上有所改进，副作用明 显减少。其中，在作用机制上，福美司坦还能W共价键形式与芳香化酶产生不可逆的自杀性 结合。但是其疗效并不优于他莫昔芬，主要问题仍然是选择性不太高，其他第2代芳香化酶 抑制剂未被批准临床应用。
[0016] 第3代芳香化酶抑制剂主要包括来曲挫化etrozole)、阿那曲挫(Anastrozole)、依 西美坦化xemestane)。与第1、2代相比，第3代芳香化酶抑制剂其抑制全身芳香化酶活性和 雌激素水平有很大幅度的提高，基本达到了理想化的要求，对其他类固醇激素的代谢不产 生干扰，选择性更高、特异性更强、耐受性更好，且无交叉耐药性，对皮质醇或醒固酬的代谢 几乎没有影响，高龄患者和一些脏器功能障碍患者的耐受性也很好。且均为口服制剂，服用 方便，副作用少。
【发明内容】
[0017] 本发明的目的在于提供一种芳香化酶抑制剂，本抑制剂可通过一个基本氮原子可 逆地与芳香化酶的亚铁血红素结合，阻碍NADPH脱氨氧化过程，从而抑制芳香化酶的活性可 有效降低体内雌性激素含量，可用于治疗或预防乳腺癌。
[0018] 本发明的目的是通过W下技术方案实现的：
[0019] -种芳香化酶抑制剂，其结构通式如下：
[0020]
[0021] 其中，Ri、化、R3分别选自-H、-CN、-N02、-CF3、-C1; R4 为F、C1、Br、I 或化-。
[0022] 上述芳香化酶抑制剂在抑制芳香化酶药物中的应用。
[0023] 上述芳香化酶抑制剂在治疗乳腺癌药物中的应用。
[0024] 上述芳香化酶抑制剂的具体结构为：
[0025] N-(3-漠-4-硝基苯基)-N-苄基-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫、
[0026] Ν-( 3-漠-4-硝基苯基)-Ν-( 3-硝基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫、
[0027] N-(3-漠-4-硝基苯基)-N-(3-氯基苄基)-4-胺基-l，2,4-Ξ氮挫、
[002引 Ν-( 3-漠-4-硝基苯基)-Ν-( 2-氯基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫、
[0029] Ν-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(4-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫、
[0030] Ν-( 3-漠-4-硝基苯基)-Ν-( 3-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫、
[0031] Ν-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(4-氯苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫、
[0032] Ν-(3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-苄基-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫、
[0033] Ν-( 3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-( 3-硝基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫、
[0034] Ν-( 3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-( 4-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫、
[0035] 或Ν-(3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-(3-氯基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫。
[0036] 本发明的优点及积极效果如下：
[0037] 1、本发明通过改变Ν-(4-硝基苯基)-Ν-苄基-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫化合物的某些 末端结构，合成出一系列含硝基的Ξ挫化合物及其衍生物，运些化合物对芳香化酶有较好 的抑制作用，经过试验验证，本抑制剂抑制芳香化酶的IC50最高达9.02ηΜ。
[0038] 2、本发明提供的一系列芳香化酶抑制剂能抑制雄性激素转变为雌性激素，为非酱 体性抑制剂中一种，可通过一个基本氮原子可逆地与芳香化酶的亚铁血红素结合，阻碍 NADP胡兑氨氧化过程，从而抑制芳香化酶的活性可有效降低体内雌性激素含量，可用于治疗 或预防乳腺癌。
【附图说明】
