采用酶联免疫检测技术定量检测食品中伏马毒素b1含量的试剂盒及其检测方法

专利名称：采用酶联免疫检测技术定量检测食品中伏马毒素b1含量的试剂盒及其检测方法
技术领域：
本发明属于食品免疫分析技术领域，涉及对食品和粮食作物中的 伏马毒素B1含量的检测，尤其是一种采用酶联免疫检测技术定量检 测食品中伏马毒素B1含量的试剂盒及其检测方法。
背景技术：
伏马毒素(Fumonisins， FBs)是1988年由南非科学家Gelderblom 等首次从F. verticilliodes (异名串珠镰孢F. mo"z/z/w附e Sheldon) MRC 826培养物中分离到的一组结构类似物，也称伏马菌素、腐马 素等。该毒素主要由串珠镰孢及多育镰孢(F. ; ra/z/erafww M加m^/"附a)产生，是以污染玉米为主的水溶性次级代谢产物。1989 年Laurent等从伏马毒素中分离出两种结构相似的有毒物质，分别被 命名为伏马毒素B,(FB,)和伏马毒素B2 (FB2)。到目前为止，己发现 有FB,、 FB2、 FB3、 FB4、 FA,、 FA2、 FC,、 FC2、 FC3、 FC4 、 FQ和 FP,等多种衍生物；其中，以FB,的毒性最强，污染水平最高。伏马毒素与疯牛病病毒、二恶英、大肠杆菌0-157和氯丙醇五种 污染物被认为是当今世界危及人类食品安全的五大毒素。国际上认为 伏马毒素是一种具有重大卫生学意义的真菌毒素，已形成继黄曲霉毒 素之后的又一个研究热点。世界卫生组织也将伏马毒素作为近几年需 要优先进行研究的几种真菌毒素之一。许多证据表明，伏马毒素能引 起动物各种疾病，可严重威胁人类和动物的健康及食品安全，也被认 为与人类食管癌的高发有关。1993年，国际癌症研究院(The International Agency for Research on Cancer)将伏马毒素定为2B组致 癌物质(可能是人类致癌物)。国际癌症研究机构(IARC)于1993对伏马毒素的毒性进行了评 价，JECFA(FAO/WHO食品添加剂联合专家委员会)于2001年第56 次会议确定伏马毒素的急、慢性无作用剂量值为20mg/kg七w，并将 伏马毒素B,、 B2、 B3 (单一或混合)的PMTDI (暂定每日耐受摄入 量)定为2pg/kg。由于资料不足，CCFAC (食品添加剂与污染物法 典委员)尚未规定伏马毒素的最高限量，我国目前也没有制定关于粮食与饲料中伏马毒素的限量标准。2001年美国食品与药物管理局 (FDA)发布了供人类食用的玉米和玉米产品伏马毒素最高限量指导性公告，规定人类食用玉米中伏马毒素最高限量为2mg/kg;另外， FDA的畜牧医学中心(CVM)也同时发布了动物饲料中伏马毒素的最 高限量指导性公告，规定其限量范围为5-100mg/kg;瑞士公共健康部 (Swiss Federal Office of Public Health)对伏马毒素在玉米中的限量也 作了规定，为每克干的玉米中含有的FB,和FB2总量小于lmg;而法 国公共卫生委员会(French Council of Public Hygiene)则推荐谷物中 的最大限量为3mg/kg。目前伏马毒素B1的测定方法有多种，如薄层层析法(TLC)、 气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法 (GC/MS)、毛细管电泳法(CE)、液相色谱-质谱法(LC/MS)和酶 联免疫测定法(ELISA)等方法。其中，国内外研究与应用较多的是 HPLC法，这是国际分析化学家协会(AOAC)的指定分析方法，在 伏马毒素的检测中最为常用。