专利名称：一类以荧光素为母体的荧光染料、其制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类以荧光素为母体的具有特殊性质的新型长波长荧光染料的制备方法及应用，以及利用该类荧光探针化合物在体外和体内检测牛血清蛋白，并将染料应用到细胞成像实验中。
背景技术：
荧光染料作为功能性色素在科学技术的各个领域得到广泛应用，尤其在生命科学、临床医疗诊断、免疫分析检测等方面的研究在全世界备受瞩目。在众多的荧光染料中荧光素是一类被广泛应用的染料，这类染料具有大的摩尔消光系数、好的光稳定性、高的荧光
量子产率等优点。1871年荧光素首次被合成出来，然后成为一个重要的类型的荧光团，由于其优良的量子产率和耐光性，荧光素现在已经被广泛地应用于荧光生物探针。人们发现2’，7’位置被氟或氯取代后的荧光素衍生物比起原来没有衍生化的母体来说，这类衍生物能更适合生物应用中，因为他们具有更低的PKa值和更好的耐光性能。这些衍生品以他们的发明家名字分别命名为 Oregon Green, Tokyo Green,Pennsylvania Green 和 Pittsburgh Green。但直到现在，很少有“红色”的荧光素衍生物被研发出来，众所周知的是在红色发射光的区域的染料具有更高的应用价值，因为发射在600nm以上的染料具有更少的干涉散射光线和自体荧光的生物分子的干扰。许多研究小组已经开发出基于2’，7’ 二氯荧光素荧光探针比如用荧光素作为检测锌离子、银离子、铜离子、汞离子、钯离子、臭氧、RNA和酶等等。但是，直到现在，大多数这些荧光化合物基于2’，7’ 二氯荧光素的苯环或3’，6’的位置构建派生出来的，而这些衍生物的光谱不能扩展到长波长区域。最近，Koide组找到一种通过在4’的位置引入一个烯丙基基团从而实现的光谱扩展的方法。据报道两个荧光素衍生物Pittsburgh Green和Pittsburgh Yellow-green发射峰值在水中分别为523nm,535nm。但这些已经被报道的结果表明要想有效地来实现荧光素延长吸收和发射波长到“红色”区域的方法是可以通过在4’，5’的位置衍生化。已经报道的文献中主要采用的是在4’，5’的位置通过曼尼希反应衍生化，但这种方法不是一种有效的延长吸收和发射光谱的有效方法，因此，为了获得“红色”的荧光素，需要提出新出合成方法来修饰荧光素，让其波长延长至“红色”区域。
发明内容
本发明首先提供一类以荧光素为母体的荧光染料，具有通式I的结构(
图1):
权利要求
1.类以荧光素为母体的荧光染料，具有通式I的结构:
2.权利要求1所述的荧光染料，其特征在于，所述的Rtl和Rc/各自独立地选自H、F和 Cl。
3.权利要求1所述的荧光染料，其特征在于，所述的R和R’各自独立地选自R3、R4>R5和R6。
4.权利要求1所述的荧光染料，其特征在于:所述的Y-选自卤素离子、C104-、PF6-、BF4-、CH3COCT 和 OTs'
5.权利要求广4中任一权利要求所述的荧光染料，其特征在于，所述的M选自H，K+，Na+。
6.权利要求5所述的荧光染料，其特征在于，所述的Rtl和Rc/相同，选自H和Cl。
7.权利要求6所述的荧光染料，其特征在于，所述的R和R’相同。
8.权利要求1所述的荧光染料的缀合物。
9.权利要求1所述的荧光染料的制备方法，包括如下步骤: I)式II的化合物与乌洛托品化合物按照投料摩尔比1:1-1:20，在10-180°C条件下反应4-48小时，制备式III的化合物；
10.一种用于生物样品染色的组合物，包含权利要求1所述的荧光染料或权利要求8所述的荧光染料缀合物。
全文摘要
一类以荧光素为母体的荧光染料、其制备方法及应用，所述的以荧光素为母体的荧光染料，具有通式I(图1)的结构。这类化合物具有一定水平的水溶性，同时具有一定良好的细胞膜通透性。本发明的这类化合物同时还具有比较新颖的光谱特性，并将这类良好性质的荧光素衍生物的染料应用于荧光成像方面。
文档编号C09B57/00GK103087545SQ201210539138
公开日2013年5月8日 申请日期2012年12月13日 优先权日2012年12月13日
发明者彭孝军, 熊小庆, 宋锋玲, 樊江莉, 王静云 申请人:大连理工大学