氨基酸通常选自下组：丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、 亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸和缬氨酸。换而言之，在这些 实施方案中，通常不存在天冬氨酸、谷氨酸、色氨酸和酪氨酸。在那些实施方案中，其中所 述水性缓冲溶液包含至少一种氨基酸，所述至少一种氨基酸通常选自下组：丙氨酸、半胱氨 酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸和缬氨酸。换而言之，在这些实施方案 中，通常不存在天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙 氨酸、色氨酸和酪氨酸。在那些实施方案中，其中所述水性缓冲溶液包含至少一种氨基酸， 所述至少一种氨基酸通常选自下组：丙氨酸、甘氨酸、组氨酸和赖氨酸。换而言之，在这些 实施方案中，通常不存在天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、异亮氨酸、亮氨 酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
[0141] 在一个实施方案中，所述至少一种Good's缓冲液选自下组：MES、MOPS、Tris、ADA、 ACES、BES、Bicine、CAPS、CAPSO、CHES、HEPES、PIPES、TAPS 和 TES。在一个实施方案中，所 述至少一种Good' s缓冲液是MES，而在另一实施方案中，所述至少一种Good' s缓冲液是 MOPS0
[0142] 在一个实施方案中，所述生物分子是蛋白（例如，酶、结构蛋白、转运蛋白、信号蛋 白、跨膜蛋白、肽激素或抗体）或其片段，或核酸（例如，单链寡核苷酸、双链寡核苷酸、单 链多核苷酸或双链多核苷酸）。核酸可为，例如，DNA、RNA或由DNA和RNA形成的杂交双 链。在一个实施方案中，所述生物分子是酶（例如，氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、 异构酶或连接酶）。在一个实施方案中，所述酶是水解酶，如糖苷酶（经常称为糖苷水解 酶）。在一个实施方案中，所述糖苷酶是α-半乳糖苷酶，如选自下组的α-半乳糖苷酶： 阿加糖酶α (例如，Shire, United Kingdom制造的R.eplaga_)和阿加糖酶β (例如，由 Genzyme, Cambridge, MA制造的Fabrazyme? )。在一个实施方案中，所述α -半乳糖苷酶 是阿加糖酶β。在另一实施方案中，所述生物分子是肽激素，如促甲状腺激素（也称为TSH 或促甲状腺素）。TSH是由两个亚基组成的糖蛋白，所述两个亚基为：α亚基和β亚基。重 组形式的人TSH-α可从Genzyme Corp.以商标名"Thyrogen"获得。在另一实施方案中， 所述生物分子是抗体，如单克隆抗体。在一些实施方案中，所述生物分子是糖基化的蛋白。
[0143] 在一个实施方案中，所述多峰树脂选自下组：Capto? Adhere、Capto? MMC、Pall PPA HyperCel?、Pall HEA HyperCel?、Pall MEP HyperCel?和：Eshmuno? HCX 介质。在 本申请提交日于这些多峰树脂中使用的配体示于图4、5、6A、6B、6C和7。在一个实施方案 中，所述多峰树脂是Capto? Adhere。
[0144] 第六方面，本发明针对一种制品，其包含：
[0145] (a)包装材料或容器；
[0146] (b)水性缓冲溶液，所述水性缓冲溶液包含如下、基本上由如下组成或者由如下组 成：
[0147] -至少15mM的至少一种Good's缓冲液，如15mM_2. 5M的至少一种Good's缓冲液， 50mM-2. 0M、75mM-l. 5M、IOOmM-L 25M、200mM-l. 0M、300mM-900mM、400mM-750mM 的至少一种 Good's缓冲液；
[0148] -总浓度为 0-400mM (如 0mM、10mM-350mM、25mM-300mM、50mM-250mM、100mM-200mM 或125mM-150mM)的丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘 氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色 氨酸、酪氨酸和缬氨酸；