但是这种方法前处理过程繁琐，操作复 杂，在实验时需要对伏马毒素进行柱前衍生化处理，而且通常需要专 业人员进行操作，仪器设备昂贵，检测过程耗时且费用较高，不适于 大量样品的现场快速检测；酵联免疫测定法ELISA由于其特异性强， 灵敏度高，准确性好，操作简便，适于大批量样品的检测等优点越来 越受到人们的青睐。虽然很多科研机构和大专院校的科研人员对伏马 毒素B1酶联免疫分析检测方法进行了研究，但是检测的灵敏度和试 剂盒的稳定性方面离实际应用还有一定的距离。酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)的基本原理是将酶与抗原或抗体用交联剂结合起来，此种 酶标记抗原或抗体与待测样品中相应抗体或抗原发生特异反应，并牢 固结合；在加入相应的酶的底物时，底物被酶催化生成呈色物，可根 据该呈色物的有无和呈色深浅作定性或定量观察。由于此技术是建立 在抗原抗体反应和酶的高效催化作用的基础上，故而该技术具有检测 灵敏度高、特异性强、准确性好等特点。发明内容本发明的目的在于克服现有技术的不足而提供一个可定量检测 食品中及粮食作物中的伏马毒素B1含量的试剂盒及其检测方法，该 试剂盒结构简单、使用方便、价廉、灵敏度高，该检测方法检测的灵 敏度可达yg/kg级。本发明解决其技术问题是通过以下技术方案实现的 一种采用酶联免疫检测技术定量检测食品中伏马毒素B,含量的 试剂盒，包括试剂和96孔酶标板，该试剂盒的制备包括以下步骤(1) 制备伏马毒素B,-KLH抗原；(2) 制备多克隆伏马毒素B,抗体；(3) 制备酶标抗原；(4) 制备包被板；(5) 配制试剂。其中，制备伏马毒素B,-KLH抗原的方法是(1) 将大分子蛋白匙孔血兰蛋白KLH用戊二醛溶液溶解，3 5°C连 续搅拌15 18h,在缓冲液PBS中透析45 50h以除去过多的戊二醛；(2) 将伏马毒素B,溶于甲醇中，逐滴加入到已活化的大分子蛋白 KLH中，室温搅拌反应1 2 h，然后放于3-5。C连续搅拌15~20h过 夜，形成混合液；(3) 向混合液中加入硼氢化钠，连续搅拌3~5 h以封闭未反应的醛 基，形成反应液；(4) 将反应液装入透析袋，在缓冲液PBS中透析68~73 h;(5) 精确量取蛋白质偶联物溶液的体积并测定浓度，加入叠氮钠后 4"C保存。而且，所述的戊二醛溶液为50%的戊二醛溶于0.01 mol/L缓冲液 PBS中，其pH二7.4。而且，所述的制备多克隆伏马毒素B1抗体的方法是(1) 伏马毒素免疫原lmg溶于NaCl中，与弗氏完全佐剂乳化，制 得油包水抗原乳化剂；(2) 利用新西兰大白兔作为免疫动物进行皮下多点注射，进行初次 免疫，在初次免疫14天后进行加强免疫，免疫原剂量为0.5mg，用 弗氏不完全佐剂进行乳化，以后每隔三十天左右加强免疫一次，共免 疫6次左右，每次免疫10天后对动物试采血进行血清效价测定和亲 和力测定；(3) 末次免疫后采用颈动脉采血法对动物采全血，经离心处理后收 集全部血清，采取免疫亲合层析法进行抗体纯化，所得抗体添加 0.1%W/V的叠氮钠后于3 5'C储存备用。5.根据权利要求1所述的采用酶联免疫检测技术定量检测食品中 伏马毒素B,含量的试剂盒，其特征在于所述的制备酶标抗原的方法是(1) 将辣根过氧化酶HRP加入1 mol/L高碘酸钠溶液并于室温活 化15 25min，然后对1 mM醋酸钠缓冲液透析过夜，形成活化的辣 根过氧化酶HRP;(2) 向活化后的HRP中加入伏马毒素B,，室温搅拌反应1 3 h后， 向反应液中加入O.l mL的l mol/L硼氢化钠溶液终止反应，该反应 过程在3~5 。C下进行0.5~1.5h;(3) 将所有反应液放入透析袋中对0.01 mol/L的缓冲液PBS透析 70~73 h。