专利名称：一类尼罗蓝荧光染料，其制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类荧光探针化合物及其制备方法和用途，该化合物适用于精细化工领域中细胞溶酶体的标记。
背景技术：
溶酶体是细胞内的一种非常重要的亚细胞器，其内包含能够分解废弃材料和细胞碎片的酸性水解酶，他们能够消化过量的或磨损的细胞器、食物粒子，并且能够吞没病毒或细菌。溶酶体的主要作用是消化作用，是细胞内的消化器官，细胞自溶，防御以及对某些物质的利用均与溶酶体的消化作用有关。同时，越来越多的事实证明，溶酶体在许多生理、药理及病理过程中均起重要作用。随着溶酶体的研究日益受到基础医学研究工作者及临床学家的重视，因此，开发出摩尔吸光系数大，荧光量子产率高；荧光发射波长处于长波且有较大的斯托克斯位移的荧光探针，在对溶酶体进行标记、监测的应用过程中有着重要意义。荧光探针具有非侵入性、易操作、能够实现可视化检测等特点，受到普遍的重视。目前许多溶酶体的定位染料都包含一条弱碱性链，可以使探针向酸性的溶酶体细胞器聚集。近年来，研究者开发出了多种溶酶体的标记性染料，一部分已经商业化。可是这些染料共有的一个缺点是激发、发射波长都较短Γ350-550ηπι)，在进行活细胞共聚焦成像时，对活细胞造成很大的损伤，同时，此类荧光染料容易发生光漂白，并易受到自发荧光的干扰，这一系列的不足都严重的影响了染料的应用性能。因此开发一种激发、发射波长长，光稳定性好，对细胞具有低毒性的溶酶体探针具有重要意义。
尼罗蓝类荧光染料具有优异的光化学物理性质，例如高的摩尔消光系数、良好的光稳定性、高的荧光量子产率等优点。对细胞的内环境不敏感，具有良好的化学稳定性和光稳定性，而且可以解决通常溶酶体探针对细胞高毒性和光漂白严重等的弊端。目前公开报道的几类尼罗蓝染料包括lSBP0、2SBP0、Bonall、Bonal2等(USPatentNumber:6, 140, 500,2000 年 10 月 31 日！Development of water-soluble far-redf luorogenic dyes for enzyme sensing, Tetrahedron62 (2006) 578-585),但这些已公开的化合物不易透过细胞膜进入活细胞内部，并且无法实现溶酶体定位染色。
发明内容
本发明的目的在于提供一类具有优良性能的溶酶体标记性探针的合成及应用。本发明首先公开一类尼罗蓝荧光染料，具有如下结构通式1:
权利要求
1.一类尼罗蓝荧光染料，具有如下结构通式1:1\
2.权利要求1所述的荧光染料，其特征在于，所述的R1和R2各自独立地选自H或CV9烧基。
3.权利要求2所述的荧光染料，其特征在于，所述的R1和R2各自独立地选自H或甲基。
4.权利要求3所述的荧光染料，其特征在于，所述的R1和R2均为甲基。
5.权利要求1所述的荧光染料，其特征在于，所述的R3和R4各自独立地选自H、(CH2)2NHjP 2-吗啉乙基。
6.权利要求5所述的荧光染料，其特征在于，所述的R3和R4至少有一个是H。
7.权利要求1所述的尼罗蓝荧光染料的制备方法，是以乙醇为反应溶剂、在酸存在条件下式II的化合物与式III的化合物按照摩尔比1:广2反应所得
8.权利要求1所述的尼罗蓝荧光染料在制备溶酶体荧光特异性标记试剂中的应用。
全文摘要
一类尼罗蓝荧光染料，其制备方法及应用。所述的尼罗蓝荧光染料具有如下结构通式I。本发明所述的尼罗蓝类荧光染料具有优异的光化学物理性质，例如高的摩尔消光系数、良好的光稳定性、高的荧光量子产率等优点。对细胞的内环境不敏感，具有良好的化学稳定性和光稳定性，而且可以解决通常溶酶体探针对细胞高毒性和光漂白严重等的弊端。可应用于溶酶体荧光特异性标记。
文档编号C09K11/06GK103044947SQ201310007599
公开日2013年4月17日 申请日期2013年1月9日 优先权日2013年1月9日
发明者樊江莉, 董惠娟, 彭孝军, 胡明明 申请人:大连理工大学