[0039] 图1为本发明ν-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-苄基-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫HNMR分析图；
[0040] 图2为本发明Ν- (3-漠-4-硝基苯基)-Ν- (3-硝基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫HNMR 分析图；
[0041 ] 图3为本发明Ν- (3-漠-4-硝基苯基)-Ν- (3-氯基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫HNMR 分析图；
[0042] 图4为本发明N-(3-漠-4-硝基苯基)-N-(2-氯基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫HNMR 分析图；
[0043] 图5为本发明Ν-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(4-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫 HNMR分析图；
[0044] 图6为本发明Ν-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(3-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫 HNMR分析图；
[0045] 图7为本发明Ν-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(4-氯苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫HNMR分 析图；
[0046] 图8为本发明N-(3-苄基-4-硝基苯基)-N-苄基-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫HNMR分析 图；
[0047] 图9为本发明N-(3-苄基-4-硝基苯基)-N-(3-硝基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫 HNMR分析图。
[004引图10为本发明n-(3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-(4-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ 氮挫HNMR分析图。
[00例图11为本发明N-(3-苄基-4-硝基苯基)-N-(3-氯基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫 HNMR分析图。
【具体实施方式】
[0050]下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的， 不能W下述实施例来限定本发明的保护范围。
[0051 ]本发明提供的芳香化酶抑制剂的结构通式如下：
[0化2]
[0053] 其中，Ri、R2、R3可在W下基团任意选择，运些基团为：Ri、R2、R3分别选自-H、-CN、- N02、-C的、-C1，R4分别选自F、C1、化、I或Ph-中的一种 [0化4] 实施例1
[0055] N-(3-漠-4-硝基苯基)-N-苄基-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫的合成及芳香化酶抑制活 性
[0056] (1 )Ν-( 3-漠-4-硝基苯基)-Ν-苄基-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫制备
[0057]将氯化节(0.3048g，2. Ommo 1)溶于DMF(5ml)，K2CO3 (0.828g,，6mmo 1)加入反应体系 中，揽拌0.5h，然后将N-(3-漠-4-硝基苯基)-4-胺基-1，2，4-S氮挫（0.568g，，2. Ommol)加 入混合物强烈揽拌过夜，加入乙酸乙醋萃取，有机物分层，用水和盐水多次清洗，用NasS化干 燥，然后减压旋蒸，粗产物用硅胶柱层析色谱进行分离提纯（200目硅胶），得到所要产品 (0.5843g，78.12 % )，产品为深黄色固体。反应式如下：
[0化引
[0化9]其HNMR分析图见图 1，其中：iHNMR(400MHz，DMS0)S8.80(s，2H)，8.07(d，J = 9.1Hz， 1扣，7.32(3，甜），7.13((1，1 = 2.2化，1扣，6.69((1(1，1 = 9.1，2.3化，1扣，5.12(3,2扣
[0060] (2)N-(3-漠-4-硝基苯基)-N-苄基-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫的芳香化酶抑制活性测 定
[0061] 芳香化酶抑制活性是使用芳香化酶试剂盒进行测定。（芳香化酶试剂盒购于北京 赛泰克生物科技有限公司，下同）
[0062] ω测定原理