而且，所述的制备包被板的方法是用pH9.6的Na2C03~~NaHC03的缓冲液将伏马毒素B,抗体稀释 为lHg/100nL作为包被液，微孔板每孔各加入100pL，室温放置过夜 或者36 38'C恒温温育2 3h，洗涤液洗涤三次除去包被液，加入冻干 液封闭0.5 1.5小时，洗涤液洗漆四次后，冻干，3 5"C保存。而且，所述的试剂盒体内的试剂构成及其制备方法为-(1) 缓冲液PBS:其构成包括Na2HPCV12H20、 NaH2P(V2 H20及 NaCl，加双蒸水稀释，在使用时l: 5倍稀释；(2) 伏马毒素B1标准液以伏马毒素B,纯品配制的母液中稀释得 到，母液所用溶剂为色谱纯甲醇，稀释液为5%甲醇磷酸盐缓冲液， 共六瓶，浓度分别为10pg/L，3.33ng/L， 1.11pg/L，0.37ng/L，0.123^ig/L， 0.041|Xg/L;(3) 冻干液Tris溶于lOOmL双蒸水中，盐酸调节pH7.4，加入 蔗糖、乳糖、牛血清蛋白和抗坏血酸；(4) 底物A:其构成为无水醋酸钠、P"糊精及过氧化氢脲，加双 蒸水稀释后，调pH至5.0左右，3 5i:保存；(5) 底物B: 50mg溶于二甲基亚砜5mL;(6) 洗涤液含0.05XTween20的PBS水溶液；(7) 基质隐蔽剂0.5%鱼皮胶PBS溶液；(8) 酶标抗原。而且，取包被有伏马毒素B1抗体的微孔包被板，加入伏马毒素 B,标准或处理好的样品到各微孔中，再加入酶标抗原(即伏马毒素 B1-HRP)，震荡反应0.5 1.5h，洗涤液洗涤，提前混合底物A和底物 B作为底物液并加入到微孔中，反应0.4~0.6h后每孔加入1.25mol/L硫酸中止反应，测定吸光度值，对照标准曲线计算样品中的伏马毒素 B,含量。而且，所述的伏马毒素B,样品的处理方法为取各种谷物样品各8 12g，分别向各种加标样品中加入30 50mL萃取液，于混合振 荡器上200-300 rpm振荡萃取10 20 min，静置10~20 min后，取部 分上清用基质掩蔽剂稀释后即可。


图1为本发明伏马毒素B,-ELISA标准曲线图；具体实施方式
下面结合实施例说明本发明，这里所述实施例的方案不限制本发 明；本领域的专业人员按照本发明的方案可以对其进行改进和变化， 这些改进和变化都应视为在本发明的范围内，本发明的范围和实质由 权利要求来限定。一、制备试剂盒1. 伏马毒素B,-KLH抗原的制备称取10mg大分子蛋白匙孔血兰蛋白(KLH)(以下简称KLH)， 用10mL0.2%戊二醛(50%戊二醛溶于0.01 mol/LPBS (缓冲液，以 下简称PBS)中，pH7.4)溶解，4'C连续搅拌16 h，在0.01 mol/LPBS (pH 7.4)中透析48 h除去过多的戊二醛。取lmg FB,溶于0.4 mL 甲醇中，逐滴加入到已活化的KLH中，室温搅拌反应2h，然后放于 4。C连续搅拌过夜(16h)，最后向混合液中加入12mg硼氢化钠，连 续搅拌4h以封闭未反应的醛基。最后将反应液装入透析袋，在PBS 中透析72h，然后精确量取蛋白质偶联物溶液的体积并测定浓度，加 入叠氮钠后4-C保存。该伏马毒素B,是一种小分子半抗原，分子量为721，只有反应原 性而无免疫原性，需要与载体蛋白偶联后才能使动物产生免疫应答。 伏马毒素Bl第2位碳原子上的氨基是偶联的最佳部位，因此可以用 戊二醛法将伏马毒素Bl分子中的氨基和大分子蛋白KLH相结合， 以合成的伏马毒素B1-KLH作为免疫原进行动物免疫。2. 多克隆伏马毒素Bl抗体的制备免疫动物选择日本大耳白兔3只，月龄3个月，体重1.5公斤左 右，分别编号为l号、2号和3号。免疫采取皮下和肌肉注射法共同 进行。免疫程序初次免疫为提高抗原的免疫性，采用由弗氏完全佐剂乳化的免疫原，剂量为lmg (溶于1 mL0.9。/。的NaCl和1 mL的弗 氏完全佐剂)。