[0149] -总浓度为 0-400mM (如 0mM、10mM-350mM、25mM-300mM、50mM-250mM、100mM-200mM 或125mM-150mM)的尿素、盐酸胍、硫氰酸胍、氯化铵、硫酸铵、磷酸铵、乙酸铵、氯化钠、柠檬 酸钠、辛酸钠、磷酸钠、碘化钠、氯化钾、柠檬酸钾、硫酸钾、磷酸钾、碘化钾、氯化镁、硫酸镁、 磷酸镁、氯化钙、硫酸钙、磷酸钙和牛磺酸；和
[0150] -〇 % -60 % (v/v)(如 1 % -50 % (v/v)、5 % -40 % (v/v)、8 % -30 % (v/v)、 10% -25% (v/v)或15% -20% (v/v))的乙二醇或丙二醇或乙二醇和丙二醇的混合物；和
[0151] (C)包含用于实施本文描述的方法的说明的数据载体。
[0152] 本发明中作为特征的水性缓冲溶液与现有技术中描述的洗脱缓冲液相比涉及降 低的生物分子变性风险。根据第六方面的制品提供该具有优势的水性缓冲溶液与容器或包 装材料及包含用于实施利用该具有优势的水性缓冲溶液的方法的说明的数据载体的组合。
[0153] 因此，预期根据本方面的制备物包含与现有技术描述的制备物中的生物分子相比 处于更加天然状态的生物分子。
[0154] 在一个实施方案中，所述数据载体选自下组：在所述包装材料或容器上存在的 标签（例如，粘贴标签、标志（tag)、芯片或RFID标志的形式）和包装说明书（packaging insert)(例如，单张；小册子；芯片；或计算机可读存储介质，如软盘、⑶-ROM、⑶-R、DVD或 蓝光光盘）。在一些实施方案中，所述数据载体包含书面信息、视觉信息（例如，图片）或计 算机可读信息（例如程序或条形码）。
[0155] 在一个实施方案中，所述数据载体进一步包含一种或多种下列信息：
[0156] (i)使用水性缓冲溶液的说明；
[0157] (ii)质量信息如关于所述水性缓冲溶液的批次/批号、制造或组装地点或过期或 销售日期的信息，或关于制品正确的储存或处理的信息；
[0158] (iii)关于所述水性缓冲溶液的组成的信息；
[0159] (iv)关于实施根据第一方面的方法时获得的信息解读的信息；
[0160] (V)关于采用不适合的方法时可能的误解或错误结果的警告；和
[0161] (Vi)关于使用不合适的试剂和/或缓冲液时可能的误解或错误结果的警告。
[0162] 在第六方面的一个实施方案中，所述制品进一步包含一种或多种下列组分：
[0163] (d)层析介质；
[0164] (e)层析柱；
[0165] (f)用于校准用于纯化或富集生物分子的方法的参照生物分子，如用于校准根据 第一方面的方法的参照生物分子。
[0166] 在一些实施方案中，所述层析柱预装有层析介质。
[0167] 在一个实施方案中，所述层析介质是多峰层析树脂。在一个实施方案中，所述多峰 树脂选自下组：Capto? Adhere、Capto? MMC、Pall PPA HyperCel?、Pall HEA HyperCel?、 Pall MEP HyperCel?和Eshniuno? HCX介质。在这些多峰树脂中使用的配体示于图4、5、 6A、6B、6C和7。在一个实施方案中，所述多峰树脂是Capto? Adhere。
[0168] 在一个实施方案中，所述参照生物分子选自由蛋白组成的组（例如，酶、结构蛋 白、转运蛋白、信号蛋白、跨膜蛋白、肽激素或抗体）和核酸（例如，单链寡核苷酸、双链 寡核苷酸、单链多核苷酸或双链多核苷酸）。核酸可为，例如，DNA、RNA或由DNA和RNA 形成的杂交双链。在一个实施方案中，所述参照生物分子是酶（例如，氧化还原酶、转移 酶、水解酶、裂合酶、异构酶或连接酶）。例如，所述参照酶可以是水解酶，如糖苷酶（经 常称为糖苷水解酶）。在一个实施方案中，所述参照糖苷酶是α-半乳糖苷酶，如阿加 糖酶α (例如，Shire, United Kingdom制造的Replagal? )或阿加糖酶β (例如，由 Genzyme, Cambridge, MA制造的Fabl'azyme? )。在一个实施方案中，所述参照α -半乳糖 苷酶是阿加糖酶β。在另一实施方案中，所述参照生物分子是肽激素，如促甲状腺激素（也 称为TSH或促甲状腺素）。TSH是由两个亚基组成的糖蛋白，所述两个亚基为：α亚基和β 亚基。重组形式的人TSH-α可从Genzyme Corp.以商标名"Thyrogen"获得。在另一实施 方案中，所述参照生物分子是抗体，如单克隆抗体。在一些实施方案中，所述参照生物分子 是糖基化的蛋白。