[0063] 在NADPH循环再生条件下，芳香化酶可催化二苯基巧光黄(d;Lbenz;ylf luorescein， DBF)水解产生巧光黄(fluorescein)。催化机理同芳香化酶催化雄性激素转变为雌性激素。 因此，可W根据巧光黄的巧光强度来评价芳香化酶的催化活性。在芳香化酶抑制剂存在条 件下，即可通过对照实验来评价芳香化酶催化活性被抑制的情况。实验用IFo表示无抑制剂 时芳香化酶催化DBF产生巧光黄的量，用IFi表示加入抑制剂后芳香化酶催化DBF产生巧光 黄的量，BLANK表示体系背景值，则100%- (IF〇-BLANK)/(IFi-BLANK) X 100%即为化合物抑 制芳香化酶能力的度量。
[0064] 间试剂
[0065] ① NADPH循环再生体系(C/S的夜）：
[0066] 2.6mM NADP+,
[0067] 7.6mM glucose-6-phosphate,
[0068] 0.8U/mL glucose-6-phosphate dehy化ogenase,
[0069] 13.9mM MgCb,
[0070] Img/mL a化umin,
[0071] 溶解在50mM的憐酸钟缓冲溶液中化-P Buffer，pH7.4)。
[0072] ②酶-底物体系化/S液）：
[007引 0.8μΜ D邸，
[0074] 40pmol/mL of aroma 1:ase,
[0075] 4mg/mL a化umin,
[0076] 溶解在50mM的憐酸钟缓冲溶液中化-P Buffer,抑7.4)。
[0077] 所有样品溶解在DMSO中，工作浓度为如Μ。
[0078] 间实验步骤
[0079] 取90化C/S的夜于96孔板中，加入各样品10化，混合30s，37°C下解育lOmin;迅速取 100化已预热3min的E/S液于各孔中，混合30s，37 °C下反应30min;在各孔中加入75化的2M NaO田容液W终止反应的进行;然后继续在37°C下解育化，待信号稳定，用巧光酶标仪进行测 定，激发光波长为485nm，测定波长为535nm。阴性对照加入10化DMS0,溶剂空白先加入化0H 溶液终止后在加入E/S液。抑制能力计算公式为：100%-(IF()-BLANK)/aFi-BLANK) X 100%。 [0080]按实施例1中步骤3中所述芳香化酶抑制剂活性测定方法测定，得该化合物抑制芳 香化酶的IC50为39.77nM [0081 ]实例2
[0082] N-(3-漠-4-硝基苯基)-N-(3-硝基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫合成及芳香化酶 抑制活性
[0083] (1 )Ν-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(3-硝基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫制备
[0084] 将3-硝基漠化节(0.5184g，2. Ommol)溶于DMF(5ml)，K2C〇3(0.828g，6mmol)加入反 应体系中，揽拌0 .化，然后将N-( 3-漠-4-硝基苯基）-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫（0.568g， 2.Ommol)加入混合物强烈揽拌过夜，加入乙酸乙醋萃取，有机物分层，用水和盐水多次清 洗，用化2S化干燥，然后减压旋蒸，粗产物用硅胶柱层析色谱进行分离提纯（200目硅胶），得 到所要产品（0.5759g，68.73 % )，产品为深黄色固体反应式：
[0085]
[0086] 其歷 MR 分析图见图 2:其核磁图为：1 歷MR (400MHz，DMS0 )S8.86(s，2H)，8.22(s, lH)，8.18(d J = 8.2Hz，lH)，8.08(d J = 9.2Hz，lH)，7.75(d J = 7.7Hz，lH)，7.63(t J = 7.9Hz，lH)，7.21(d，J = 2.7Hz，lH)，6.70(dd，J = 9.2,2.7Hz，lH)，5.29(s，2H).
[0087] (2 )N-( 3-漠-4-硝基苯基)-N-( 3-硝基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫的芳香化酶抑 制活性测定
[0088] 按实施例1中步骤3中所述芳香化酶抑制剂活性测定方法测定，得该化合物抑制芳 香化酶的IC5Q为12.^nM。
[0089] 实施例3
[0090] n-(3-漠-4-硝基苯基)-N-(3-氯基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫合成及芳香化酶 抑制活性
[0091] (1 )Ν-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(3-氯基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫制备