加强免疫初次免疫后第14天进行加强免疫，剂量为 0.5 mg (溶于1 mL 0.9%的NaCl及1 mL的弗氏不完全佐剂)。以后每隔30天加强免疫一次，共免疫6次。从第2次加强免疫开始，每 次免疫IO天后对动物试采血进行血清效价测定和亲和力测定。末次 免疫后采用颈动脉采血法对动物采全血，经离心处理后收集全部血 清，采取免疫亲合层析法进行抗体纯化，所得抗体添加0.1% (W/V)的叠氮钠后于4t:储存备用。3. 醸标抗原的制备准确称取2.0 mg HRP，加入1 mol/L高碘酸钠溶液于室温活化 20 min，然后对1 mM醋酸钠缓冲液(pH 4.4)透析过夜。向活化后的 HRP中加入1.0mL伏马毒素B,(lmg伏马毒素B,溶于lmLpH9.5 的碳酸盐缓冲液中)，室温搅拌反应2h后，向反应液中加入O.lmLl mol/L的硼氢化钠溶液终止反应，该过程在4 。C下进行1 h。最后将 所有反应液放入透析袋中对0.01 mol/L的PBS透析72 h。4. 包被板的制备伏马毒素B,抗体包被于微孔板中，用pH9.6 Na2C03~~NaHC03 的缓冲液将伏马毒素B1抗体稀释为lpg/100^iL作为包被液，96孔(或 48孑L)微孔板每孔各加入100nL，室温放置过夜或者37X:恒温温育 2-3小时，洗涤液洗涤三次除去包被液，加入20(HiL冻干液封闭1小 时，洗涤液洗涤四次后，冻干，4"C保存。5. 试剂的配制缓冲液(PBS): Na2HP0412H20: 68.8g， NaH2P042 H20: 8.97g， NaCl: 45g加双蒸水至lL，使用时1: 5倍稀释；冻干液0.121gTris溶于100mL双蒸水中，盐酸调节pH7.4，加 入lg蔗糖、lg乳糖、2g牛血清蛋白和0.8g抗坏血酸。底物A:无水醋酸钠8.2g ， p—糊精2.5g，过氧化氢脲429 mg加双蒸水至1000mL，调pH至5.0， 4t:保存；底物B: 50mg溶于二甲基亚砜(DMSO) 5 mL;洗涤液含0.05%Tween20的PBS水溶液；终止液1.25mol/L硫酸；伏马毒素Bl标准液，以伏马毒素Bl纯品配制的母液中稀释得 到，母液所用溶剂为色谱纯甲醇，稀释液为5%甲醇磷酸盐缓冲液， 共六瓶，浓度分别为10ng/L，3.33^ig/L,l.ll吗/L，0.37^ig/L,0.123^ig/L， 0.041pg/Lo基质隐蔽剂0.5M鱼皮胶PBS溶液试剂盒提供的试剂-1x96孔板，(8条xl2孔，可以进行拆分)包被有伏马毒素Bl 抗体；6x伏马毒素Bl标准液，1.0mL/瓶，标准液浓度为10pg/L， 3.33ng/L， 1.11pg/L， 0.37ng/L， 0.123pg/L， 0.041吗/L; lx伏马毒素Bl-HRP，用时PBS1: IOOO稀释； lx底物A， 15mL; lx底物B, lmL;lx洗涤液，30mL，用时以蒸馏水l: 5稀释； lx缓冲液，30mL; lx终止液，5mL; 1X基质隐蔽剂，10mL。 测定之前注意事项(1) 使用之前将所有试剂恢复室温(15-3(TC);(2) 使用之后立即将所有试剂放回4°C;(3) 如果样品量大建议使用多通道移液器。二、 检測谷物样品(以玉米为例)玉米经粉碎机分别充分粉粹成粉末状，于干燥箱中50 。C烘干， -20°<:储存备用。分别取玉米样品各10g，加入40 mL萃取液(75% 甲醇/水，V : V)，于混合振荡器上250 rpm振荡萃取15 min，静置 10-20 min后，取部分上清用基质掩蔽剂15倍稀释后用于ELISA测 定。加标试验中，分别向样品其中添加不同浓度的FB,，将加标样品 充分混匀，室温静置过夜。其余处理过程同上。