[0169] 在一些实施方案中，所述水性缓冲溶液包含至少一种氨基酸（例如，丙氨酸、精氨 酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、 赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸）或乙二醇 或丙二醇或乙二醇和丙二醇的组合物。换而言之，在这些实施方案中，如果所述水性缓冲溶 液包含一种或多种氨基酸，则乙二醇和丙二醇的浓度各为0 %。相反地，在这些实施方案中， 如果所述水性缓冲溶液包含乙二醇或丙二醇或两者，则所述一种或多种氨基酸的总浓度为 OmM0
[0170] 在第六方面的一些实施方案中，所述水性缓冲溶液包含0 % -60% (v/v)(如 1%_50% (v/v)、5%_40% (v/v)、8%_30% (v/v)、10%_25% (v/v)、15%_20% (v/v)) 的乙二醇。
[0171] 在那些实施方案中，其中所述水性缓冲溶液包含至少一种氨基酸，所述至少一种 氨基酸通常选自下组：丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、 亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸和缬氨酸。换而言之，在这些 实施方案中，通常不存在天冬氨酸、谷氨酸、色氨酸和酪氨酸。在那些实施方案中，其中所 述水性缓冲溶液包含至少一种氨基酸，所述至少一种氨基酸通常选自下组：丙氨酸、半胱氨 酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸和缬氨酸。换而言之，在这些实施方案 中，通常不存在天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙 氨酸、色氨酸和酪氨酸。在那些实施方案中，其中所述水性缓冲溶液包含至少一种氨基酸， 所述至少一种氨基酸通常选自下组：丙氨酸、甘氨酸、组氨酸和赖氨酸。换而言之，在这些 实施方案中，通常不存在天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、异亮氨酸、亮氨 酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
[0172] 在第六方面的一个实施方案中，所述至少一种Good' s缓冲液选自下组:MES、 MOPS、Tris、ADA、ACES、BES、Bi cine、CAPS、CAPSO、CHES、HEPES、PIPES、TAPS 和 TES。在一个 实施方案中，所述至少一种Good's缓冲液是MES。在另一实施方案中，所述至少一种Good's 缓冲液是MOPS。 实施例
[0173] 提出下列实施例以向本领域的技术人员提供如何制备和使用本发明中作为特征 的方法和组合物的完整公开和描述，而非意欲限制发明人看作其发明保护的范围。已作出 努力以确保关于使用的数字的精确性但应说明一些试验误差和偏差。
[0174] 实施例1 :伸用Good's缓冲液和氨基酸的组合解吸牛物分子
[0175] 在该实验中，生物分子阿加糖酶β (由Genzyme, Cambridge, MA制造的 Fabrazyme?)结合于多峰层析树脂 Capto? Adhere (GE Healthcare)并使用 MES 和 MOPS 解吸（参见表1和图1和2)。该表显示了详细的实验设计，其中在150mM至400mM的精氨 酸存在下，在5. 5至7. 5的pH范围内，测试了浓度为50mM至200mM的MES和浓度为20mM 至200mM的MOPS。在这些实验中对收率进行监测作为从层析树脂解吸的指示物。在给定的 缓冲条件下，〇%收率意指无解吸而100%意指生物分子的完全解吸。实验设计和分析使用 Design-Expert? 完成。
[0176] 表1:用MES和MOPS洗脱的实验设计和结果
[0177]<