[0092] 将3-氯基漠化节(0.470g，2. Ommo 1)溶于DMF巧ml)，K2CO3 (0.828g，6mmo 1)加入反应 体系中，揽拌0.化，然后将N-(3-漠-4-硝基苯基)-4-胺基-1，2，4-立氮挫(0.568g，2. Ommol) 加入混合物强烈揽拌过夜，加入乙酸乙醋萃取，有机物分层，用水和盐水多次清洗，用NasS化 干燥，然后减压旋蒸，粗产物用硅胶柱层析色谱进行分离提纯(200目硅胶），得到所要产品 (0.5542g，69.45 % )，产品为深黄色固体。反应式如下：
[0093
[0094] 其歷MR分析见图 3，其中 1歷MR (400MHz，DMSO )S8.91(s，2H)，8.08(d，J = 9.2Hz, lH)，7.88(s，lH)，7.81(d J = 7.7Hz，lH)，7.68(d J = 7.細z，lH)，7.57(tJ = 7.7Hz，lH), 7.14(d，J = 2.5Hz，lH)，6.69(dd，J = 9.2,2.細z，lH)，5.22(s，2H)
[0095] (2 )N-( 3-漠-4-硝基苯基)-N-( 3-氯基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫芳香化酶抑制 活性测定
[0096] 按实施例1中步骤3中所述芳香化酶抑制剂活性测定方法测定，得该化合物抑制芳 香化酶的IC50为57.58nM。
[0097] 实施例4
[009引 n-(3-漠-4-硝基苯基)-N-(2-氯基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫的合成及芳香化 酶抑制活性
[0099] (1 )Ν-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(2-氯基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫的制备
[0100] 将2-氯基漠化节(0.470g，2. Ommo 1)溶于DMF巧ml)，K2CO3(0.828g，6mmo 1)加入反应 体系中，揽拌0.化，然后将N-(3-漠-4-硝基苯基)-4-胺基-1，2，4-立氮挫(0.568g，2. Ommol) 加入混合物强烈揽拌过夜，加入乙酸乙醋萃取，有机物分层，用水和盐水多次清洗，用NasS化 干燥，然后减压旋蒸，粗产物用硅胶柱层析色谱进行分离提纯(200目硅胶），得到所要产品 (0.5380邑，67.42%)，产品为深黄色固体。反应式如下：
[0101]
[0102] 其HNMR分析见图4,其中，
[010；3] 1 歷MR(400MHz，DMS0)S8.84(s，2H)，8.08(d，J = 9.2Hz，lH)，7.89(dd，J = 7.7, 1.0Hz，lH)，7.64(dd J = 7.7，1.3Hz，lH)，7.55(dd J = 7.6，l.lHz，lH)，7.50(d J = 7.7Hz, lH)，7.22(d，J = 2.7Hz，lH)，6.71(dd，J = 9.2,2.8Hz，lH)，5.35(s，2H).
[0104] (2 )N-( 3-漠-4-硝基苯基)-N-( 2-氯基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫芳香化酶抑制 活性测定
[0105] 按实施例1中步骤3中所述芳香化酶抑制剂活性测定方法测定，得该化合物抑制芳 香化酶的IC50为58.85nM。
[0106] 实施例5
[0107] n-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(4-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫合成及芳香 化酶抑制活性
[010引 （1) Ν-( 3-漠-4-硝基苯基)-Ν-( 4-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫的制备
[0109] 将-氯4-Ξ氣甲基漠化节(0.470g，2. Ommo 1)溶于DMF(5ml)，K2CO3(0.828g，6mmo 1) 加入反应体系中，揽拌0.化，然后将N-(3-漠-4-硝基苯基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫(0.568g， 2.Ommol)加入混合物强烈揽拌过夜，加入乙酸乙醋萃取，有机物分层，用水和盐水多次清 洗，用化2S化干燥，然后减压旋蒸，粗产物用硅胶柱层析色谱进行分离提纯（200目硅胶），得 到所要产品(0.6264g，70，86 % )，产品为深黄色固体。反应式如下：
[0110]
[0111]其 HNMR 分析见图5,其中1 歷MR(400MHz，DMS0)S8.88(s，2H)，8.07(d，J = 9.2Hz, lH)，7.71(d J = 8.3Hz，2H)，7.57(d J = 8.1Hz，2H)，7.14(d J = 2.7Hz，lH)，6.68(dd J = 9.2,2.7Hz，lH)，5.26(s，2H).