三、 检測方法取包被有伏马毒素B,抗体的冻干板条，加酶标抗原和标样(或 样品提取液)每孔先加入IOO 伏马毒素B,标样溶液或样品提取 液，然后加入100ML酶标抗原溶液，以不加FB,标样的孔为对照孑L。 室温反应lh，然后用PBST洗液洗板3次；在每孔中加入150^iL底 物液，室温下反应30min;每孔加入50nL终止液，终止反应；在双 波长方式(450-650 nm)下用酶标仪读取吸光度值。在对玉米样品的检 测中，分别在25(Hig/kg和50(Hig/kg水平进行加回收试验，其回收率 为103%和86%。本发明的工作原理是采用酶联免疫检测技术定量检测伏马毒素Bl，其测定的基础是酶标记免疫反应，微孔板包被伏马毒素Bl抗体，加入伏马毒素Bl 标准或样品，再加入伏马毒素B1和辣根过氧化物酶(HRP)连接物， 游离的伏马毒素Bl和伏马毒素Bl—HRP连接物共同竞争伏马毒素 Bl抗体，没有连接的伏马毒素Bl被洗涤除去，加入反应底物，在 HRP酶催化下反应体系显色，加入中止液后用酶标仪测定其吸光度， 吸光度值与样品中的伏马毒素B1浓度成反比，对照标准曲线(图1) 即可以确定被测样品中的伏马毒素B1的含量。本发明主要采用酶联免疫分析检测技术来检测伏马毒素Bl，可 实现对食品中及粮食作物中的伏马毒素B1的定量检测的目的；并且 本试剂盒结构简单、使用方便、价廉、灵敏度高；其检测方法特异性 强，灵敏度高，准确性好，其灵敏度可以达到lig/kg级。
权利要求
1. 一种采用酶联免疫检测技术定量检测食品中伏马毒素B1含量的试剂盒，包括试剂和96孔酶标板，其特征在于该试剂盒的制备包括以下步骤(1)制备伏马毒素B1-KLH抗原；(2)制备多克隆伏马毒素B1抗体；(3)制备酶标抗原；(4)制备包被板；(5)配制试剂。
2. 根据权利要求1所述的采用酶联免疫检测技术定量检测食品中 伏马毒素B,含量的试剂盒，其特征在于制备伏马毒素B,-KLH抗原的方法是(1) 将大分子蛋白匙孔血兰蛋白KLH用戊二醛溶液溶解，3 5'C连 续搅拌15 18h，在缓冲液PBS中透析45 50h以除去过多的戊二醛;(2) 将伏马毒素B广溶于甲醇中，逐滴加入到己活化的大分子蛋白 KLH中，室温搅拌反应1~2 h，然后放于3 5。C连续搅拌15~20h过 夜，形成混合液；(3) 向混合液中加入硼氢化钠，连续搅拌3~5 h以封闭未反应的醛 基，形成反应液；(4) 将反应液装入透析袋，在缓冲液PBS中透析68 73 h;(5) 精确量取蛋白质偶联物溶液的体积并测定浓度，加入叠氮钠后 4'C保存。
3. 根据权利要求2所述的采用酶联免疫检测技术定量检测食品中 伏马毒素B,含量的试剂盒，其特征在于所述的戊二醛溶液为50% 的戊二醛溶于0.01 mol/L缓冲液PBS中，其pH =7.4。
4. 根据权利要求1所述的采用酶联免疫检测技术定量检测食品中 伏马毒素B,含量的试剂盒，其特征在于所述的制备多克隆伏马毒素 Bl抗体的方法是(1) 伏马毒素免疫原lmg溶于NaCl中，与弗氏完全佐剂乳化，制 得油包水抗原乳化剂；(2) 利用新西兰大白兔作为免疫动物进行皮下多点注射，进行初次 免疫，在初次免疫14天后进行加强免疫，免疫原剂量为0.5mg，用 弗氏不完全佐剂进行乳化，以后每隔三十天左右加强免疫一次，共免 疫6次左右，每次免疫10天后对动物试采血进行血清效价测定和亲和力测定；(3)末次免疫后采用颈动脉采血法对动物采全血，经离心处理后收 集全部血清，采取免疫亲合层析法进行抗体纯化，所得抗体添加 0.1%W/V的叠氮钠后于3-5'C储存备用。