[OW] (2)N-(3-漠-4-硝基苯基)-N-(4-S氣甲基苄基)-4-胺基-1，2,4-S氮挫芳香化酶 抑制活性测定
[0113] 按实施例1中步骤3中所述芳香化酶抑制剂活性测定方法测定，得该化合物抑制芳 香化酶的IC5Q为43.57nM。
[0114] 实施例6
[0115] N-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(3-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫合成及芳香 化酶抑制活性
[0116] (1 )ν-(3-漠-4-硝基苯基)-N-(3-S氣甲基苄基)-4-胺基-1，2，4-S氮挫的制备
[0117] 将3-Ξ氣甲基漠化节(0.470g，2. Ommo 1)溶于DMF巧ml)，K2CO3(0.828g，6mmo 1)加入 反应体系中，揽拌0 .化，然后将N-( 3-漠-4-硝基苯基）-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫（0.568g， 2.Ommol)加入混合物强烈揽拌过夜，加入乙酸乙醋萃取，有机物分层，用水和盐水多次清 洗，用化2S化干燥，然后减压旋蒸，粗产物用硅胶柱层析色谱进行分离提纯（200目硅胶），得 到所要产品(0.6204g，70.19 % )，产品为深黄色固体。反应式如下：
[011 引
[0119] 其 HNMR 分析见图 6:其中，iHNMR(400MHz，DMS0)S8.85(s，2H)，8.09(d，J = 9.2Hz, lH)，7.70(d J = 9.3Hz，2H)，7.64(s，lH)，7.60(d J = 7.5Hz，lH)，7.19(d J = 2.7Hz，lH), 6.71(dd，J = 9.2,2.7Hz，lH)，5.25(s，2H).
[0120] (2 )N-( 3-漠-4-硝基苯基)-N-( 3-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫芳香化酶 抑制活性测定
[0121] 按实施例1中步骤3中所述芳香化酶抑制剂活性测定方法测定，得该化合物抑制芳 香化酶的IC50为17.38nM。
[0122] 实施例7
[0123] n-(3-漠-4-硝基苯基)-N-(4-氯苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫的合成及芳香化酶 抑制活性
[0124] (1 )ν-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(4-氯苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫的制备
[0125] 将4-氯漠化节取，有机物分层，用水和盐水多次清洗，用化2S化干燥，然后减压旋 蒸，粗产物用硅胶柱层(0.470g，2. Ommol)溶于DMF( 5ml)，K2CO3 (0.828g，6mmo 1)加入反应体 系中，揽拌0.化，然后将N-(3-漠-4-硝基苯基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫(0.568g，2. Ommol)加 入混合物强烈揽拌过夜，加入乙酸乙醋萃析色谱进行分离提纯(200目硅胶），得到所要产品 (0.5428g，66.85 % )，产品为黄色固体。反应式如下：
[0126]
[0127]其 HNMR 分析见图7,其中1 歷MR(400MHz，DMS0)S8.82(s，2H)，8.06(d，J = 9.2Hz, lH)，7.37(dd J = 24.2,8.5Hz，4H)，7.15(d J = 2.6Hz，lH)，6.68(dd J = 9.2,2.細z，lH), 5.12(s,2H).
[012引（2)n-(3-漠-4-硝基苯基)-N-(4-氯苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫芳香化酶抑制活 性测定
[0129] 按实施例1中步骤3中所述芳香化酶抑制剂活性测定方法测定，得该化合物抑制芳 香化酶的IC50为9.02ηΜ。
[0130] 实施例8
[0131] ν-(3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-苄基-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫的合成及芳香化酶抑制 活性
[0132] (1 )Ν-( 3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-苄基-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫的制备
[0133] 在氮气环境下将Ν-(3-漠-4-硝基苯基）-Ν-苄基-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫（0.4g， 1.07mmol)，苯棚酸（0.156g, 1.284mmol)，催化剂Pdcl2(dppf) (0.044g,0.053mmol)，CH3C00K (0.0157g，1.605mmol)，加入微波瓶中，在加入无水1，4-二氧六环，微波反应，130°C，反应 化，反应液为黑色，然后见反应液用乙酸乙醋萃取，用大量水和饱和食盐水洗，用无水硫酸 儀干燥，然后减压旋蒸，粗产物用硅胶柱层析色谱进行分离提纯(200目硅胶），得到所要产 品(0.312,78.74%)，产品为淡黄色固体，反应式如下：
[0134]
[0135] 其 HNMR 分析见图 8,其中，iHNMR(400MHz，DMS0)S8.81(s，2H)，8.04(d，J = 9.1Hz, lH)，7.43(d J = 7.1Hz，3H)，S7.32(d，J = 2.8Hz，4H)，7.26(dd，J = 7.5，1.8Hz，2H)，6.73 (dd J = 9.1，2.細z，lH)，6.65(dJ = 2.細z，lH)，5.14(s，2H).