5. 根据权利要求1所述的采用酶联免疫检测技术定量检测食品中 伏马毒素B,含量的试剂盒，其特征在于所述的制备酶标抗原的方法 是(1) 将辣根过氧化酶HRP加入1 mol/L高碘酸钠溶液并于室温活 化15 25min，然后对1 mM醋酸钠缓冲液透析过夜，形成活化的辣 根过氧化酶HRP;(2) 向活化后的HRP中加入伏马毒素BP室温搅拌反应1 3 h后， 向反应液中加入O.l mL的l mol/L硼氢化钠溶液终止反应，该反应 过程在3 5 。C下进行0.5~1.5h;(3) 将所有反应液放入透析袋中对0.01 mol/L的缓冲液PBS透析 70~73 h。
6. 根据权利要求1所述的采用酶联免疫检测技术定量检测食品中 伏马毒素B,含量的试剂盒，其特征在于:所述的制备包被板的方法是:用pH9.6的Na2C03—NaHC03的缓冲液将伏马毒素B,抗体稀释 为lpg/100nL作为包被液，微孔板每孔各加入100kiL，室温放置过夜 或者36 38'C恒温温育2 3h，洗涤液洗涤三次除去包被液，加入冻千 液封闭0.5 1.5小时，洗涤液洗涤四次后，冻干，3 5T:保存。
7. 根据权利要求1所述的采用酶联免疫检测技术定量检测食品中 伏马毒素B,含量的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒体内的试剂构 成及其制备方法为(1) 缓冲液PBS:其构成包括Na2HP(V12H20、 NaH2P04'2 H20及NaCl，加双蒸水稀释，在使用时l: 5倍稀释；(2) 伏马毒素B1标准液以伏马毒素B,纯品配制的母液中稀释得 到，母液所用溶剂为色谱纯甲醇，稀释液为5%甲醇磷酸盐缓冲液， 共六瓶，浓度分别为1(Hig/L， 3.33ng/L， 1.1 lng/L， 0.37pg/L， 0.123pg/L， 0麓ng/L;(3) 冻干液Tris溶于100mL双蒸水中，盐酸调节pH7.4，加入 蔗糖、乳糖、牛血清蛋白和抗坏血酸；(4) 底物A:其构成为无水醋酸钠、卩一糊精及过氧化氢脲，加双 蒸水稀释后，调pH至5.0左右，3 5'C保存；(5) 底物B: 50mg溶于二甲基亚砜5mL;(6) 洗涤液含0.05%Tween20的PBS水溶液；(7) 基质隐蔽剂0.5。/。鱼皮胶PBS溶液；(8) 酶标抗原。
8. —种如权利要求1所述的采用酶联免疫检测技术定量检测食品 中伏马毒素B,含量的试剂盒的检测方法，其特征在于取包被有伏马 毒素Bl抗体的微孔包被板，加入伏马毒素B,标准或处理好的样品到 各微孔中，再加入酶标抗原(即伏马毒素B1-HRP)，震荡反应 0.5~1.5h，洗涤液洗涤，提前混合底物A和底物B作为底物液并加入 到微孔中，反应0.4 0.6h后每孔加入L25mol/L硫酸中止反应，测定 吸光度值，对照标准曲线计算样品中的伏马毒素B,含量。
9. 根据权利要求8所述的采用酶联免疫检测技术定量检测食品 中伏马毒素Bi含量的试剂盒的检测方法，其特征在于所述的伏马毒 素B,样品的处理方法为取各种谷物样品各8 12 g，分别向各种加 标样品中加入30 50mL萃取液，于混合振荡器上200-300 rpm振荡 萃取10 20min，静置10 20min后，取部分上清用基质掩蔽剂稀释 后即可。
全文摘要
本发明属涉及一种采用酶联免疫检测技术定量检测食品中伏马毒素B1含量的试剂盒及其检测方法，其试剂盒包括制备伏马毒素B₁-KLH抗原；制备多克隆伏马毒素B₁抗体；制备酶标抗原；制备包被板；配制试剂。本发明主要采用酶联免疫分析检测技术来检测伏马毒素B1，可实现对食品中及粮食作物中的伏马毒素B1定量检测的目的；并且本试剂盒结构简单、使用方便、价廉、灵敏度高；其检测方法特异性强，灵敏度高，准确性好，其灵敏度可以达到μg/kg级。
文档编号G01N33/543GK101231291SQ200710056559
公开日2008年7月30日 申请日期2007年1月25日 优先权日2007年1月25日
发明者燕 张, 英 权, 硕 王, 王向红, 郑文杰 申请人:天津科技大学