[0136] (2)N-(3-苄基-4-硝基苯基)-N-苄基-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫芳香化酶抑制活性测 定
[0137]按实施例1中步骤3中所述芳香化酶抑制剂活性测定方法测定，得该化合物抑制芳 香化酶的IC50为30.19nM。
[013引实施例9
[0139] n-(3-苄基-4-硝基苯基)-N-(3-硝基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫的合成及芳香 化酶抑制活性
[0140] (1)Ν-(3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-(3-硝基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫的制备
[0141] 在氮气环境下将Ν-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(3-硝基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫 (0.4483g，l .07mmol)，苯棚酸（0.156g, 1.284mmol)，催化剂Pdcl2(dppf )(0.044g, 0.053mmol)，C曲C00K(0.0157g，1.605mmol)，加入微波瓶中，在加入无水1，4-二氧六环，微 波反应，130°C，反应化，反应液为黑色，然后见反应液用乙酸乙醋萃取，用大量水和饱和食 盐水洗，用无水硫酸儀干燥，然后减压旋蒸，粗产物用硅胶柱层析色谱进行分离提纯(200目 硅胶），得到所要产品（0.3652，77.84 % )，产品为褐色固体。反应式如下：
[0142]
[0143] 其 HNMR 分析见图 9,其中，iHNMR(400MHz，DMS0)S8.87(s，2H)，8.23(s，lH)，8.18(d, J = 8.1Hz，lH)，8.05(d J = 8.9Hz，lH)，7.76(s，lH)，7.64(d J = 7.9Hz，lH)，7.44(d J = 7.0Hz，3H)，7.28(d，J = 5.9Hz，2H)，6.74(dd，J = 10.4,5.8Hz，2H)，5.32(s，2H).
[0144] (2 )N-( 3-苄基-4-硝基苯基)-N-( 3-硝基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫芳香化酶抑 制活性测定
[0145] 按实施例1中步骤3中所述芳香化酶抑制剂活性测定方法测定，得该化合物抑制芳 香化酶的IC50为14.53nM。
[0146] 实例10
[0147] n-(3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-(4-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫的合成及 芳香化酶抑制活性
[0148] (1) Ν-( 3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-( 4-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫的制备
[0149] 在氮气环境下将Ν-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(4-二氣甲基苄基)-4-胺基-1,2,4-二 氮挫（0.472g,l. OTmmol )，苯棚酸（0.156g,l. 284mmo1 )，催化剂Pdcl2(dppf) (0.044g, 0.053mmol)，C曲C00K(0.0157g，1.605mmol)，加入微波瓶中，在加入无水1，4-二氧六环，微 波反应，130°C，反应化，反应液为黑色，然后见反应液用乙酸乙醋萃取，用大量水和饱和食 盐水洗，用无水硫酸儀干燥，然后减压旋蒸，粗产物用硅胶柱层析色谱进行分离提纯(200目 硅胶），得到所要产品（0.3652,77.84%)，产品为黄色固体。反应式如下：
[0150]
[0151] 其 HNMR 分析见图 10,其中，iHNMR(400MHz，CDCl3)S8.24(s，2H)，7.92(d，J = 8.9Hz， lH)，7.63(d J = 7.5Hz，lH)，7.55(s，lH)，7.50(t J = 7.7Hz，lH)，7.43(d J = 7.7Hz，lH)，5 7.39(d，J = 2.2Hz，lH).，7.27(s，lH)，7.19(d，J = 3.細z，2H)，6.63(d，J = 9.0Hz，lH)，6.59 (d J = 2.2Hz，lH)，6.26(d J = 5.6Hz，lH)，5.01(s，2H).
[0152] (2)N-(3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-(4-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫芳香化 酶抑制活性测定
[0153] 按实施例1中步骤3中所述芳香化酶抑制剂活性测定方法测定，得该化合物抑制芳 香化酶的IC50为17.42ηΜ。
[0154] 实例 11
[0155] ν-(3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-(3-氯基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫的合成及芳香 化酶抑制活性
[0156] (ι)ν-(3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-(3-氯基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫的制备
[0157] 在氮气环境下将Ν-(3-漠-4-硝基苯基)-Ν-(3-氯基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫 (0.424g, 1.07mmol)，苯棚酸（0.156g，l .284mmol)，催化剂 Pdcl2(dppf)(0.044g, 0.053mmol)，C曲C00K(0.0157g，1.605mmol)，加入微波瓶中，在加入无水1，4-二氧六环，微 波反应，130°C，反应化，反应液为黑色，然后见反应液用乙酸乙醋萃取，用大量水和饱和食 盐水洗，用无水硫酸儀干燥，然后减压旋蒸，粗产物用硅胶柱层析色谱进行分离提纯(200目 硅胶），得到所要产品(0.3364邑，79.87%)，产品为黄色固体。反应式如下：
[015 引
[0159] 其 HNMR 分析见图 11，其中，iHNMR(400MHz，CDCl3)S8.25(s，2H)，7.97(d，J = 8.6Hz, lH)，7.69(d J = 6.7Hz, 1H), 7.62(s，lH), 7.51 (dj = 11.7Hz，2H), 7.41 (s，3H), 7.21 (dj = 3.2Hz，2H)，6.64(d，J = 7.9Hz，lH)，6.58(s，lH)，4.99(s，2H).
[0160] (2)N-(3-苄基-4-硝基苯基)-N-(3-氯基苄基)-4-胺基-1，2,4-S氮挫芳香化酶抑 制活性测定
[0161] 按实施例1中步骤3中所述芳香化酶抑制剂活性测定方法测定，得该化合物抑制芳 香化酶的IC50为19.66nM。
【主权项】
1. 一种芳香化酶抑制剂，其特征在于:其结构通式如下：其中，Ri、R2、R3 可分别选自-H、-CN、-N02、-C的、或-C1，R4为-F、-C1、-化、-I 或陆-。2. 根据权利要求1所述的芳香化酶抑制剂，其特征在于:具体结构为 N- (3-漠-4-硝基苯基)-N-苄基-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫、 N- (3-漠-4-硝基苯基)-N- (3-硝基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫、 N- (3-漠-4-硝基苯基)-N- (3-氯基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫、 N- (3-漠-4-硝基苯基)-N- (2-氯基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫、 N- (3-漠-4-硝基苯基)-N- (4-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫、 N- (3-漠-4-硝基苯基)-N- (3-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫、 N- (3-漠-4-硝基苯基)-N- (4-氯苄基)-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫、 N- (3-苄基-4-硝基苯基)-N-苄基-4-胺基-1，2，4-Ξ氮挫、 N-(3-苄基-4-硝基苯基)-N-(3-硝基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫、 Ν-(3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-(4-Ξ氣甲基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫、 或Ν-(3-苄基-4-硝基苯基)-Ν-(3-氯基苄基)-4-胺基-1，2,4-Ξ氮挫。3. 权利要求1-2中任意所述的芳香化酶抑制剂在制备抑制芳香化酶药物中的应用。4. 权利要求1-2中任意所述的芳香化酶抑制剂在制备治疗乳腺癌药物中的应用。
【文档编号】A61P35/00GK106083747SQ201610421349
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月14日 公开号201610421349.1, CN 106083747 A, CN 106083747A, CN 201610421349, CN-A-106083747, CN106083747 A, CN106083747A, CN201610421349, CN201610421349.1
【发明人】戴玉杰, 宋智丹, 刘津, 刘伟, 刘艳春, 胡彦营, 张秀利, 张同存, 华庆园, 贾士儒
【申请人】天津科技大学